一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法与流程

本发明涉及提取菠萝蛋白酶
技术领域：
，具体涉及一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法。
背景技术：
：菠萝蛋白酶(bromelain，ec3.4.22.33)是存在于菠萝植株(包括果、茎、柄和叶片)中的蛋白水解酶，有多个同工酶，其活性中心含有巯基(－sh)，所以属巯基蛋白酶。菠萝蛋白酶广泛用于医药、食品、化妆品、纺织、饲料、皮革等行业。它能分解纤维蛋白、血红蛋白等蛋白质，能在副作用较小的情况下使纤维蛋白和血凝块溶解，进而改善体液循环，增加组织通透性，导致炎症、水肿消退；与抗生素、化疗药物合用可促进药物对病灶的渗透和扩散，从而增强疗效。但是现有的菠萝蛋白酶的提取过程中，通常使用菠萝茎制备，菠萝皮渣就不用了，浪费了原料，同时现有的菠萝皮渣的使用率和酶产率低，并且不能有效的提高酶的纯度以及酶活力，因此设计一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法。技术实现要素：为了克服上述的技术问题，本发明的目的在于提供一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，本发明通过菠萝皮渣制备的菠萝蛋白酶酶活力好，纯度高，提高了菠萝皮渣的利用率；首先通过粉碎辊将菠萝皮渣粉碎成小颗粒，利用研磨辊将粉碎后的菠萝皮渣挤压榨汁，加入抗坏血酸和水后，抗坏血酸可降低酶活性损失，通过压板再次对粉碎后进行挤压，挤压过程中，橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果，进一步挤压出汁，该发明通过粉碎、研磨、加抗坏血酸和水、压板挤压这个过程，使得菠萝皮渣的榨汁率更高，提高了原料的使用率和酶产率，降低酶活性损失；然后通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组依次进行过滤，第一滤网为孔径为0.1-1μm、截留分子量为1000-5000道尔顿的微孔过滤膜，第二滤网为孔径为0.01-0.1μm、截留分子量为500-1000道尔顿的微孔过滤膜，两次过滤可截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，两层反渗透膜均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩；三次过滤提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量；本发明添加丙酸钙作为防腐剂，不仅具有防腐作用，而且可以通过代谢被人畜吸收，并供给人畜必需的钙；通过多次分离、洗涤得到的酶膏，提高了酶的活性；将取长石、石英和活性炭制备成层析柱，对菠萝蛋白酶具有良好的吸附作用，用它作为吸附剂纯化菠萝蛋白酶具有良好的效果，提高菠萝蛋白酶的纯度；醋酸锌中的锌离子对酶有激活作用，乙二胺四乙酸根是一种鳌合物，可有效的鳌合原料中某些重金属离子，以避免其与酶结合而使酶失去活性，与l-半胱氨酸组合，效果更好，抗坏血酸则具有还原性质，分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态，从而有效的保护酶活性。本发明的目的可以通过以下技术方案实现：一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.05％-0.1％的抗坏血酸，并加入0.5-1kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.03％-0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10-15分钟，搅拌速度为4000-5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1-0.2％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻15-20小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥6-10小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/ml的溶液，并将蛋白溶液以1-2ml/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水4-6ml洗涤层析柱，然后用0.02mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为0.5-1ml/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。作为本发明进一步的方案：所述层析柱通过下述步骤制备得到：称取长石0.5-1g和石英3-4g，加入活性炭1-3g，研磨，加水调和，成形，干燥，高温1100-1200℃煅烧30分钟，即得多孔陶瓷；将上述多孔陶瓷粉碎，过筛，使得颗粒不大于1.0mm，用蒸馏水冲洗，倾倒除去细小粉末，颗粒装入层析柱中，即可得到层析柱。