一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器的制作方法

本实用新型涉及细胞培养技术领域，更具体地，涉及一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器。

背景技术：

细胞培养也叫细胞克隆技术，是细胞生物学研究及相关生物制品生产中必不可少的过程。通过对细胞进行基因编辑、药物处理、诱导分化等不同的处理，进行细胞培养可以达到细胞生命过程研究、疾病及药物机理、定向分化为其他细胞等目的，细胞大规模培养还可以用于制备细胞因子、抗体等生物蛋白类药物。细胞培养是生物领域必不可少的技术。

当细胞培养过程中涉及到需要额外添加某种蛋白的时候，往往需要研究人员表达和纯化该蛋白，在每次更换培养基的时候都需加入纯化后的蛋白，经济上花费比较大，实验操作上也比较繁琐。另外，由于蛋白表达纯化后的产品稳定性、蛋白分装和保存时间等问题，都会影响细胞培养以及分化的效果。

近来研究表明，外周血来源的单核细胞在GMCSF和IL4处理下能够变成树突状前体细胞，树突状前体细胞在TNF-α、IL-1β、IL6等促炎因子诱导下变为成熟的树突状细胞。在树突状细胞的诱导分化过程中，需要多次进行细胞换液并补加GMCSF和IL4，GMCSF、IL4蛋白的产品稳定性对单核细胞定向分化为树突状前体细胞至关重要。

技术实现要素：

本实用新型的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器。

为了实现上述目的，本实用新型是通过以下技术方案予以实现的：

一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器，所述细胞培养容器包括本体和盖子，所述本体的内壁包被有蛋白层。

优选地，所述细胞培养容器的本体和盖子可开合式密封接触。

优选地，所述本体的内表面为玻璃。

本体的内表面为玻璃时，首先，给蛋白加上His标签；细胞培养容器的内壁进行硅烷化处理后进行AB-NTA 孵育修饰；之后加入NiCl2溶液使NTA与Ni离子偶联，完成镍离子包被；最后加入含有His标签的蛋白，与包被的镍离子进行亲和，使其固定在细胞培养容器的内壁。

本体的内表面为塑料时，利用聚苯乙烯等塑料对蛋白质普遍存在的依附性，将蛋白质包被到本体的内表面。

优选地，所述本体的内表面为能够吸附蛋白的塑料。

因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的

优选地，所述塑料为聚苯乙烯。

优选地，所述细胞培养容器为培养皿。

优选地，所述细胞培养容器为培养瓶。

优选地，所述蛋白层为蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白层。所述蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白的氨基酸序列为：

APARSPSPSTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNETVEVISEMFDLQEPTCLQTRLELYKQGLRGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFESFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQEGGGGSGGGGSGGGGSHKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKYSKCSS

或：

HKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKYSKCSSGGGGSGGGGSGGGGSAPARSPSPSTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNETVEVISEMFDLQEPTCLQTRLELYKQGLRGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFESFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQE。

与现有技术相比，本实用新型具有如下有益效果：

使用本实用新型的细胞培养容器培养细胞不需补加蛋白，仅仅通过一次蛋白包被，就避免了细胞培养过程中多次蛋白的加入，大幅简化操作，方便快捷，经济实惠；同时避免了多次制备过程中蛋白质量的不稳定性，使得整个培养过程的不可控因素减小，提升细胞培养的效率和质量。

附图说明

图1为实施例1的蛋白固定化修饰的细胞培养容器的纵剖面结构示意图。

图2为实施例2的蛋白固定化修饰的细胞培养容器的纵剖面结构示意图。

具体实施方式

下面结合说明书附图和具体实施例对本实用新型作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本实用新型，并非用于限定本实用新型的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1

一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器，该细胞培养容器为培养皿，所述细胞培养容器包括本体（1）和盖子（2），所述本体（1）的内壁包被有蛋白层（3）。

使用时，蛋白层可以与液体培养基接触。培养皿容纳液体培养基的部分的内壁为玻璃，内壁包被有蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白（融合蛋白His-GMCSF-IL4或His-IL4-GMCSF）。

实施例2

一种蛋白固定化修饰的细胞培养容器，该细胞培养容器为培养瓶，所述细胞培养容器包括本体（1）和盖子（2），所述本体（1）的内壁包被有蛋白层（3）。

使用时，蛋白层可以与液体培养基接触。培养皿容纳液体培养基的部分的内壁为聚苯乙烯，内壁包被有蛋白GMCSF与蛋白IL4的融合蛋白（融合蛋白Fc-GMCSF-IL4或Fc-IL4-GMCSF）。