1.一种用于烟草脉斑病中马铃薯Y病毒属鉴别诊断的试剂盒,其特征在于,包括两条特异性引物:
SPLVGV-1:5’-TGTAACGAAAGGGACTAGTGCAAAGG-3’;
SPLVGV-2:5’-CCGCTATGAGTAAGTCCTGCACAGC-3’。
2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括标准阳性模板。
4.一种用于烟草脉斑病中马铃薯Y病毒属鉴别诊断的检测方法,其特征在于,其包括以下步骤:
(1)提取待测样品总RNA;
(2)设计并合成引物;
(3)RT-PCR
a.反转录合成cDNA,以甘薯总RNA为模板,以SPLVGV-2引物,通过反转录酶合成cDNA
b.PCR扩增,以cDNA为模板,以SPLVGV-1和SPLVGV-2为引物,进行PCR反应;
(4)电泳检测
吸取2.5μL RT-PCR产物进行0.8-1.5%的琼脂糖凝胶电泳,经核糖染色Goldview,通过凝胶成像仪观察,在感染该烟草脉斑病病毒的甘薯样品中有895bp的核酸条带。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中总RNA提取法采用的是多糖多酚植物组织的裂解法。
6.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中PCR扩增阶段的反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性1min;54℃退火1min;72℃延伸1min,共进行35个循环,72℃延伸7min,4℃保存。