一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法与流程

技术特征：

1.一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针，其特征在于，该荧光探针的结构如下：

其中，x₁为TPE接枝率，m为1-壳聚糖的脱乙酰度，y为羧化度，且x₁+x₂+m+y为1。

2.一种如权利要求1所述的具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)称取一定质量粘均分子量为1万-100万、脱乙酰度60％-95％的壳聚糖为溶质，以0.1mol/L的HCl溶液为溶剂，配制获得壳聚糖浓度为0.01-0.05g/mL的溶液A；

2)以无水甲醇为溶剂，配制浓度为0.01－0.05g/mL的二硫代二丙酸(DTDP)溶液，并使DTDP与溶液A中壳聚糖链上的氨基摩尔比为1:1-2:1，加入一定量的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，使DTDP与EDC的摩尔比为1:1.2-1:2，且EDC与NHS的摩尔比为1:1-1:1.5，在0-4℃冰浴条件下于无水甲醇中活化0.5-2h，获得溶液B；

3)采用恒压滴液漏斗向溶液B中滴加溶液A，调节体系pH＝4-5，室温条件下反应24-48h，旋蒸除去甲醇得到浓缩液，加入体积为浓缩液5-7倍的水，除去不溶物，获得溶液C；

4)将溶液C装入截留分子量为14000的透析袋中并置于去离子水中透析3-5天，取出透析后的溶液C冻干，获得具有还原响应性的水溶性壳聚糖样品D；

5)以具有还原响应性的水溶性壳聚糖样品D为溶质，以DMSO为溶剂，在50-65℃溶胀24-48h，再向该溶液中加入TPEITC(含异硫氰酸酯官能团的四苯基乙烯衍生物)，TPEITC与样品D中氨基的摩尔比为1％-20％，反应24-48h，获得溶液E；

6)向溶液E中加入无水乙醇，无水乙醇与溶液E的体积比为20，搅拌均匀后静置至溶液分层，去除上清液，离心后，将沉淀用去离子水溶解，过滤得到滤液；

7)将四氢呋喃和去离子水以体积比1:1混合配制透析液，将步骤6)的滤液装入截留分子量为3500的透析袋中并置于透析液中透析5-7天，取出后冻干，获得具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针。