素抗体Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、 抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗桔青霉素抗体Ig、抗伏马毒素抗体Ig、抗青霉 酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体Ig等）的酵母菌菌体液接种于YH)培养基中培养过夜，次日按 5%的接种量接种于装有培养基的中间发酵罐中，30°C，250r/min培养至A_值为2~6。按 10%的接种量接种到装有发酵培养基的大型发酵罐中发酵168h。发酵罐温度控制在30°C， 搅拌速率为550r/min，溶氧控制在30%，流加氨水控制在pH 5~7。取上清液，就大量获得 重组酵母菌发酵制备的8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种的菌体液。
[0115] 其间，必须定期取样纯化后用三氯乙酸沉淀法或其他方法浓缩30-70倍后跑电泳 检验目的蛋白含量，并将所取样品纯化后采用ELISA法检测抗原结合活性。只有当目的蛋 白含量和抗原结合活性都达到企业标准的指标后，才继续后续发酵过程。
[0116] 如选择"甲醇营养型酵母"作为重组工程菌，则最好采用三步发酵法对重组酵母菌 进行发酵及诱导。具体步骤如下：
[0117] (1)甘油分批培养：按5%的接种量将二级种子液接种于灭菌的盛有200L发酵培 养基的500L发酵罐中，设定初始发酵参数：搅拌转速为300r/min，通气量为45L/min，罐压 为0. 05MPa，温度为30°C，控制恒定pH值，通过调节搅拌速度、通气量及罐压等措施使DO值 维持在20%~35%，共20h。
[0118] (2)甘油补料分批培养：当DO值陡然上升至100%时，转入短时间的甘油补料分批 培养阶段，以进一步提高菌体密度。以18. 15mV(h *L)的速率流加补料培养基，维持4h，在 此阶段同样采取提高搅拌速度、增加通气量、增加罐压等措施维持DO值在20%~35%，停 止补加甘油后，DO值上升至100%后，继续维持"甘油饥饿"状态lh。
[0119] 菌体培养阶段每2h取样1次，测定菌体A 600值及菌体湿重。
[0120] (3)甲醇补料分批诱导表达阶段：将温度调至最适诱导温度28°C，诱导培养基的 流加速率先以3. 6ml (h *L)维持4h，再以7. 2ml (h *L)流加2h，然后以11. 7mV(h吨）流加至 诱导结束，通过调节搅拌速度、通气量、罐压和甲醇流加速率等措施使DO值维持在20%~ 35%。诱导阶段共48h，取上清液，就大量获得重组酵母菌发酵制备的8种抗霉菌毒素单抗 Ig之其中一种的菌体液。
[0121] 其间，同样必须定期取样纯化后用三氯乙酸沉淀法或其他方法浓缩30-70倍后跑 电泳检验目的蛋白含量，并将所取样品纯化后采用ELISA法检测抗原结合活性。只有当目 的蛋白含量和抗原结合活性都达到企业标准的指标后，才继续后续发酵过程。
[0122] 采用以上方法但不限于以上方法，通过采用各种相对应的方法将克隆了抗霉菌毒 素抗体Ig(如抗黄曲霉毒素抗体Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲 霉毒素抗体Ig、抗桔青霉素抗体Ig、抗伏马毒素抗体Ig、抗青霉酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体 Ig等）的大肠杆菌或者各种酵母菌【如毕赤酵母（Pichia)、假丝酵母（Candida)、多型汉逊 酵母（Hansenula polymorpha)等"甲醇营养型酵母"以及"裂殖酵母"等】和其他适合的优 质菌之单菌落进行无限次发酵放大，就可分别大量得到含克隆了抗霉菌毒素抗体Ig(如抗 黄曲霉毒素抗体Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗 桔青霉素抗体Ig、抗伏马毒素抗体Ig、抗青霉酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体Ig等）的大肠杆 菌或者各种酵母菌（如"甲醇营养型酵母"和"裂殖酵母"等）和其他适合的优质菌之菌体 液。
