1.1L旋蒸剩下的乙醇提取液加入27.5L水，在100°C回流2h，最后，得到的冬凌草甲素的质量是原料重量的0.424%。
[0076]将40L HP-20型号大孔树脂填充入直径为12cm高度为2m的玻璃层析柱，上样浓度为1.5mg/mL，流速350mL/min，上样时间为12h，洗脱流速为400mL/min，水洗200L后，用200L体积含量为20%乙醇水溶液洗脱杂质，后用900L体积含量为20%乙醇水溶液洗脱冬凌草甲素产品。回收率为87.01%，产品纯度为55.17%。
[0077]首先，配置14.62L体积含量为29%的甲醇水溶液，然后将乙酸乙酯和该甲醇水溶液等体积混合后形成三种溶液两相体系，即单相萃取液体体积与树脂预纯化得到浸膏中含有的纯的冬凌草甲素质量比为1:15，并且该量度的单位为L/g。萃取后，收集乙酸乙酯相，旋转蒸干后得到冬凌草甲素浸膏。该单元回收率为88.07%，产品纯度提高到74.17%。
[0078]配置体积含量为33 %的甲醇水溶液，将萃取后得到的浸膏溶解于该甲醇水溶液中，控制冬凌草甲素的浓度为53mg/mL，随后超声波清洗器中超声，超声温度为25°C，超声时间为18min，白色的大粒晶核析出，6°C冰箱保存2天，后_8°C结晶llh。该单元的回收率为90 %，最后得到的冬凌草甲素的纯度为96.03 %。
[0079]实施例9:将5kg的冬凌草茎和叶粉碎过20目筛子，将粉末浸入到55L的无水乙醇中，在80°C下回流提取2h后，过滤，滤渣再用55L的无水乙醇在相同条件下重复以上的操作。两次提取液合并后旋蒸至1.1L，将1.1L旋蒸剩下的乙醇提取液加入27.5L水，在100°C回流2h，最后，得到的冬凌草甲素的质量是原料重量的0.427%。
[0080]将40L HP-20型号大孔树脂填充入直径为12cm高度为2m的玻璃层析柱，上样浓度为lmg/mL，流速300mL/min，上样时间为12h，洗脱流速为300mL/min，水洗200L后，用240L体积含量为20 %乙醇水溶液洗脱杂质，后用1200L体积含量为20 %乙醇水溶液洗脱冬凌草甲素产品。回收率为92.13%，产品纯度为61.11%。
[0081 ] 首先，配置21.6L体积含量为29 %的甲醇水溶液，然后将乙酸乙酯和该甲醇水溶液等体积混合后形成三种溶液两相体系，即单相萃取液体体积与树脂预纯化得到浸膏中含有的纯的冬凌草甲素质量比为1:10，并且该量度的单位为L/g。萃取后，收集乙酸乙酯相，旋转蒸干后得到冬凌草甲素浸膏。该单元回收率为93.03%，产品纯度提高到77.78%。
[0082]配置体积含量为33 %的甲醇水溶液，将萃取后得到的浸膏溶解于该甲醇水溶液中，控制冬凌草甲素的浓度为48mg/mL，随后超声波清洗器中超声，超声温度为25°C，超声时间为20min，白色的大粒晶核析出，4°C冰箱保存2天，后_8°C结晶12h。该单元的回收率为90.01%，最后得到的冬凌草甲素的纯度为98.02%。
[0083]实施例10:将5kg的冬凌草茎和叶粉碎过20目筛子，将粉末浸入到65L的无水乙醇中，在80°C下回流提取a后，过滤，滤渣再用65L的无水乙醇在相同条件下重复以上的操作。两次提取液合并后旋蒸至1.3L，将1.3L旋蒸剩下的乙醇提取液加入32.5L水，在100°C回流2h，最后，得到的冬凌草甲素的质量是原料重量的0.421%。
[0084]将40L HP-20型号大孔树脂填充入直径为12cm高度为2m的玻璃层析柱，上样浓度为1.4mg/mL，流速330mL/min,上样时间为12.5h，洗脱流速为380mL/min，水洗280L后，用280L体积含量为20 %乙醇水溶液洗脱杂质，后用10500L体积含量为20 %乙醇水溶液洗脱冬凌草甲素产品。回收率为89.83 %，产品纯度为58.21 %。
[0085]首先，配置38.5L体积含量为29%的甲醇水溶液，然后将乙酸乙酯和该甲醇水溶液等体积混合后形成三种溶液两相体系，即单相萃取液体体积与树脂预纯化得到浸膏中含有的纯的冬凌草甲素质量比为1:9，并且该量度的单位为L/g。萃取后，收集乙酸乙酯相，旋转蒸干后得到冬凌草甲素浸膏。该单元回收率为93.03%，产品纯度提高到77.80%。
[0086]配置体积含量为33 %的甲醇水溶液，将萃取后得到的浸膏溶解于该甲醇水溶液中，控制冬凌草甲素的浓度为51mg/mL，随后超声波清洗器中超声，超声温度为25°C，超声时间为15min，白色的大粒晶核析出，5°C冰箱保存2天，后_8°C结晶12h。该单元的回收率为90.64%，最后得到的冬凌草甲素的纯度为97.04%。
【主权项】