作为本发明进一步的方案：所述酶膏的制备步骤为：a:在上述复合物浓缩液中加入醋酸锌0.1-0.2g、抗坏血酸0.05-0.06g、氯化钠0.2-0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.05-0.1g，充分搅拌后，再加入氯化钠0.2-0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.05-0.1g，再搅拌均匀，然后以4000-5000r/min离心10-15分钟，将上清废液倒掉，得到洗涤酶复合沉淀物；b:将洗涤酶复合沉淀物倒入烧杯中，加入0.4％-0.5％的硫代酸钠10-20ml搅拌均匀，静置5-7分钟，然后加入0.5％-1％的l-半胱氨酸溶液8-10ml搅拌均匀，以4000-5000r/min离心5-7分钟，倒掉上清废液，得到酶膏。作为本发明进一步的方案：步骤一中，多级粉碎是通过进料漏斗将洗净后的菠萝皮渣送入到粉碎箱中，旋转电机带动一研磨辊转动，一研磨辊通过皮带轮组带动另一研磨辊以及粉碎辊转动，粉碎辊将菠萝粉碎，两研磨辊将其进行第一次挤压出汁，最后通过斜槽流入到过滤箱的u型板上；挤压过滤是首先通过气缸驱动活塞杆伸长，带动压板下降，对u型板的菠萝皮渣进行挤压，挤压过程中，橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果，进一步挤压出汁，提高了菠萝皮渣的榨汁率，原料的使用率和酶产率，挤压过程中，菠萝汁依次通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组进行过滤、浓缩，第一滤网和第二滤网均为微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，提高了酶的纯度与收率，反渗透膜组中使用两层醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩降低了菠萝蛋白酶中水份的含量，缩短了干燥的时间，降低了能耗。作为本发明进一步的方案：步骤一中粉碎过滤装置包括粉碎箱，所述粉碎箱的顶部设置有进料漏斗，所述粉碎箱的内部平行设置有一对研磨辊，两所述研磨辊的正上方传动设置有粉碎辊，一研磨辊与粉碎辊以及两研磨辊之间均通过皮带轮组传动连接，所述粉碎箱的一侧固定安装有旋转电机，所述旋转电机与粉碎箱内部设置的一研磨辊连接，所述研磨辊的正下方设置有斜槽，所述斜槽远离粉碎箱的一端伸入过滤箱中，所述过滤箱的顶部中心处固定连接有气缸，所述气缸与过滤箱顶部内壁中心处设置的活塞杆电性连接，所述活塞杆的底部固定连接有压板，所述过滤箱的内壁对称安装有支撑板，两所述支撑板之间固定连接有第二滤网，所述支撑板的顶部固定连接有橡胶垫，所述橡胶垫的顶部固定连接有u型板，所述u型板上均匀开设有通孔，所述u型板的顶部固定连接有第一滤网；所述过滤箱的底部管道连接有反渗透膜组。作为本发明进一步的方案：所述第一滤网为孔径为0.1-1μm、截留分子量为1000-5000道尔顿的微孔过滤膜，第二滤网为孔径为0.01-0.1μm、截留分子量为500-1000道尔顿的微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量。作为本发明进一步的方案：所述反渗透膜组包括集水管、止水带、反渗透膜本体和防渗透环，所述集水管贯穿反渗透膜本体，所述反渗透膜本体上靠近集水管进水口一端设置有止水带，所述集水管出水口一端撒上设置有防渗透环；所述反渗透膜本体包括两层反渗透膜、透过水道网、原水导流网，一所述反渗透膜的底部粘结有透过水道网，所述透过水道网的底部粘结有另一反渗透膜，另一反渗透膜的底部粘结有原水导流网。作为本发明进一步的方案：两层所述反渗透膜均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩。本发明的有益效果：1、本发明通过菠萝皮渣制备的菠萝蛋白酶酶活力好，纯度高，提高了菠萝皮渣的利用率；首先通过粉碎辊将菠萝皮渣粉碎成小颗粒，利用研磨辊将粉碎后的菠萝皮渣挤压榨汁，加入抗坏血酸和水后，抗坏血酸可降低酶活性损失，通过压板再次对粉碎后进行挤压，挤压过程中，橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果，进一步挤压出汁，该发明通过粉碎、研磨、加抗坏血酸和水、压板挤压这个过程，使得菠萝皮渣的榨汁率更高，提高了原料的使用率和酶产率，降低酶活性损失；然后通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组依次进行过滤，第一滤网为孔径为0.1-1μm、截留分子量为1000-5000道尔顿的微孔过滤膜，第二滤网为孔径为0.01-0.1μm、截留分子量为500-1000道尔顿的微孔过滤膜，两次过滤可截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，两层反渗透膜均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩；三次过滤提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量；本发明添加丙酸钙作为防腐剂，不仅具有防腐作用，而且可以通过代谢被人畜吸收，并供给人畜必需的钙；通过多次分离、洗涤得到的酶膏，提高了酶的活性；2、将取长石、石英和活性炭制备成层析柱，对菠萝蛋白酶具有良好的吸附作用，用它作为吸附剂纯化菠萝蛋白酶具有良好的效果，提高菠萝蛋白酶的纯度；醋酸锌中的锌离子对酶有激活作用，乙二胺四乙酸根是一种鳌合物，可有效的鳌合原料中某些重金属离子，以避免其与酶结合而使酶失去活性，与l-半胱氨酸组合，效果更好，抗坏血酸则具有还原性质，分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态，从而