[0123] 六、菌体收集
[0124] 发酵培养结束后，用管式连续流式离心机或其他离心机对上清液进行离心，从上 清液中离心收集表达有8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种（如抗黄曲霉毒素抗体Ig、抗玉 米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗桔青霉素抗体Ig、抗伏马 毒素抗体Ig、抗青霉酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体Ig等）的重组大肠杆菌湿菌体或重组酵母 菌湿菌体，分装后于20°C以下保存。
[0125] 七、抗霉菌毒素单抗Ig的组合和重组工程菌湿菌体除菌和干燥加工
[0126] 将离心收集的表达有8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种（如抗黄曲霉毒素抗体 Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗桔青霉素抗体 Ig、抗伏马毒素抗体Ig、抗青霉酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体Ig等）的重组大肠杆菌湿菌体 (或重组酵母湿菌体）采用巴氏消毒和超高温瞬时杀菌法以及其他不会影响抗体活性的消 毒方法除菌（如果整个过程在无菌条件下完成，则可不经除菌工序）；最后，采用冷冻干燥 机或中低温喷雾干燥机或者流化床干燥机以及其他形式的干燥设备进行干燥，除去水份。 或者将这一种与其他一种或2-7种的重组大肠杆菌湿菌体（或重组酵母湿菌体）置入搅拌 机中充分混合均匀；然后，采用巴氏消毒和超高温瞬时杀菌法以及其他不会影响抗体活性 的消毒方法除菌（如果整个过程在无菌条件下完成，则可不经除菌工序）；最后，采用冷冻 干燥机或中低温喷雾干燥机或者流化床干燥机以及其他形式的干燥设备进行干燥，除去水 份。即制得基因重组的8种抗霉菌毒素单抗Ig中之一种干粉或2-8种组合干粉。
[0127] 八、抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC菌体破碎制备以及可溶性抗体
[0128] 由于工程菌中表达的抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC都是胞内物质，而且还有 不少是不溶性的包含体；为了获得更高纯度的抗体，必须将把细胞破碎，才能将这些细胞内 表达的抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC释放出来进行后续分离纯化。本发明采用以下 两种方法进行细胞破碎，但不限于这两种方法：
[0129] ( 一）酶解-超声法破碎
[0130] 1.酶解
[0131] 将离心收集的抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC的重组大肠杆菌湿菌体或重组 酵母湿菌体用生理盐水洗涤，再加入5-10倍体积的Solution A和适量的溶菌酶，混合均 匀。
[0132] 2?超声波破碎
[0133] 将酶解后重组大肠杆菌菌体液或重组酵母菌体置于冰浴中，分别在一定功率 (400, 500, 600W)下进行超声波破碎处理0~120次（每次超声4s，间隔8s)。
[0134] (二）高压匀浆破碎
[0135] 将离心收集的抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC的重组大肠杆菌湿菌体或重组 酵母湿菌体用去离子水悬浮，采用细胞高压匀浆机在60-100MPa压力下，连续高压匀浆2-5 次，每次通过匀浆机的裂解液用冰浴冷却，使得匀浆器出口温度不超过40°C。
[0136] 另外，还可采用化学渗透法和冻融法以及单纯超声法等方法破碎抗霉菌毒素单抗 Ig和复合单抗IgC的重组大肠杆菌湿菌体或重组酵母湿菌体。
[0137] 经破碎处理后，将细胞裂解液高速离心，即获得抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗 IgC之可溶性抗体蛋白的上清和包含体。
