本发明涉及一种新型替尼类化合物及其制备方法，及其在制备抗肿瘤化合物中的应用。
背景技术：
吉非替尼(gefitinib，伊瑞可，易瑞沙)是一种口服表皮生长因子受体酪氨酸激酶(egfr-tk)抑制剂，是第一个被批准用于治疗非小细胞肺癌的分子靶向药物。其结构式如下：
吉非替尼药物小分子可以和表皮生长因子受体络氨酸激酶进行可逆的结合，从而竞争性阻止atp与络氨酸激酶相结合，从而阻止络氨酸激酶自身的磷酸化。这将阻断细胞抗凋亡信号以及细胞增殖信号通路的转导，从而抑制癌细胞的增长。吉非替尼的耐受性良好，对非小细胞肺癌具有良好的治疗效果，正是由于吉非替尼对非小细胞肺癌良好的疗效。
尽管非小细胞肺癌与egfr以及相应配体的过量表达有关，但是并没有直接的证据能够表明egfr以及相应配体的过量表达程度与吉非替尼药物疗效之间的关系。临床结果显示，吉非替尼对没有吸烟史的患者，女性患者以及日本患者具有较好的疗效。后续的研究发现，对于具有egfr络氨酸激酶区基因突变的患者，往往具有较好的疗效。这种突变是由于19号外显子碱基缺失以及21号外显子突变所造成的。这些患者使用吉非替尼进行治疗的效果往往较化疗的治疗效果好。所以在非小细胞肺癌的治疗中，采用基因筛选的方式来确定患者治疗的方式，吉非替尼在具有的这类突变的患者中具有55％的有效治疗率。
在安全性方面，吉非替尼的不良反应主要是皮疹与腹泻。在与化疗相比，采用吉非替尼治疗的患者在生命质量以及病症改善方面均具有优势。吉非替尼的系列化合物如厄洛替尼、埃克替尼等，也已经广泛的应用于晚期非小细胞肺癌的治疗。
因此，在保留喹唑啉环系骨架结构的基础上，如何设计得到吉非替尼的系列化合物，对寻找新的抗肿瘤药物具有重要的意义。
技术实现要素：
为了解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种新型替尼类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供了一种结构式(ⅰ)所示的新型替尼类化合物：
其中，r1选自芳基或杂芳基，其中芳基或芳杂基被一个或多个选自烷基、卤素、芳基、炔基、氰基、三氟甲基、甲氧基、卤代苄基所取代；
r2为1,4,7,10-四氮杂环十二烷或1,4,7-三氮杂环壬烷。
其中，烷基为乙基。
卤素为氟、氯、溴、碘中的一种。
本发明的新型替尼类化合物具体为：
本发明结构式(ⅰ)所示的化合物的制备方法，如下所示：
当r2为1,4,7,10-四氮杂环十二烷时，其合成路线为：
当r2为1,4,7-三氮杂环壬烷时，其合成路线为：
本发明还提供了所述的新型替尼类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明又提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的结构式(ⅰ)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐及药学上可接受的载体。
本发明又提供了所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的替尼类化合物对a549和a431细胞系均有明显抑制作用，能明显促进a549的细胞凋亡，并且效果明显优于吉非替尼。
附图说明
图1为本发明化合物在1μm浓度时对a549细胞凋亡的影响；
图2为本发明化合物在3μm浓度时对a549细胞凋亡的影响；
图3为本发明化合物在5μm浓度时对a549细胞凋亡的影响；
图4为吉非替尼在5μm的浓度时对a549细胞凋亡的影响；
图5为本发明化合物与egfr蛋白分子的对接结果图；
图1～4的流式细胞图中横，纵坐标代表的是两个检测指标的相对荧光强度。其中横坐标代表fitc的荧光强度，纵坐标代表pi的荧光强度；
r2：(annexinv-fitc)-/pi+，此区域的细胞为坏死细胞，也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中；
r3:(annexinv+fitc)+/pi+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞；
r4：(annexinv-fitc)-/pi-，此区域的细胞为活细胞；
r5：(annexinv-fitc)+/pi-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。实施例所用原料和试剂均为市售产品。
实施例1
(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备
步骤一：(7-甲氧基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉)-6-基-乙酸酯的合成
在50ml的圆底烧瓶加入6-羟基-7-甲氧基-3h-喹唑啉-4-酮(1g，5.2mmol)，醋酸酐(20ml)及吡啶(4ml)，体系在100℃下反应6h，tlc检测原料反应完全。将反应体系冷却至室温，将圆底烧瓶放至冰水浴搅拌。然后将悬浊液转移至500ml圆底烧瓶中，在冰水浴的条件下，加入300ml冰水，搅拌20min，有大量白色固体析出。抽滤，然后用水洗涤滤饼两次，放入烘箱干燥，所得白色固体即为(7-甲氧基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉)-6-基-乙酸酯，收率51％。
步骤二：4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯的合成
在50ml圆底烧瓶中加入步骤一制得的(7-甲氧基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉)-6-基-乙酸酯(1g)、二氯亚砜(15ml)、n,n-二甲基甲酰胺(75μl)，于90℃下反应2h。tlc检测反应完全。待反应体系冷却至室温，将体系减压旋蒸，旋干后在冰水浴的条件下向圆底烧瓶中加入30ml冰水，并剧烈搅拌。然后将悬浊液转移至分液漏斗中，并加入60ml三氯甲烷和30ml饱和氯化钠水溶液萃取。将所得的三氯甲烷溶液干燥后，过滤除去硫酸钠，将三氯甲烷溶液减压旋蒸，得白色固体即为4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯，收率90.2％。
步骤三：4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯的合成
