本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类鬼臼毒素-靛玉红衍生物(i)，它们的制备方法以及在预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术：
鬼臼毒素(podophyllotoxin)是从小蘖科鬼臼属植物华鬼臼中分离得到的一种芳基萘内酯类木脂素，该类植物主要分布在我国西部地区，民间用于治疗蛇咬伤及痈疖肿毒等症。研究表明，鬼臼毒素具有多种药理活性，如抗肿瘤、抗病毒、杀虫等，其作用机制主要为抑制微管蛋白，以及自由基作用等。由于鬼臼毒素会产生严重的不良反应，如胃肠不适和肝肾毒性等，这制约了鬼臼毒素的抗肿瘤临床应用。从上个世纪五十年代开始，科学家对鬼臼毒素的结构展开了大规模的修饰和改造工作，以降低其毒性，其中人们发现了依托泊苷和替尼泊苷等鬼臼毒素类抗肿瘤药物，现已广泛应用于临床治疗肺癌、乳腺癌、淋巴癌、睾丸癌和急性非淋巴细胞白血病等多种疾病。
双吲哚类生物碱靛玉红(indirubin)是中药青黛的有效成分，其具有抗真菌、抗病毒、抗炎和治疗银屑病等多种药理活性。同时，靛玉红还具有潜在的抗肿瘤作用，主要作用机制为抑制细胞周期蛋白依赖性激酶。
为了寻找抗肿瘤活性更佳的先导化合物，我们利用药物化学领域的药效团拼合原理，将鬼臼毒素与靛玉红这两种具有抗肿瘤活性的天然分子进行缀合，得到了结构独特的鬼臼毒素-靛玉红衍生物。
技术实现要素：
本发明的目的是为了寻找抗肿瘤活性更佳的先导化合物，我们利用药物化学领域的药效团拼合原理，将鬼臼毒素与靛玉红这两种具有抗肿瘤活性的天然分子进行缀合，得到了结构独特的鬼臼毒素-靛玉红衍生物。
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类鬼臼毒素-靛玉红衍生物(i)。药理实验显示，本发明物对敏感人慢性髓系白血病细胞k562和耐药人慢性髓系白血病细胞k562/vcr有较强的抑制活性。因此，本发明的式(i)化合物可用于临床预防或治疗肿瘤疾病。
本发明的化合物通式(i)如下：
其中，n代表1、2、3、4或5。
本发明所述的药物组合物，其中含有有效剂量本发明物，剂型包括混悬剂、胶囊剂、片剂、喷雾剂、凝胶剂注射剂、酊剂、缓释剂、栓剂、贴剂、颗粒剂等制剂学上常规的剂型形式。
本通式(i)所示化合物的制备方法如下：
其中a～b代表反应条件：
a：试剂为溴代酰氯；溶剂为二氯甲烷或四氢呋喃；缚酸剂为三乙胺或碳酸钾；反应温度为20～35℃；
b：试剂为碳酸铯；溶剂为n,n-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；催化剂为碘化钾；反应温度为20～30℃。
其中，中间体(iv)的制备方法可参照文献(bioorg.med.chem.lett.2011,21,2692)报道的方法合成。
药理活性实验证明，本发明物能够有效地抑制敏感人慢性髓系白血病细胞k562和耐药人慢性髓系白血病细胞k562/vcr的恶性增殖。
以下是本发明部分化合物的药理活性测试方法及结果：
cck-8法测试体外抗肿瘤活性
阳性药：依托泊苷(vp-16)
实验方法：
将对数生长期的细胞k562和k562/vcr细胞分别加入96孔板中，在5％co2，37℃条件下培养24h后，加入不同浓度的化合物，设立阴性阳性对照组。共同孵化72小时，加入cck-8试剂(10μl)，继续孵化3小时。最后用酶标仪读出每孔的od值，计算半数抑制浓度(ic50)值。
部分化合物体外抗肿瘤活性结果如下：
表1本发明部分化合物对k562和k562/vcr的体外抗增殖活性
结果表明，本发明物对k562和k562/vcr两种细胞株具有不同程度的抑制活性。其中，化合物i-1的活性最强，其对k562和k562/vcr的ic50值分别为0.034±0.002μm和0.076±0.008μm，显著强于阳性药依托泊苷。
具体实施方式
仪器与试剂
熔点为sgwx-4熔点仪，质谱仪为agilentaccurate-mass-q-tof-ms6520型，核磁共振仪为agilent-nmr-400型，薄层层析板和硅胶购自青岛海洋化工厂，其它所用试剂为分析纯。
下面的实施例用于具体说明本发明物的制备，但本发明并不局限于下列实施例。
实施例1：靛玉红-n1-乙酸酯-4-鬼臼毒素(i-1)的制备
鬼臼毒素(0.12g,0.28mmol)加入到无水二氯甲烷(5ml)中，再加入三乙胺(0.2ml,1.4mmol)，上述反应液冷却至0℃，搅拌下缓慢滴加溴代乙酰氯(2.5eq)。滴毕，反应液升至30℃反应1-2小时。氯化铵溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取三次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥过夜，过滤，浓缩得到中间体iii-1。上述粗品、靛玉红(1eg)、碳酸铯(2.5eq)和催化量的碘化钾加入无水dmf中，25℃条件下搅拌0.5-1小时。食盐水淬灭反应，二氯甲烷萃取三次，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥过夜，过滤，得到粗品，柱层析纯化[洗脱剂为dcm/meoh(100/1-20/1)]，得到紫色固体靛玉红-n1-乙酸酯-4-鬼臼毒素(i-1)，收率67％。
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实施例2：靛玉红-n1-丙酸酯-4-鬼臼毒素(i-2)的制备
将溴代丙酰氯代替溴代乙酰氯，按实施例1所述的方法，其余所需原料、试剂同实施例1，得到紫色固体靛玉红-n1-丙酸酯-4-鬼臼毒素(i-2)，收率70％。
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实施例3：靛玉红-n1-丁酸酯-4-鬼臼毒素(i-3)的制备
将溴代丁酰氯代替溴代乙酰氯，按实施例1所述的方法，其余所需原料、试剂同实施例1，得到紫色固体靛玉红-n1-丁酸酯-4-鬼臼毒素(i-3)，收率60％。
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实施例4：靛玉红-n1-己酸酯-4-鬼臼毒素(i-4)的制备
将溴代己酰氯代替溴代乙酰氯，按实施例1所述的方法，其余所需原料、试剂同实施例1，得到紫色固体靛玉红-n1-己酸酯-4-鬼臼毒素(i-4)，收率58％。
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