[0138] 九、食品和粮食中用的以及用于预防和治疗畜禽和水产霉菌毒素中毒病的抗霉菌 毒素单抗Ig和复合单抗IgC菌体和可溶性抗体蛋白的纯化程序
[0139] 1.湿菌体的纯化和干燥：
[0140] 将离心收集的表达有8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种（如抗黄曲霉毒素抗体 Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗桔青霉素抗体 Ig、抗伏马毒素抗体Ig、抗青霉酸抗体Ig、抗T-2毒素抗体Ig等）的重组大肠杆菌湿菌体 (或重组酵母湿菌体）经任何常规方法离心、任何常规方法超滤和任何常规方法凝胶层析 以及任何常规方法亲和层析进行纯化，可将纯化后的菌体直接使用，也可将其再经过冷涑 干燥或低温喷雾干燥制成高纯度干粉使用。也可将8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种与 其他一种或2-7种的重组大肠杆菌湿菌体（或重组酵母湿菌体）置入搅拌机中充分混合均 匀；然后经任何常规方法离心、任何常规方法超滤和任何常规方法凝胶层析以及任何常规 方法亲和层析进行纯化；可将纯化后的复合湿菌体直接使用，也可将其再经过冷涑干燥或 低温喷雾干燥制成高纯度复合抗体干粉使用。
[0141] 2.菌体破碎后的可溶性抗体蛋白的纯化和干燥：
[0142] 将离心收集的其中一种抗霉菌毒素单抗Ig可溶性抗体蛋白的上清和包含体溶液 经任何常规方法离心、超滤和凝胶层析以及亲和层析进行纯化，可将纯化后的可溶性抗体 蛋白液经过细菌病毒滤除处理后直接使用；也可将其经过细菌病毒滤除处理后再冷涑干燥 或低温喷雾干燥制成高纯度可溶性抗体蛋白干粉使用。另外，可将8种抗霉菌毒素单抗Ig 之其中一种与其他一种或2-7种的可溶性抗体蛋白的上清和包含体溶液置入搅拌机中充 分混合均匀；然后经任何常规方法离心、任何常规方法超滤和任何常规方法凝胶层析以及 任何常规方法亲和层析进行纯化；可将纯化后的可溶性复合抗体蛋白液经过细菌病毒滤除 处理后直接使用；也可将其经过细菌病毒滤除处理后再经过冷涑干燥或低温喷雾干燥制成 高纯度复合可溶性抗体蛋白干粉使用。细菌病毒滤除处理设备可采用美国Pal 1 Ultrafine Filtration Company制造的或其他公司制造的细菌病毒滤除装置，其第一道细菌滤除装置 是用0. 22 ym膜除菌过滤器除去沙门菌（Salmonella)等细菌，第二道支原体滤除装置是用 0. 1 um膜除支原体过滤器除去支原体，第三道病毒滤除装置是用Ultipor VFTM DV50除病 毒过滤器除去包括禽流感病毒、肠病毒在内的多种病毒。这种经菌体破碎和纯化以及滤除 细菌病毒处理后的高纯度可溶性抗体蛋白是生产更高品质的预防和治疗动物霉菌毒素中 毒的药品和保健食品的优质原料。
[0143] 如果作为粮食储存防霉菌毒素污染用或者用于生产饲料和饲料添加剂以及一般 兽药，离心收集的其中一种抗霉菌毒素单抗Ig湿菌体或者8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中 一种与其他一种或2-7种的湿菌体可不必经过离心、超滤和层析等纯化以及除菌和除病毒 工序而直接干燥制成干粉使用。同樣，离心收集的其中一种或抗霉菌毒素单抗Ig可溶性抗 体蛋白的上清和包含体溶液或者8种抗霉菌毒素单抗Ig之其中一种与其他一种或2-7种 的可溶性抗体蛋白混合的的上清和包含体溶液也可不必经过离心、超滤和层析等纯化以及 除菌和除病毒工序而直接干燥制成可溶性抗体蛋白干粉使用。
[0144] 如果要将所制得的系列菌体液或可溶性抗体蛋白的液体或者其干粉用于生产注 射剂，用于霉菌毒素中毒的救治，则菌体液或可溶性抗体蛋白经离心、超滤和凝胶层析以及 亲和层析纯化并且滤除细菌病毒处理后，还要再经过任何常规方法去除热原质等工序进一 步纯化。
[0145] 十、抗霉菌毒素单抗Ig和复合单抗IgC干粉纳米化
[0146] 取所制得的基因重组的有代表性8种抗霉菌毒素单抗Ig中之一种（如抗黄曲霉 毒素抗体Ig、抗玉米赤霉烯酮抗体Ig、抗呕吐毒素抗体Ig、抗赭曲霉毒素抗体Ig、抗桔青霉