在250ml圆底烧瓶中加入步骤二制得的4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯(1.1g)、150ml乙腈、3-氯-4-氟苯胺(0.96g，1.2eq)。将反应体系加热至90℃，反应持续1h。tlc检测反应完全，并可观察到产生大量沉淀。待反应体系冷却后，抽滤，用乙腈洗涤滤饼，放入烘箱干燥，所得白色固体即为4–((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯，收率91.2％。
步骤四：4–((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基-6-醇的合成
在100ml的圆底烧瓶中加入步骤三制得的4–((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸酯(1g)、甲醇(40ml)及质量分数为25％的氨水2ml，将反应体系加热至75℃冷凝回流反应2h，反应体系中有大量白色固体析出。tlc检测原料反应完全。待反应体系慢慢冷却到室温，将悬浊液过滤，用甲醇洗涤滤饼两次，放入烘箱干燥，即得4–((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基-6-醇，收率72％。
步骤五：1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯的合成
在200ml的圆底烧瓶中加入1,4,7,10-四氮杂环十二烷(2g)、三氯甲烷(50ml)、三乙胺(11.2ml，7.2eq)于室温下搅拌，将30ml溶解有二碳酸二叔丁酯(6.87g，2.7eq)的三氯甲烷溶液在室温恒速滴加进体系，反应6h后，tlc点板检测反应结束，减压旋蒸浓缩，柱层析分离提纯(展开剂：石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯(3.73g)，产物为无色油状，收率68％。
步骤六：10-(3-氯丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯的合成
在250ml圆底烧瓶中加入步骤五制得的1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯(2.7g)、乙腈(150ml)、碳酸钾(2g)、1-溴-3-氯丙烷(2.28ml，4eq)、碘化钠(0.5eq)，加热至90℃回流反应72h，tlc检测反应完全。待反应体系冷却至室温，抽滤除去无机盐，浓缩。柱层析分离提纯(展开剂：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)，得10-(3-氯丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯(1.71g)，收率56％。
步骤七：10-(3-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯的合成
在100ml圆底烧瓶中加入0.67g的4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基-6-醇、30mldmf、碳酸钾(0.9g，3eq)、步骤六制得的10-(3-氯丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯(1.27g,1.1eq)，将反应体系加热至130℃，反应6h。tlc跟踪反应完全。待反应体系冷却至室温，旋去溶剂dmf用乙酸乙酯溶解产物，过滤除去不溶物。采用硅胶柱层析的方法将产物分离提纯(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝10:1)，得到10-(3-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯为淡黄色固体1.13g，收率66％。
步骤八：(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的合成
在100ml的圆底烧瓶中加入0.859g的步骤七制得的10-(3-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1,4,7-三羧酸三叔丁酯、45ml甲醇在室温下剧烈搅拌。将12mol/l的浓盐酸15ml加入到圆底烧瓶中，继续搅拌。6h后，tlc检测发现原料反应完全。停止搅拌，将悬浊液进行过滤，并用甲醇将滤饼洗涤两次，即得白色固体化合物(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺(0.59g)，收率80.4％。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.52(s,1h),7.60-7.58(m,2h),7.39-7.37(m,1h),7.10-7.08(t,j＝8.96,7.03hz,2h),4.17-4.15(t,j＝6.21hz,2h),3.98(s,3h),3.16-3.10(m,8h),2.93-2.85(m,10h),2.02-2.05(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.27,156.58,154.09,149.55,147.83,134.51,132.60,125.05,123.42,119.99,116.44,106.91,103.46,99.52,68.30,56.88,49.61,48.03,44.04,42.04,23.19.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h35clfn7o2[m+h]+:532.2603.found:532.2597
实施例2
(3-乙炔基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.53(s,1h),7.75-7.73(dd,j＝5.93,2.54hz,1h),7.61(s,
1h),7.46-7.42(m,1h),7.11-7.07(t,j＝8.75hz,2h),4.20-4.17(t,j＝5.65hz,2h),4.01(s,
3h),3.17-3.09(m,8h),2.93-2.86(m,10h),2.05-2.03(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.42,156.50,149.53,147.72,135.85,134.51,130.04,129.08,126.60,124.19,121.98,106.99,103.50,99.55,82.63,79.24,68.31,56.85,49.41,47.91,44.07,41.98,23.17.
