一种甘薯卷叶病毒的RPA检测引物及检测方法和应用与流程

文档序号:20200793发布日期:2020-03-27 20:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种甘薯卷叶病毒的rpa检测引物,其特征在于:所述的rpa检测引物包括如下一个引物对:

上游引物f:5'-aggctgaacttcgagacagctatcgtgccctac-3',如seqidno:1所示;

下游引物r:5'-aagacctgcattctatccctcagatccattcggat-3',如seqidno:2所示。

2.一种利用权利要求1所述的rpa检测引物的甘薯卷叶病毒的rpa快速检测方法,其特征在于:包括以下步骤:

(1)dna提取:对样本进行处理,抽提样本dna;

(2)rpa扩增:以经步骤(1)提取的dna为模板,采用所述rpa检测引物进行恒温扩增反应;

(3)检测:rpa反应结束后,或取反应产物用琼脂糖凝胶电泳检测,出现464bp特异性条带的判断为阳性,无条带的判断为阴性。

3.根据权利要求2所述的甘薯卷叶病毒的rpa快速检测方法,其特征在于:步骤(2)所述rpa反应的反应体系为50μl,其中含模板dna2μl,rehydrationbuffer29.5μl、引物f和r各2.4μl、ddh2o11.2μl、最后再加入280mmol/l醋酸镁溶液2.5μl,将50μl体系加入冻干的重组酶粉中。

4.根据权利要求2所述的甘薯卷叶病毒的rpa快速检测方法,其特征在于:步骤(2)所述rpa反应的条件为39℃恒温扩增20min,冰上终止反应。

5.根据权利要求2所述的甘薯卷叶病毒的rpa检测方法,其特征在于:步骤(3)中,取5μl反应产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。

6.如权利要求1所述的甘薯卷叶病毒的rpa检测引物在制备甘薯卷叶病毒检测试剂盒中的应用。

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