有效的保护酶活性；3、通过进料漏斗将洗净后的菠萝皮渣送入到粉碎箱中，旋转电机带动一研磨辊转动，一研磨辊通过皮带轮组带动另一研磨辊以及粉碎辊转动，粉碎辊将菠萝粉碎，两研磨辊将其挤压出汁，最后通过斜槽流入到过滤箱的u型板上，气缸驱动活塞杆伸长，带动压板下降，对u型板的菠萝皮渣进行挤压，使菠萝皮渣的榨汁率更高，从而提高了原料的使用率和酶产率，挤压过程中，通过橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果；挤压后，菠萝汁依次通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组进行过滤，第一滤网和第二滤网均为微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，两层反渗透膜均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩，提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量，缩短了干燥的时间，降低了能耗。附图说明下面结合附图对本发明作进一步的说明。图1是本发明中粉碎过滤装置整体结构示意图；图2是本发明中反渗透膜组整体结构示意图；图3是本发明中反渗透膜本体整体结构示意图。图中：1、粉碎箱；2、进料漏斗；3、粉碎辊；4、旋转电机；5、研磨辊；6、斜槽；7、皮带轮组；8、压板；9、u型板；10、第一滤网；11、支撑板；12、过滤箱；13、反渗透膜组；14、第二滤网；15、橡胶垫；16、活塞杆；17、气缸；18、通孔；131、集水管；132、止水带；133、反渗透膜本体；134、防渗透环；1331、反渗透膜；1332、透过水道网；1333、原水导流网。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。请参阅图1-3所示，本发明提供一种技术方案:实施例1:一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.1％的抗坏血酸，并加入1kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心15分钟，搅拌速度为5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.2％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻20小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥10小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/ml的溶液，并将蛋白溶液以2ml/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水6ml洗涤层析柱，然后用0.02mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为1ml/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。其中：所述层析柱通过下述步骤制备得到：称取长石1g和石英4g，加入活性炭1-3g，研磨，加水调和，成形，干燥，高温1200℃煅烧30分钟，即得多孔陶瓷；将上述多孔陶瓷粉碎，过筛，使得颗粒不大于1.0mm，用蒸馏水冲洗，倾倒除去细小粉末，颗粒装入层析柱中，即可得到层析柱；所述酶膏的制备步骤为：a:在上述复合物浓缩液中加入醋酸锌0.2g、抗坏血酸0.06g、氯化钠0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.1g，充分搅拌后，再加入氯化钠0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.1g，再搅拌均匀，然后以5000r/min离心15分钟，将上清废液倒掉，得到洗涤酶复合沉淀物；b:将洗涤酶复合沉淀物倒入烧杯中，加入0.5％的硫代酸钠20ml搅拌均匀，静置7分钟，然后加入1％的l-半胱氨酸溶液10ml搅拌均匀，以5000r/min离心7分钟，倒掉上清废液，得到酶膏；步骤一中，多级粉碎是通过进料漏斗将洗净后的菠萝皮渣送入到粉碎箱中，旋转电机带动一研磨辊转动，一研磨辊通过皮带轮组带动另一研磨辊以及粉碎辊转动，粉碎辊将菠萝粉碎，两研磨辊将其进行第一次挤压出汁，最后通过斜槽流入到过滤箱的u型板上；挤压过滤是首先通过气缸驱动活塞杆伸长，带动压板下降，对u型板的菠萝皮渣进行挤压，挤压过程中，橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果，进一步挤压出汁，提高了菠萝皮渣的榨汁率，原料的使用率和酶产率，挤压过程中，菠萝汁依次通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组进行过滤、浓缩，第一滤网和第二滤网均为微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，提高了酶的纯度与收率，反渗透膜组中使用两层醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩降低了菠萝蛋白酶中水份的含量，缩短了干燥的时间，降低了能耗。