实施例3
(3-溴苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.52(s,1h),7.71(s,1h),7.65(s,1h),7.46-7.44(d,j＝8.30hz,1h),7.37-7.35(d,j＝7.52hz,1h),7.26-7.22(t,j＝8.04hz,1h),7.10(s,1h),4.20-4.18(t,j＝5.71hz,2h),4.00(s,3h),3.16-3.09(m,8h),2.91-2.83(m,10h)2.04-2.01(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.02,156.38,149.55,147.56,137.04,134.38,130.10,129.05,125.37,121.53,106.86,103.32,99.43,68.33,56.88,49.60,48.05,44.02,42.07,23.15.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h36brn7o2[m+h]+:558.2192.found:558.2185.
实施例4
(4-溴-2-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.48(s,1h),7.60-7.57(d,j＝11.41hz,2h),7.50-7.48(d,j＝7.06hz,1h),7.33-7.32(m,2h),7.05(s1h),4.15-4.12(t,j＝5.98hz,2h),3.98(s,3h),3.55(s,5h),3.30-3.27(t,j＝5.98hz,4h),2.99-2.96(t,j＝5.98hz,4h),2.90-2.86(m,2h),2.04-2.00(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ158.85,157.28,154.90,149.68,148.22,135.02,128.85,128.01,122.48,121.09,119.79,107.26,103.71,99.75,68.12,56.93,49.59,48.00,44.05,42.00,23.27.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h35brfn7o2[m+h]+:576.2098.found:576.2085.
实施例5
(3-溴-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.50(s,1h),7.59(s,1h),7.34-7.26(m,3h),7.17(s1h),4.14-4.11(t,j＝5.92hz,2h),4.02(s,3h),3.56(s,4h),3.32-3.29(t,j＝5.92hz,4h),3.04-3.01(t,j＝5.92hz,4h),2.96-2.92(t,j＝7.82hz,2h),2.11-2.07(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ156.99,156.59,156.51,149.53,147.76,134.41,132.89,127.45,123.84,116.07,107.91,106.83,103.40,99.51,68.31,56.91,49.68,48.08,44.02,42.07,23.21.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h35brfn7o2[m+h]+:576.2098.found:514.1658.
实施例6
(3-氯-4–((3-氟苄基)甲氧基)苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.45(s,1h),7.43(s,1h),7.31(s,1h),7.19(t,j＝7.6hz,2h),6.90(t,j＝8.2hz,1h),6.78(d,j＝7.4hz,1h),6.62(d,j＝13.7hz,2h),6.41(d,j＝8.8hz,1h),4.18(s,2h),4.04(s,2h),3.41(s,3h),3.22-2.74(m,18h),2.01(s,2h).
hrms(esi)m/zcalcdforc33h41clfn7o3[m+h]+:638.3022.found:638.3009
13cnmr(101mhz,d2o)δ163.40,160.95,158.71,155.22,149.07,147.13,138.05,133.79,129.83,123.04,121.38,120.32,114.01,111.37–111.17(m),106.29,102.73,98.60,67.78,55.96,49.68,48.85,48.21,44.03,42.03,23.64.
实施例7
(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.63(s,1h),7.90(d,j＝2.5hz,1h),7.73(dd,j＝8.7,2.5hz,1h),7.59(s,1h),7.26(d,j＝8.8hz,1h),7.04(s,1h),4.17(t,j＝5.8hz,2h),3.99(s,3h),3.13(dd,j＝17.4,12.3hz,8h),3.02-2.80(m,10h),2.04(dd,j＝10.1,5.3hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ156.68,149.63,147.62,135.11,134.38,131.32,127.12,126.58,126.07,123.39,120.75,106.65,103.10,99.45,68.46,68.09-67.85(m),56.90,49.45,47.96,44.08,42.02,23.14.
hrms(esi)m/zcalcdforc27h35clf3n7o2[m+h]+:582.2571.found:582.2559.
实施例8
(3-三氟甲基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.54(s,1h),7.90(s,1h),7.72(dd,j＝5.4,3.5hz,1h),7.66(s,1h),7.52(d,j＝0.9hz,2h),7.02(s,1h),4.17(s,2h),3.96(s,3h),3.12(dd,j＝13.3,8.1hz,8h),3.04-2.75(m,10h),2.05-1.89(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.72,156.61,149.61,147.86,136.32,134.55,130.31,129.99,127.21,124.97,123.34,122.27,120.68,106.93,103.50,99.34,68.35,56.79,49.31,47.83,44.07,41.97,23.03.
hrms(esi)m/zcalcdforc27h36f3n7o2[m+h]+:548.2961.found:548.2947.
