飞行时间质谱）以及Sequenom MassArray技术所需要的其他试剂和 仪器；利用TaqMan探针技术确定rsl800818的多态性或基因型所需的试剂和/或仪器 包括TaqMan探针、PCR引物对、定量PCR仪和进行基因分型的软件（如7500System SDS software)以及TaqMan探针技术所需要的其他试剂；SNP芯片包括基于核酸杂交反应的芯 片、基于单碱基延伸反应的芯片、基于等位基因特异性引物延伸反应的芯片、基于"一步法" 反应的芯片、基于引物连接反应的芯片、基于限制性内切酶反应的芯片、基于蛋白DNA结合 反应的芯片，及基于荧光分子DNA结合反应的芯片。
[0030] 所述产品可为试剂或试剂盒，还可为由试剂或试剂盒与仪器组成的系统，如由引 物和DNA测序仪组成的系统，由PCR试剂和DNA测序试剂和DNA测序仪组成的系统，由 TaqMan探针、PCR引物对、定量PCR仪和进行基因分型的软件以及TaqMan探针技术所需要 的其他试剂组成的系统，由PCR引物对、单碱基延伸引物、芯片、PCR仪和进行基因分型的软 件以及Sequenom MassArray技术所需要的其他试剂和仪器组成的系统。
[0031] 本发明的一个实施例中，采用Sequenom MassArray技术确定rsl800818的多态性 和基因型。所述PCR引物对在序列上没有特殊要求，只要能扩增出包括rsl800818在内的 基因组DNA片段即可，具体可为序列表中SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的单链DNA。所 述单碱基延伸引物具体可为序列表中SEQ ID No. 3所示的单链DNA。Sequenom MassArray 技术所需要的其他仪器为MassARRAY Nanodispenser RS1000点样仪（SEQUENOM公司）。 Sequenom MassArray技术所需要的芯片为SpectroCHIP (Sequenom)芯片。所述进行基因分 型的软件具体为MALDI-T0F和TYPER 4. 0软件（sequenom)。
[0032] 本发明在一个来自中国人群的样本（430个发热伴血小板减少综合征患者和633 个新布尼亚病毒隐性感染者）中发现rsl800818是与发热伴血小板减少综合征相关的单核 苷酸多态性。可将检测rsl800818的多态性或基因型的物质与其它物质（如检测其它的与 发热伴血小板减少综合征相关的单核苷酸多态性或基因型的物质）联合在一起制备筛查 中国人群中发热伴血小板减少综合征患者的产品。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0034] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0035] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0036] 实施例1检测TOGF-B基因rsl800818位点基因型方法的建立
[0037] 1、基因组DNA的提取
[0038] 提取待测样品基因组DNA，以其为模板进行基因型检测。
[0039] 2、引物的设计与合成
[0040] 使用 Sequenom 公司 Genotyping Tools 及 MassARRAY Assay Design 软件设计 待测SNP位点的PCR扩增引物及单碱基延伸引物，并交由生物公司合成。检测TOGF-B 基因rsl800818位点基因型的特异性引物对的序列为：正向引物5' -ACGTTGGATGCCGC AGAGGACGCCCAGAG-3'（序列表中的 SEQ ID No. 1);反向引物 5' -ACGITGGATGACAGGTGGA CGCGGCGCGA-3'（序列表中的SEQ ID No. 2)。用于单碱基扩增反应的延伸引物序列为 5'-ccCGGTCCGTCTGCCCGCC-3'（序列表中的 SEQ ID No.3)。
[0041] 3、检测TOGF-B基因rsl800818位点基因型方法的建立
[0042] 3. 1PCR扩增：PCR扩增在384孔板中进行，每个反应体系总体积为5 y L，按表1配 制PCR反应体系。
[0043] 表1每个PCR反应体系的组分
【主权项】
1. 检测人基因组中rsl800818的多态性或基因型的物质在制备筛查发热伴血小板减 少综合征患者产品中的应用。
2. 检测人基因组中rsl800818的多态性或基因型的物质在制备检测发热伴血小板减 少综合征易感性产品中的应用。
3. 检测人基因组中rsl800818的多态性或基因型的物质在制备检测与发热伴血小板 减少综合征相关的单核苷酸多态性的产品中的应用。
4. 检测人基因组中rsl800818的多态性或基因型的物质在制备鉴定或辅助鉴定与发 热伴血小板减少综合征相关的单核苷酸多态性的产品中的应用。
5. 人基因组中rsl800818的多态性或基因型在制备筛查发热伴血小板减少综合征患 者产品中的应用。
6. 人基因组中rsl800818的多态性或基因型在制备检测发热伴血小板减少综合征易 感性产品中的应用。
7. 含有检测人基因组中rsl800818的多态性或基因型的物质的产品，为a)-d)中的任 一种产品： a) 检测与发热伴血小板减少综合征相关的单核苷酸多态性或基因型的产品； b) 鉴定或辅助鉴定与发热伴血小板减少综合征相关的单核苷酸多态性或基因型的产 品； c) 筛查发热伴血小板减少综合征患者产品； d) 检测发热伴血小板减少综合征易感性产品。
8. 根据权利要求7所述的产品，其特征在于：所述检测人基因组中rsl800818的多态 性或基因型的物质为扩增包括rsl800818在内的基因组DNA片段的PCR引物和/或单碱基 延伸引物。
9. 根据权利要求8所述的产品，其特征在于：所述PCR引物为序列表中SEQIDNo. 1所 示的单链DNA和序列表中SEQIDNo. 2所示的单链DNA。
10. 根据权利要求8所述的产品，其特征在于：所述单碱基延伸引物为序列表中SEQID No. 3所示的单链DNA。
【专利摘要】本发明公开了rs1800818在检测新布尼亚病毒引起的发热伴血小板减少综合征中的应用。本发明所保护的技术方案是检测人基因组中rs1800818的多态性或基因型的物质在制备筛查发热伴血小板减少综合征中的应用和检测人基因组中rs1800818的多态性或基因型的物质在制备预测发热伴血小板减少综合征患者病情的产品中的应用。可将检测rs1800818的多态性或基因型的物质与其它物质(如检测其它的与发热伴血小板减少综合征相关的单核苷酸多态性或基因型的物质)联合在一起制备筛查发热伴血小板减少综合征患者或预测发热伴血小板减少综合征患者病情的产品。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104789673
【申请号】CN201510174043
【发明人】刘玮, 张小爱, 曹务春
【申请人】中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月13日