实施例2:一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.05％的抗坏血酸，并加入0.5kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.03％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10分钟，搅拌速度为4000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻15小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥6小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/ml的溶液，并将蛋白溶液以1ml/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水4ml洗涤层析柱，然后用0.02mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为0.5ml/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。其中：所述层析柱通过下述步骤制备得到：称取长石0.5g和石英3g，加入活性炭1g，研磨，加水调和，成形，干燥，高温1100℃煅烧30分钟，即得多孔陶瓷；将上述多孔陶瓷粉碎，过筛，使得颗粒不大于1.0mm，用蒸馏水冲洗，倾倒除去细小粉末，颗粒装入层析柱中，即可得到层析柱；所述酶膏的制备步骤为：a:在上述复合物浓缩液中加入醋酸锌0.1g、抗坏血酸0.05g、氯化钠0.2g和乙二胺四乙酸二钠0.05g，充分搅拌后，再加入氯化钠0.2g和乙二胺四乙酸二钠0.05g，再搅拌均匀，然后以4000r/min离心10分钟，将上清废液倒掉，得到洗涤酶复合沉淀物；b:将洗涤酶复合沉淀物倒入烧杯中，加入0.4％％的硫代酸钠10ml搅拌均匀，静置5分钟，然后加入0.5％的l-半胱氨酸溶液8ml搅拌均匀，以4000r/min离心5分钟，倒掉上清废液，得到酶膏。实施例3:步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.1％的抗坏血酸，并加入0.5kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10分钟，搅拌速度为5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻20小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥6小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/ml的溶液，并将蛋白溶液以2ml/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水4ml洗涤层析柱，然后用0.02mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为1ml/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。其中：所述层析柱通过下述步骤制备得到：称取长石1g和石英3g，加入活性炭3g，研磨，加水调和，成形，干燥，高温1100℃煅烧30分钟，即得多孔陶瓷；将上述多孔陶瓷粉碎，过筛，使得颗粒不大于1.0mm，用蒸馏水冲洗，倾倒除去细小粉末，颗粒装入层析柱中，即可得到层析柱；所述酶膏的制备步骤为：a:在上述复合物浓缩液中加入醋酸锌0.2g、抗坏血酸0.05g、氯化钠0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.05g，充分搅拌后，再加入氯化钠0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.05g，再搅拌均匀，然后以5000r/min离心10分钟，将上清废液倒掉，得到洗涤酶复合沉淀物；b:将洗涤酶复合沉淀物倒入烧杯中，加入0.5％的硫代酸钠10ml搅拌均匀，静置7分钟，然后加入0.5％的l-半胱氨酸溶液10ml搅拌均匀，以4000r/min离心7分钟，倒掉上清废液，得到酶膏。实施例4:步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.1％的抗坏血酸，并加入0.5kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10分钟，搅拌速度为5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻20小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥10小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/ml的溶液，并将蛋白溶液以2ml/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水4ml洗涤层析柱，然后用0.02mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/l，ph6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为0.5ml/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。