实施例9
(3-氯苯)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.52(s,1h),7.61(s,1h),7.54(t,j＝2.0hz,1h),7.44-7.36(m,1h),7.26(t,j＝8.1hz,1h),7.19-7.09(m,1h),7.04(s,1h),4.16(t,j＝5.9hz,2h),3.98(s,3h),3.12(dd,j＝15.4,10.2hz,8h),3.01-2.67(m,10h),2.01(dt,j＝8.1,5.6hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.28,156.48,149.57,147.66,136.93,134.50,133.57,130.00,126.36,122.94,121.46,106.95,103.40,99.45,68.35,56.84,49.44,47.93,44.07,42.00,23.15.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h36cln7o2[m+h]+:514.2697.found:514.2682.
实施例10
(3-甲氧基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.47(s,1h),7.59(s,1h),7.24(t,j＝8.1hz,1h),7.07(t,j＝4.3hz,2h),7.02(s,1h),6.79-6.74(m,1h),4.14(t,j＝5.9hz,2h),3.96(s,3h),3.71(s,3h),3.12(dd,j＝14.6,9.4hz,8h),3.00-2.69(m,10h),2.05-1.93(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ158.86,157.37,156.33,149.37,147.65,136.84,134.38,129.84,116.14,111.92,109.46,106.95,103.56,99.40,68.29,56.79,55.34,49.43,47.94,44.06,42.01,23.09.
hrms(esi)m/zcalcdforc27h39n7o3[m+h]+:510.3193.found:510.3176.
实施例11
(3-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.51(s,1h),7.66(s,1h),7.43-7.25(m,3h),7.07(s,1h),7.02(td,j＝8.4,1.8hz,1h),4.18(t,j＝5.9hz,2h),3.96(s,3h),3.12(dd,j＝15.7,10.5hz,8h),2.93(d,j＝4.9hz,8h),2.87(dd,j＝9.4,6.4hz,2h),2.04(dd,j＝10.6,5.5hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ163.19,160.78,157.27,156.48,149.51,147.65,137.13,134.46,130.32,119.17,113.38,110.59,106.83,103.34,99.43,68.21,56.80,49.89,48.29,43.91,42.22,23.01.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h36fn7o2[m+h]+:498.2993.found:498.2980.
实施例12
(3-碘苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.43(s,1h),7.73(t,j＝1.8hz,1h),7.44(s,1h),7.40-7.32(m,1h),7.29(d,j＝8.2hz,1h),6.91(s,1h),6.88(t,j＝8.0hz,1h),4.05(t,j＝5.8hz,2h),3.92(s,3h),3.05(dd,j＝14.2,9.1hz,8h),2.85(d,j＝22.5hz,8h),2.74(dd,j＝9.5,6.4hz,2h),1.90(dd,j＝10.3,5.2hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ156.70,156.27,149.53,147.46,136.77,134.82,134.21,130.84,129.98,121.70,106.76,103.28,99.43,93.42,68.37,56.95,49.57,48.03,44.03,42.06,23.21.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h36in7o2[m+h]+:606.2053.found:606.2031.
实施例13
(2,4-二氯苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.48(s,1h),7.73(s,1h),7.58(d,j＝2.3hz,1h),7.43(d,j＝8.6hz,1h),7.35(dd,j＝8.6,2.3hz,1h),7.22(s,1h),4.20(t,j＝5.9hz,2h),4.04(s,3h),3.13(dd,j＝17.9,12.6hz,8h),3.02-2.76(m,10h),2.09(td,j＝11.2,5.9hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ158.99,157.08,149.68,148.11,134.79,133.97,131.53,129.78,128.02,107.04,103.61,99.61,68.30,56.94,51.51,47.22,43.40,41.87,23.75.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h35cl2n7o2[m+h]+:548.2308.found:548.2293.
实施例14
5-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)氨基-2-氟苯腈的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.57(s,1h),7.91(dd,j＝5.3,2.6hz,1h),7.85-7.75(m,1h),7.64(s,1h),7.22(t,j＝8.9hz,1h),7.09(s,1h),4.19(t,j＝5.4hz,2h),3.99(s,3h),3.18(s,4h),3.12(d,j＝4.7hz,4h),2.96(d,j＝12.4hz,8h),2.94-2.87(m,2h),2.08(s,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ161.54,158.98,157.42,156.90,149.71,148.10,134.76,132.80,130.72,127.70,116.86,113.64,106.96,103.47,100.25-99.56(m),68.31,56.97,49.90,48.26,43.94,42.17,23.14.
hrms(esi)m/zcalcdforc27h35fn8o2[m+h]+:523.2945.found:523.2932.
