一种peg化伊立替康的轭合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种PEG化伊立替康的轭合前体药物，特别的涉及一种PEG化伊立替 康的轭合物的制备方法及其初步的抗肿瘤活性研究。
【背景技术】
[0002] 伊立替康是一种喜树碱类衍生物，属于细胞毒性抗肿瘤药，具有广谱的抗肿瘤作 用，对小细胞性肺癌、非小细胞性肺癌、子宫颈癌、结肠癌、卵巢癌等有一定疗效，它是通过 抑制细胞存活必需的DNA拓扑异构酶I(Topo I)阻碍单链DNA的再连接而实现细胞毒性作 用的。其化学结构式如下式：
【主权项】
1. 一种PEG化伊立替康的轭合物，其特征在于，所述化合物分子结构如下：
其中L是双功能连接基。
2. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于L是氨基酸。
3. 根据权利要求2所述的化合物，其特征在于所述的氨基酸选自L-氨基酸。
4. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于L为甘氨酸，丙氨酸，赖氨酸，苯丙氨酸， 异亮氨酸，脯氨酸，缬氨酸，组氨酸，亮氨酸，色氨酸，苏氨酸或蛋氨酸中的一种。
5. 根据权利要求1所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于所述化 学修饰剂以两亲性的PEG为载体，采用丁二酸酐对PEG的端羟基进行活化，得到羧基化的聚 乙二醇，用活性酯（NHS)对其活化后再与氨基酸连接制得。
6. 根据权利要求5所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于 PEG-二酸的制备方法按照以下步骤进行： ① 将丁二酸酐加到三氯甲烷中，加热至65°C使溶解； ② 将PEG溶解于三氯甲烷后滴加到上述溶液中，加入吡啶后，65°C下回流反应； ③ 反应完毕后，旋干溶剂，残余物中加饱和NaHCO3溶液，抽滤，滤液用HCl酸化，将pH调 到 4. 0±L 0 ; ④ 氯仿萃取，饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩后加到大量无水乙醚中， 过滤，干燥至恒重即得PEG - DA。
7. 根据权利要求6所述的PEG-二酸的制备方法，其特征在于PEG与丁二酸酐的摩尔 比为1:1~1:40，优选1:6~1:20，反应时间为2~56 11，优选4~24 11。
8. 根据权利要求5~6所述的一种PEG化伊立替康的轭合物制备方法，其特征在于由 PEG的羧酸衍生物与氨基酸连接制备的所述的化学修饰剂的方法按照以下步骤进行： ① PEG-二酸一活性酯的合成 PEG-二酸溶于二氯甲烷中后冰浴至0~5°C，N-羟基丁二酰亚胺（NHS)溶于N，N-二甲 基甲酰胺中后滴加到上述溶液中；Ν，Ν' -二环己基碳酰亚胺（DCC)溶解于二氯甲烷中，再滴 到反应液中。冰浴条件下反应后置于室温下反应。反应完成后，过滤除去白色沉淀，滤液用 饱和NaCl洗涤，无水Na 2SO4干燥，过滤，滤液旋干后加二氯甲烷搅拌溶解，再过滤，滤液再浓 缩后加到大量无水乙醚中，析出白色骨状沉淀PEG -DA一NHS0 ② PEG-二酸一氨基酸的合成 将PEG-二酸一活性酯溶于DMF中，氨基酸溶于饱和NaHCO3*，然后将氨基酸体系滴加 到PEG-二酸一活性酯体系中，室温下搅拌反应。反应结束后，加 I mol · L η HCl至pH为 4±0. 5，用二氯甲烷萃取，饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩后加到乙醚中， 置于-20°C下析出白色固体PEG - DA - AA。
9. 根据权利要求5-8所述的一种PEG化伊立替康的轭合物制备方法，其特征在于PEG 化伊立替康的制备方法是将PEG化学修饰剂与伊立替康通过酯键相连，制备PEG化的伊立 替康，按照以下步骤进行： ① PEG-二酸一氨基酸溶于二氯甲烷中后冰浴至1°C ; ② 伊立替康溶于二氯甲烷中，再滴加到上述溶液中，加入DMAP、DCC，并于冰浴条件下反 应一段时间后再于室温反应； ③ 反应终止后，用0. 06 mol · L ^1HCl洗涤反应液8次至HCl相无黄色出现，二氯甲烷 相用无水Na2SO 4干燥，过滤，滤液旋干得黄色黏状物，加异丙醇，30°C下搅拌溶解，-20°C下 静置一段时间后得淡黄色固体PEG - DA - AA - CPT-11。
10. 根据权利要求8所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于步骤① 中PEG-DA与NHS的摩尔比为l:l~l:40，优选l:6~l:20，反应时间为2~56h，优选8~24h， 步骤②中PEG-DA-NHS与氨基酸的摩尔比为1 :1~1:40，优选1:4~1:20，反应时间为2~56 h，优选 8~24 h。
11. 根据权利要求9所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于PEG- DA-AA与CPT-Il的摩尔比为优选1:6~1:20,反应时间为2~56 h，优选8~24 h。
12. 根据权利要求5~9所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于PEG 使用前应通过真空干燥而除水。
13. 根据权利要求5-9所述的一种PEG化伊立替康轭合物的制备方法，其特征在于所述 的PEG修饰剂的分子量为2 000~20 000,优选2 000~10 000。
【专利摘要】本发明公开了一种PEG化伊立替康的轭合物，化学分子式如（1）。公开了制备轭合物的方法和药学性质研究，包括体外释放实验及MTT实验。采用丁二酸酐使聚乙二醇的端羟基羧基化，活性酯（NHS）对其活化后再以氨基酸为连接臂将其与伊立替康连接，得PEG化伊立替康。经过PEG修饰后的伊立替康增强了药物的水溶性，降低了药物毒副作用，同时实现了体外缓释效应。
【IPC分类】A61P35-00, C08G65-48, A61K47-48, A61K31-4745
【公开号】CN104650344
【申请号】CN201410553120
【发明人】高子彬, 齐献利, 张丽男, 戴甜, 谷艳玲, 张晓博, 孙勇军, 吴韶梅, 谢英花, 刘磊
【申请人】河北科技大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2014年10月20日