其中：所述层析柱通过下述步骤制备得到：称取长石1g和石英4g，加入活性炭1g，研磨，加水调和，成形，干燥，高温1100℃煅烧30分钟，即得多孔陶瓷；将上述多孔陶瓷粉碎，过筛，使得颗粒不大于1.0mm，用蒸馏水冲洗，倾倒除去细小粉末，颗粒装入层析柱中，即可得到层析柱；所述酶膏的制备步骤为：a:在上述复合物浓缩液中加入醋酸锌0.1g、抗坏血酸0.05g、氯化钠0.2g和乙二胺四乙酸二钠0.05g，充分搅拌后，再加入氯化钠0.3g和乙二胺四乙酸二钠0.1g，再搅拌均匀，然后以4000r/min离心15分钟，将上清废液倒掉，得到洗涤酶复合沉淀物；b:将洗涤酶复合沉淀物倒入烧杯中，加入0.5％的硫代酸钠10ml搅拌均匀，静置7分钟，然后加入0.5％的l-半胱氨酸溶液10ml搅拌均匀，以4000r/min离心7分钟，倒掉上清废液，得到酶膏。将实施例1-4所提取的菠萝蛋白酶进行酶活力测试，测试结果如下表：酶活力(万单位/克)实施例1209实施例2205实施例3206实施例4202由上表可知：本发明通过菠萝皮渣制备的菠萝蛋白酶酶活力好，纯度高，提高了菠萝皮渣的利用率；首先通过粉碎辊将菠萝皮渣粉碎成小颗粒，利用研磨辊将粉碎后的菠萝皮渣挤压榨汁，加入抗坏血酸和水后，抗坏血酸可降低酶活性损失，通过压板再次对粉碎后进行挤压，挤压过程中，橡胶垫所产生的反作用力，提高了挤压效果，进一步挤压出汁，该发明通过粉碎、研磨、加抗坏血酸和水、压板挤压这个过程，使得菠萝皮渣的榨汁率更高，提高了原料的使用率和酶产率，降低酶活性损失；然后通过第一滤网、第二滤网和反渗透膜组依次进行过滤，第一滤网为孔径为0.1-1μm、截留分子量为1000-5000道尔顿的微孔过滤膜，第二滤网为孔径为0.01-0.1μm、截留分子量为500-1000道尔顿的微孔过滤膜，两次过滤可截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，两层反渗透膜均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩；三次过滤提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量；本发明添加丙酸钙作为防腐剂，不仅具有防腐作用，而且可以通过代谢被人畜吸收，并供给人畜必需的钙；通过多次分离、洗涤得到的酶膏，提高了酶的活性。请参阅图1-3所示，步骤一中粉碎过滤装置包括粉碎箱1，所述粉碎箱1的顶部设置有进料漏斗2，所述粉碎箱1的内部平行设置有一对研磨辊5，两所述研磨辊5的正上方传动设置有粉碎辊3，一研磨辊5与粉碎辊3以及两研磨辊5之间均通过皮带轮组7传动连接，所述粉碎箱1的一侧固定安装有旋转电机4，所述旋转电机4与粉碎箱1内部设置的一研磨辊5连接，所述研磨辊5的正下方设置有斜槽6，所述斜槽6远离粉碎箱1的一端伸入过滤箱12中，所述过滤箱12的顶部中心处固定连接有气缸17，所述气缸17与过滤箱12顶部内壁中心处设置的活塞杆16电性连接，所述活塞杆16的底部固定连接有压板8，所述过滤箱12的内壁对称安装有支撑板11，两所述支撑板11之间固定连接有第二滤网14，所述支撑板11的顶部固定连接有橡胶垫15，所述橡胶垫15的顶部固定连接有u型板9，所述u型板9上均匀开设有通孔18，所述u型板9的顶部固定连接有第一滤网10；所述过滤箱12的底部管道连接有反渗透膜组13。所述第一滤网10为孔径为0.1-1μm、截留分子量为1000-5000道尔顿的微孔过滤膜，第二滤网14为孔径为0.01-0.1μm、截留分子量为500-1000道尔顿的微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量。所述反渗透膜组13包括集水管131、止水带132、反渗透膜本体133和防渗透环134，所述集水管131贯穿反渗透膜本体133，所述反渗透膜本体133上靠近集水管131进水口一端设置有止水带132，所述集水管131出水口一端撒上设置有防渗透环134；所述反渗透膜本体133包括两层反渗透膜1331、透过水道网1332、原水导流网1333，一所述反渗透膜1331的底部粘结有透过水道网1332，所述透过水道网1332的底部粘结有另一反渗透膜1331，另一反渗透膜1331的底部粘结有原水导流网1333。两层所述反渗透膜1331均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩。本发明的工作原理：通过进料漏斗2将洗净后的菠萝皮渣送入到粉碎箱1中，旋转电机4带动一研磨辊5转动，一研磨辊5通过皮带轮组7带动另一研磨辊5以及粉碎辊3转动，粉碎辊3将菠萝粉碎，两研磨辊5将其挤压出汁，最后通过斜槽6流入到过滤箱12的u型板9上，气缸17驱动活塞杆16伸长，带动压板8下降，对u型板9的菠萝皮渣进行挤压，使菠萝皮渣的榨汁率更高，从而提高了原料的使用率和酶产率，挤压过程中，通过橡胶垫15所产生的反作用力，提高了挤压效果；挤压后，菠萝汁依次通过第一滤网10、第二滤网14和反渗透膜组13进行过滤，第一滤网10和第二滤网14均为微孔过滤膜，截留下细菌体积为0.2微米以及比细菌体积大的胶体和大分子有机物，两层反渗透膜1331均为醋酸纤维素膜，微孔的直径为0.5-10nm，可对两次过滤后的滤液进行浓缩，提高了酶的纯度与收率，降低了菠萝蛋白酶中水份的含量，缩短了干燥的时间，降低了能耗。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本
技术领域：
的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。当前第1页12