实施例15
(4-溴-2-乙基苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例1相似的步骤得到目标化合物
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.32(s,1h),7.68(s,1h),7.48(d,j＝1.9hz,1h),7.22(dd,j＝8.4,1.9hz,1h),7.12(s,1h),7.02(d,j＝8.4hz,1h),4.10(s,2h),3.97(d,j＝14.4hz,3h),3.08(dd,j＝16.1,11.1hz,8h),2.98-2.74(m,10h),2.44(q,j＝7.5hz,2h),2.01(s,2h),0.92(t,j＝7.5hz,3h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ159.65,156.90,149.59,148.27,143.91,134.92,132.65,130.05,129.60,122.23,107.14,104.19,99.99,68.15,56.83,49.75,48.10,44.01,42.05,24.03,23.25,13.45.
hrms(esi)m/zcalcdforc28h40brn7o2[m+h]+:586.2505.found:586.2493.
实施例16
(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备
步骤一：1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯的合成
在200ml圆底烧瓶中加入1,4,7-三氮杂环壬烷(3g)，三氯甲烷(80ml)、三乙胺(20ml，6eq)，搅拌。将30ml溶有二碳酸二叔丁酯(8.87g，1.75eq)的三氯甲烷恒速滴加进体系，反应6h后，tlc点板检测反应结束。减压旋蒸浓缩，柱层析分离提纯(展开剂：石油醚：乙酸乙酯＝1:100)，得到1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯(4.67g)，产物为无色油状，收率61％。
步骤二：7-(3-氯丙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯的合成
在250ml圆底烧瓶中加入步骤一制得的1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯(3.6g)、乙腈(80ml)、碳酸钾(3.2g)、1-溴-3-氯丙烷(3.25ml，3eq)、碘化钠(0.5eq)。加热至90℃下回流反应。反应持续大约60h后，tlc监测反应完全。反应体系冷却后，用乙酸乙酯溶解，抽滤。硅胶柱层析分离提纯(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝3：1)，得7-(3-氯丙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯(2.18g)，收率51％。
步骤三：7-(3-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯的合成
在100ml圆底烧瓶中加入0.67g的4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基-6-醇、30mldmf、碳酸钾(0.9g，3eq)、步骤二制得的7-(3-氯丙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯(1.27g,1.1eq)。将反应体系加热至130℃，反应6h。tlc跟踪反应完全。待反应体系冷却至室温，旋去溶剂dmf用乙酸乙酯溶解产物，过滤除去不溶物。采用硅胶柱层析的方法将产物分离提纯(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝10:1)，得到7-(3-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷基-1,4-二羧酸二叔丁酯为淡黄色固体1.13g，收率66％。
步骤四：(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的合成
按照实施例1步骤8相似步骤得到(3-氯-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.49(s,1h),7.61-7.58(d,j＝12.22hz,2h),7.50-7.48(d,j＝7.06hz,1h),7.34-7.28(m,2h),7.08(s1h),4.17-4.15(t,j＝5.98hz,2h),3.99(s,3h),3.53(s,1h),3.15-3.08(m,8h),2.89-2.81(m,10h),2.02-1.98(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.25,156.56,154.13,149.61,147.79,134.46,132.63,125.11,123.46,120.02,116.47,106.89,103.27,99.44,68.42,56.85,51.48,47.21,43.46,41.89,23.76.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h30clfn6o2[m+h]+:489.2181.found:489.2176.
实施例17
(3-乙炔基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.51(s,1h),7.67(s,1h),7.39-7.35(m,3h),7.21(s,1h),4.20-4.17(t,j＝5.71hz,2h),4.03(s,3h),3.17-3.09(m,8h),2.94-2.87(m,10h),2.08(s,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.36,156.45,149.57,147.66,135.86,134.43,130.05,129.11,126.62,124.19,122.00,106.95,103.28,99.45,82.64,79.25,68.36,56.81,51.43,47.18,43.44,41.87,23.73.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h32n6o2[m+h]+:461.2665.found:461.2665.
实施例18
(3-溴苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.52(s,1h),7.56-7.54(dd,j＝6.79,2.2hz,1h),7.48(s,1h),7.38-7.35(m,1h),7.02-6.98(tj＝8.96,6.48hz2h),4.10-4.08(t,j＝5.98hz,2h),3.95(s,3h),3.57(s,4h),3.32-3.29(t,j＝5.45hz,4h),3.01-2.99(t,j＝5.71hz,4h)2.91-2.87(t,j＝8.3hz,2h)2.04-2.01(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.12,156.40,149.62,147.57,137.04,134.36,130.20,129.19,125.65,121.66,106.89,103.21,99.35,68.46,56.84,51.45,47.18,43.44,41.87,23.76.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h31brn6o2[m+h]+:515.1770.found:515.1763.
