一种美登叶酸的提纯方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物化学领域，特别涉及一种美登叶酸的提纯方法。
【背景技术】
[0002] 美登叶酸为三萜类化合物，具有抗炎、抗癌活性，CAS号84108-17-8,分子式 CmH48O4，分子量472. 7,分子结构式如下：
卫矛为卫矛科卫矛属植物卫矛Euonymus alatus (Thunb.)Sieb.，以根，带翅的枝及叶 入药，具有抗炎、抗肿瘤及降血糖等活性。
[0003] 通过文献检索，现有美登叶酸备方法是采用有机试剂提取和硅胶分离方法。由于 操作复杂，制备量较小，所得产品纯度低，很难实现工业化生产。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种操作简便的美登叶酸的制 备方法。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种美登叶酸的提纯方法，其特征 在于以下步骤： 1) 取干燥的卫矛原料粉碎，过20~60目筛，收集粗粉备用； 2) 按0. 1~0. 5g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸 溶液，调节PH值4~5 ; 3) 将卫矛粗粉加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45~50°C，恒温酶 解l~2h，而后升温至60~80°C，加热20~40min，进行灭酶，即得酶解混合物； 4) 在上述酶解混合物中加入料液比为1 :3~5、30%的乙醇水溶液进行超声提取，过滤， 滤渣超声提取1~3次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用； 5) 将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10~20%的 乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液； 6) 洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美 登叶酸。
[0006] 步骤3)所述的卫矛粗粉加入与纤维素酶水溶液的质量体积比为1 :1~5。
[0007] 步骤4)所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~70°C。
[0008] 步骤5)中所述大孔吸附树脂为X-5、LSA-21、WLD中的一种 步骤6)所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混 合比例9-18 :12-24 :1-2 :8-16,取下相做固定相，上相做流动相。
[0009] 采用本法制备美登叶酸，工艺简便易操作，产品纯度高，易于实现工业化生产。
[0010] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 : 取干燥的卫矛原料粉碎，过20目筛，收集粗粉备用；按0.1 g纤维素酶/L水的比例将纤 维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节PH值为4 ;将卫矛粗粉按质量体积比 为1 :1加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45°C，恒温酶解lh，而后升温 至60°C，加热20min，进行灭酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比为1 :3、 30%的乙醇水溶液在频率为20KHz，温度为50°C进行超声提取，过滤，滤渣超声提取1次，合 并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上X-5型大孔吸附树脂柱，先用 2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲醇-正 丙醇-水溶剂系统，混合比例为9 :12 :1 :8,取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流 色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含量94. 7%。
[0012] 实施例2: 取干燥的卫矛原料粉碎，过40目筛，收集粗粉备用；按0.3g纤维素酶/L水的比例将纤 维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节PH值为4 ;将卫矛粗粉按质量体积比 为1 :3加入纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45°C，恒温酶解I. 5h，而后升温至 70°C，加热30min，进行灭酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比为1 :4、30% 的乙醇水溶液在频率为40KHz，温度为60°C下进行超声提取，过滤，滤渣超声提取2次，合 并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上LSA-21型大孔吸附树脂柱， 先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用15%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲 醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例为10 :15 :2 :10,取下相做固定相，上相做流动相，采用 高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含 量 94. 9%。
[0013] 实施例3: 取干燥的卫矛原料粉碎，过60目筛，收集粗粉备用；按0.5g纤维素酶/L水的比例将 纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节PH值为5 ;将卫矛粗粉按质量体积 比为1 :5加入纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到50°C，恒温酶解2h，而后升温至 80°C，加热40min，进行灭酶，即得酶解混合物；在酶解混合物中加入料液比为1 :5、30%的 乙醇水溶液在频率为40KHz，温度为70 °C下进行超声提取，过滤，滤渣超声提取3次，合并 滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上WLD型大孔吸附树脂柱，先用5 倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲醇-正 丙醇-水溶剂系统，混合比例为18 :24 :2 :16,取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆 流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含量为 95. 1%〇
【主权项】
1. 一种美登叶酸的提纯方法，其特征在于以下步骤： 1) 取干燥的卫矛原料粉碎，过20~60目筛，收集粗粉备用； 2) 按0. 1~0. 5g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸 溶液，调节pH值4~5 ; 3) 将卫矛粗粉加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45~50°C，恒温酶 解l~2h，而后升温至60~80°C，加热20~40min，进行灭酶，即得酶解混合物； 4) 在上述酶解混合物中加入料液比为1 :3~5、30%的乙醇水溶液进行超声提取，过滤， 滤渣超声提取1~3次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用； 5) 将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10~20%的 乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液； 6) 洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美 登叶酸。2. 根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤3)所述的卫矛粗粉加入 与纤维素酶水溶液的质量体积比为1 :1~5。3. 根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤4)所述超声提取的频率 为 20~40KHz，温度为 50~70°C。4. 根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤5)中所述大孔吸附树脂 为 X-5、LSA-21、WLD 中的一种。5. 根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤6)所述的高速逆流色谱 分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例9-18 :12-24 :1-2 :8-16,取 下相做固定相，上相做流动相。
【专利摘要】本发明公开了一种美登叶酸的提纯方法。方法如下：取干燥的卫矛原料粉碎，过筛，加入酶解水溶液，在酸性的条件下酶解1~3h，酶解完成后加入提取溶剂超声提取，过滤，滤渣提取1~3次，合并提取液减压浓缩至无醇味，浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。采用本发明制备美登叶酸，工艺操作简便，成本低，易于实现工业化生产。
【IPC分类】C07J63/00
【公开号】CN104945462
【申请号】CN201510270134
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年5月26日