1.一种利用冬凌草来制备高纯度冬凌草甲素的方法，其特征在于包括如下步骤: 1)冬凌草甲素的两次提取工艺 用于该工艺设计中的冬凌草茎和叶首先要经过粉碎，其粉碎物进行两种溶剂提取，首先，无水乙醇回流提取，提取时间为l_3h，提取原料质量与提取溶剂的体积比为1:10-13，该量度的单位为g/mL ;提取温度为80°C，提取两次后合并提取液旋转蒸发至提取液体积是原提取液体积的1/100 ;向提取器中加水，其体积为乙醇所用量的一半，100°C下，回流提取1-3h； 2)HP-20大孔吸附树脂工业预纯化实验设计 提供了两种规模的大孔树脂柱层析实验，即冬凌草甲素的小试规模实验和中试规模实验，按照规模选择其一；具体如下: 用于小试规模的玻璃填充柱的直径和高度分别为3cm和100cm，HP-20型号大孔树脂的填充体积为300mL，上样浓度为0.5-0.65mg/mL，流速2_3.5mL/min，上样体积为5-6L ;洗脱流速为2-3.5mL/min，水洗1500_2000mL后，用体积含量为20%的乙醇洗脱，前1500_2000mL用于除杂，随后接7000-9000mL含有冬凌草甲素的洗脱液； 中试规模的层析柱的直径和高度分别为12cm和2m ;将40L的HP-20大孔树脂填充入柱子中，控制上样液浓度范围为1-1.5mg/mL，上样的流速范围300-350mL/min，上样时间为I1-13h;洗脱步骤中流速为300-400mL/min，用200-280L的水洗脱后，在用200-280L的体积含量为20%乙醇水溶液除杂，最后，用900-1200L的体积含量为20%无水乙醇溶液用于洗脱冬凌草甲素； 3)三种溶剂(乙酸乙酯-甲醇-水溶液)萃取脱色并进一步除杂 首先，配置体积含量为29 %的甲醇水溶液，然后将乙酸乙酯和该甲醇水溶液等体积混合后形成三种溶液两相体系；单相萃取液体体积与树脂预纯化得到浸膏中含有的纯的冬凌草甲素质量比为1:9-15，该量度的单位为L/g;萃取后，收集乙酸乙酯相，旋转蒸干后得到冬凌草甲素浸膏； 4)超声波辅助冷却结晶得到冬凌草甲素的晶体 配置体积含量为33 %的甲醇水溶液，将萃取后得到的浸膏溶解于该甲醇水溶液中，控制冬凌草甲素的浓度为45-53mg/mL，随后超声波清洗器中超声，超声温度为25°C，超声时间为15-20min，白色的大粒晶核析出，4_6°C冰箱保存2天，后_8°C结晶10_12h ;离心得到固体结晶产品，用2L的水洗涤产品两次，每次分别静置于_8°C的结晶器中2h后离心得到白色粉末，烘干机烘干得到冬凌草甲素粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤I)提取原料质量与提取溶剂的体积比为1:11，该量度的单位为g/mL，乙醇的提取时间为2h，水的提取时间也为2h。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)小试规模的工艺中，上样液浓度为0.55mg/mL，流速为2.5mL/min，上样体积为6L ;洗脱流速为2mL/min，水洗液的体积为1800mL，用2000mL体积含量为20%乙醇水溶液体积为除杂，随后用9000mL的体积含量为20%乙醇水溶液收集预纯化得到的冬凌草甲素产品；步骤2)中试规模工艺中，上样液浓度为lmg/mL，上样流速为300mL/min，上样时间为12h，洗脱流速为300mL/min ;水洗液的体积200L，用240L体积含量为20%乙醇水溶液用于除杂，随后，用1200L的体积含量为20%乙醇水溶液收集预纯化得到的冬凌草甲素产品。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)单相萃取液体体积与树脂预纯化得到浸膏中含有的纯的冬凌草甲素质量比为1:10，该量度的单位为L/g。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤4)将萃取后得到的浸膏溶解于体积含量为33%的甲醇中，形成浓度为48mg/mL的冬凌草甲素过饱和溶液，放置于超声反应器中的超声时间20min ;大量晶体吸出后，4°C冰箱保存2天，后_8°C结晶12h。
【专利摘要】本发明属于生物化工领域，尤其涉及一种用冬凌草为原料制备高纯度冬凌草甲素的方法。该工艺充分利用了分离提取过程中溶剂与化合物相似性原理实现了各个操作单元间准确耦合，工艺主要包括以下步骤：调节溶剂极性设计两次回流提取工艺得到含有冬凌草甲素的水溶液；设计大孔树脂动态分离工艺从该水溶液中初步富集冬凌草甲素；三种溶剂两相萃取技术对预纯化后得到的浸膏脱色并进一步除杂；超声辅助冷却结晶技术进一步得到冬凌草甲素晶体。本发明克服了现有制备方法中的有机溶剂消耗量大，工艺复杂，难以实现大规模生产的缺点，开发了一条低成本，高效益的，高纯度产出的冬凌草甲素中式生产新工艺。
【IPC分类】C07D493-08
【公开号】CN104744489
【申请号】CN201510185265
【发明人】袁其朋, 刘婷婷, 陈振娅
【申请人】北京化工大学
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月19日