实施例19
(4-溴-2-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.53(s,1h),7.76-7.74(dd,j＝6.51,2.48hz,1h),7.59(s,1h),7.47-7.43(m,1h),7.12-7.08(tj＝6.86hz,2h),4.19-4.16(t,j＝5.92hz,2h),4.00(s,3h),3.56(s,4h),3.32-3.29(t,j＝4.97hz,4h),3.02-3.00(t,j＝5.68hz,4h),2.95-2.91(t,j＝7.34hz,2h),2.09-2,05(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ158.65,157.19,154.77,149.70,148.13,134.88,128.73,127.93,122.44,121.01,119.72,107.16,103.42,99.61,68.21,56.93,51.53,47.24,43.44,41.89,23.75.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h30brfn6o2[m+h]+:533.1676.found:533.1665.
实施例20
(3-溴-4-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备。
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物.
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.51(s,1h),7.68(s,1h),7.54(s,1h),7.44-7.42(d,j＝8.19hz,1h),7.31-7.26(d,j＝8.19hz,1h),7.19-7.15(t,j＝8.53hz,1h),7.00(s1h),4.13-4.10(t,j＝5.92hz,2h),3.97(s,3h),3.55(s,4h),3.29-3.28(d,j＝6.16hz,4h),2.98-2.96(t,j＝5.68hz,4h),2.89-2.86(t,j＝7.82hz,2h),2.02-1.98(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.03,156.50,154.98,149.60,147.72,134.36,132.86,127.57,123.88,116.12,107.94,106.82,103.23,99.43,68.45,56.87,51.51,47.21,43.47,41.89,23.78.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h30brfn6o2[m+h]+:533.1676.found:514.1658.
实施例21
(3-氯-4-((3-氟苄基)甲氧基)苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.43(s,1h),7.43(d,j＝2.6hz,1h),7.30(s,1h),7.26-7.14(m,2h),6.93(td,j＝8.7,2.2hz,1h),6.83(d,j＝7.6hz,1h),6.68(d,j＝9.8hz,1h),6.63(s,1h),6.44(d,j＝9.1hz,1h),4.24(s,2h),4.05(s,2h),3.58(s,4h),3.44(s,3h),3.31(t,j＝5.4hz,4h),3.01(t,j＝5.6hz,4h),2.93-2.83(m,2h),2.04(d,j＝4.5hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ163.46,161.04,155.40,149.49,149.01,147.28,138.08,133.74,129.98,123.17,121.65,120.50,113.90,111.50,106.38,102.71,98.74,68.21,67.68,56.00,51.63,47.25,43.44,41.88,24.01.
hrms(esi)m/zcalcdforc31h36clfn6o3[m+h]+:595.2600.found:595.2585.
实施例22
(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.62(s,1h),7.91(d,j＝2.5hz,1h),7.77-7.68(m,1h),7.57(s,1h),7.28(d,j＝8.8hz,1h),7.02(s,1h),4.15(t,j＝5.9hz,2h),3.98(s,3h),3.58(s,4h),3.32(t,j＝5.6hz,4h),3.06-2.88(m,6h),2.11-2.01(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ156.64,149.69,147.58,135.11,134.34,131.35,127.38,126.94,126.63,126.09,123.40,120.79,106.63,102.96,99.38,68.61,56.86,51.43,47.18,43.46,41.89,23.69.
hrms(esi)m/zcalcdforc25h30clf3n6o2[m+h]+:539.2149.found:539.2142.
实施例23
(3-三氟甲基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.51(d,j＝1.1hz,1h),7.91(s,1h),7.72(d,j＝4.5hz,1h),7.56(s,1h),7.52(s,2h),6.94(s,1h),4.11(t,j＝5.3hz,2h),3.92(s,3h),3.55(s,4h),3.28(s,4h),2.93(d,j＝5.0hz,4h),2.88-2.77(m,2h),1.93(d,j＝9.2hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.48,156.42,149.59,147.87,136.37,134.69,130.28,129.82,127.10,125.00,123.23,122.30,120.58,106.84,103.16,99.32,68.42,56.71,51.28,47.09,43.41,41.86,23.64.
hrms(esi)m/zcalcdforc25h31f3n6o2[m+h]+:505.2539.found:505.2531.
实施例24
(3-氯苯)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.50(s,1h),7.51(dd,j＝4.0,1.8hz,2h),7.38(dd,j＝8.1,1.1hz,1h),7.22(t,j＝8.1hz,1h),7.11(dd,j＝8.0,1.0hz,1h),6.96(s,1h),4.09(t,j＝6.0hz,2h),3.95(s,3h),3.56(s,4h),3.30(t,j＝5.6hz,4h),2.97(t,j＝5.8hz,4h),2.92-2.81(m,2h),1.99(td,j＝11.2,6.0hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ157.03,156.29,149.55,147.63,136.99,134.58,133.53,129.98,126.23,122.77,121.30,106.86,103.08,99.44,68.44,56.77,51.40,47.17,43.45,41.87,23.73.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h31cln6o2[m+h]+:471.2275.found:471.2260.
实施例25
(3-甲氧基苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.46(s,1h),7.53(s,1h),7.24(t,j＝8.5hz,1h),7.08(dd,j＝4.4,2.2hz,2h),6.97(s,1h),6.77(dd,j＝8.3,1.7hz,1h),4.10(t,j＝6.0hz,2h),3.95(s,3h),3.72(s,3h),3.56(s,4h),3.29(t,j＝5.7hz,4h),2.97(t,j＝5.8hz,4h),2.92-2.79(m,2h),2.11-1.88(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ158.82,157.16,156.18,149.36,147.61,136.91,134.42,129.80,115.98,111.84,109.27,106.89,103.25,99.36,68.37,56.73,55.33,51.35,47.14,43.43,41.87,23.68.
hrms(esi)m/zcalcdforc25h34n6o3[m+h]+:467.2771.found:467.2760.
实施例26
(3-氟苯基)-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.50(s,1h),7.59(s,1h),7.38-7.32(m,2h),7.32-7.27(m,1h),7.05-6.94(m,2h),4.12(t,j＝6.0hz,2h),3.94(s,3h),3.56(s,4h),3.29(dd,j＝10.8,4.8hz,4h),2.99(t,j＝5.8hz,4h),2.94-2.83(m,2h),2.12-1.92(m,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ163.20,160.78,157.17,156.41,149.57,147.57,137.13,134.34,130.33,119.14,113.38,110.56,106.78,103.12,99.31,68.47,56.76,51.33,47.12,43.39,41.84,23.67.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h31fn6o2[m+h]+:455.2571.found:455.2558.
实施例27
(3-碘苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.49(s,1h),7.84(t,j＝1.6hz,1h),7.49(s,1h),7.43(dd,j＝12.8,4.9hz,2h),7.00(d,j＝8.0hz,1h),6.97(s,1h),4.10(t,j＝5.9hz,2h),3.98(s,3h),3.55(s,4h),3.28(dd,j＝9.9,4.1hz,4h),2.96(t,j＝5.7hz,4h),2.89-2.80(m,2h),1.98(td,j＝11.2,5.9hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ156.81,156.24,149.56,147.54,136.81,134.67,131.23,130.12,122.03,106.80,103.13,99.42,93.40,68.47,57.41,56.89,51.50,47.20,43.47,41.86,23.81,16.78.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h31in6o2[m+h]+:563.1631.found:563.1620.
实施例28
(2,4-二氯苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.47(s,1h),7.70(s,1h),7.56(d,j＝2.3hz,1h),7.42(d,j＝8.6hz,1h),7.33(dd,j＝8.6,2.3hz,1h),7.20(s,1h),4.17(t,j＝5.9hz,2h),4.03(s,3h),3.56(s,4h),3.31(t,j＝5.6hz,4h),3.03(t,j＝5.8hz,4h),2.98-2.87(m,2h),2.11(td,j＝11.1,6.0hz,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ159.16,157.14,149.67,148.20,135.08,134.06,131.61,129.84,128.09,107.14,103.85,99.77,68.16,56.95,49.71,48.11,44.02,42.06,23.26.
hrms(esi)m/zcalcdforc24h30cl2n6o2[m+h]+:505.1886.found:505.1876.
实施例29
5-(7-甲氧基-6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)氨基-2-氟苯腈的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.56(s,1h),7.94(dd,j＝5.1,2.4hz,1h),7.83(dd,j＝8.6,4.2hz,1h),7.64(s,1h),7.29(t,j＝8.9hz,1h),7.12(s,1h),4.20(t,j＝5.6hz,2h),4.00(s,3h),3.57(s,4h),3.31(d,j＝5.2hz,4h),3.04(t,j＝5.5hz,4h),2.99-2.92(m,2h),2.11(s,2h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ161.57,159.01,157.38,156.78,149.74,148.06,135.04,132.86,130.79,127.76,116.90,113.70,107.00,103.21,100.31-99.43(m),68.48,56.89,51.46,47.22,43.46,41.90,23.78.
hrms(esi)m/zcalcdforc25h30fn7o2[m+h]+:480.2523.found:480.2511.
实施例30
(4-溴-2-乙基苯基)-(7-甲氧基6-(3-(1,4,7-三氮杂环壬烷基-1-基)丙氧基)-喹唑啉-4-基)-胺的制备
按照实施例16相似的步骤得到目标化合物。
1hnmr(400mhz,d2o)δ8.40(s,1h),7.74(s,1h),7.55(s,1h),7.29(d,j＝8.4hz,1h),7.19(s,1h),7.10(d,j＝8.4hz,1h),4.15(s,2h),4.02(s,3h),3.57(s,4h),3.30(dd,j＝12.7,7.0hz,4h),3.03(t,j＝5.6hz,4h),2.95(dd,j＝9.4,6.4hz,2h),2.52(q,j＝7.5hz,2h),2.09(d,j＝5.7hz,2h),1.00(t,j＝7.5hz,3h).
13cnmr(101mhz,d2o)δ159.62,156.87,149.64,148.21,143.90,134.84,132.78,132.53,129.81,122.22,107.13,103.93,99.88,68.18,56.79,51.53,47.25,43.42,41.89,24.04,23.75,13.42.
hrms(esi)m/zcalcdforc26h35brn6o2[m+h]+:543.2083.found:543.2072.
以下结合测试例进一步描述解释本发明。
测试例1本发明化合物对a549肺癌细胞系的增殖抑制测定
人非小细胞肺癌细胞a549用含10﹪胎牛血清、青霉素105iu/l、链霉素100mg/l的dmem培养基于37℃，co2体积分数为5﹪的细胞培养箱内培养。
取对数生长期的a549细胞，0.25﹪胰酶消化后用培养液制成单细胞悬液，以每孔6000个细胞的密度接种于透明的96孔板上，每孔接种100μl，常规培养12h后，按10、20、30、40、50μm的浓度梯度加入本发明实施例1～30制得的化合物(分别为化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、34、35、26、27、28、29、30)，作用72h后，每孔加入5mg/mlmtt20μl，37℃，5％co2培养4h。吸弃上清，加入dmso150μl/孔，吹打混匀，于酶标仪570nm测定吸光值od。计算细胞存活率，并用软件graphpadprism5计算ic50值。
cellviability(％)＝(odx-odb)/(odc-odb)*100％.........式(1-1)
其中，odx：各种样品的吸光值；odb：调零组的吸光值；odc：阴性对照组的吸光值。
具体的检测结果如表1所示，由表1可知，本发明实施例化合物对a549细胞系均有明显抑制作用。
表1本发明实施例的化合物对a549细胞增殖的影响
gefitinib:11.08μm
本实施例中的化合物与接乙氧基侧链的化合物相比，本实施例中化合物拥有更优生物活性。在a549细胞的活性检测中发现，本实施例中的化合物的生物活性远优于接乙氧基侧链的化合物，接乙氧基侧链的化合物生物活性如表2所示。
表2接乙氧基侧链化合物活性
测试例2本发明化合物对a549肺癌细胞系的细胞凋亡检测
根据细胞活性检测结果，对其中活性较好的实施例6的化合物进行细胞凋亡检测。
取对数生长期的a549细胞，0.25﹪胰酶消化后用培养液制成单细胞悬液，以每孔30万个细胞的密度接种于透明的6孔板上，每孔接种2ml，常规培养12h后，按1μm、3μm、5μm的浓度梯度分别加入本发明实施例6制得的化合物，按照5μm的浓度加入吉非替尼。作用72h后，弃掉上清液，消化重悬，用pbs漂洗细胞2次，1000r·min-1离心3min，弃上清，加入300μl缓冲液混匀，加5μlannexinv-fitc轻轻混匀，加10μl碘化丙啶避光染色30min。用流式细胞术进行检测，采用summit5.2进行分析，结果图1～4所示。
由图1～4可以看出，随着给药浓度的增加，细胞凋亡率逐步增加，在5μm时达到67.07％，而吉非替尼在5μm时的细胞凋亡率只有36.58％。本发明的化合物6能明显促进细胞凋亡，并且效果明显优于吉非替尼。
测试例3本发明化合物对a431肺癌细胞系的增殖抑制测定
人非小细胞肺癌细胞a431用含10﹪胎牛血清、青霉素105iu/l、链霉素100mg/l的dmem培养基于37℃，co2体积分数为5﹪的细胞培养箱内培养。
取对数生长期的a549细胞，0.25﹪胰酶消化后用培养液制成单细胞悬液，以每孔8000个细胞的密度接种于透明的96孔板上，每孔接种100μl，常规培养12h后，按0.5、1、2、4、8μm的浓度梯度加入本发明实施例1～30制得的化合物，作用72h后，每孔加入5mg/mlmtt20μl，37℃，5％co2培养4h。吸弃上清，加入dmso150μl/孔，吹打混匀，于酶标仪570nm测定吸光值od。计算细胞存活率，并用软件graphpadprism5计算ic50值。
cellviability(％)＝(odx-odb)/(odc-odb)*100％.........式(1-1)
其中，odx：各种样品的吸光值；odb：调零组的吸光值；odc：阴性对照组的吸光值。
具体的检测结果如表3所示，由表3可知，本发明实施例的化合物对a431细胞系均有明显抑制作用。
表3本发明实施例的化合物对a431细胞增殖的影响
gefitinib:3.47μm
测试例4本发明化合物分子的对接结果
选取本发明实施例6制得的化合物与egfr蛋白分子进行对接，对接结果如图5所示。实施例6化合物的原子与egfr的氨基酸残基leu718、met793、asp800、thr854通过氢键结合从而更好的使实施例6化合物的喹唑啉环更好地占据受体中原本结合atp的空腔，竞争性地抑制受体与atp结合，从而达到抑制egfr活性的目的。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明实质内容上所作的任何修改、等同替换和简单改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。