一种防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法_3

文档序号:9230938阅读:来源:国知局
件下进行超声波辅助提取;然后加入混合物料总重量1. 〇 %的混合酶进行酶解,用乳酸调 节pH值为6. 2,酶解3h,最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物,乙醇和丙醇混合 的质量比为1:2,控制温度至70°C保持3. 5h,过滤,得第一滤液;添加滤渣2倍重量的水,控 制温度90°C保持2h,然后降温至30°C,过滤,得第二滤液;将第一滤液和第二滤液按照质量 比3:2合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物;
[0054] 所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比3:2:2:1均匀混 合。
[0055] 2.木肩粉的制备:
[0056] 所述木肩粉的制备方法,包括如下步骤:将无发霉、无病虫锯木末或废木肩除去杂 物,置于装有质量百分比浓度〇. 5%的碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清 洗lOmin,冲洗、沥干,放入蒸汽爸中于0. 35MPa蒸煮25min,取出,沥干,与植物油按质量比 100:1均勾混合,然后将混合物置微波干燥机于2000W、120°C微波福照5min,其中微波福照 10s,停留10s,最后超微粉碎至粒径0.4mm,密封包装即得木肩粉。
[0057] 3.包被壳聚糖的制备:
[0058] 所述包被壳聚糖的制备方法,包括如下步骤:取壳聚糖加入其质量40%的质量百 分比浓度为11%的α-环状糊精水溶液中,制成软材,用20目筛制粒,得湿颗粒,置微波干 燥机中于功率2000W、70°C干燥5min,用20目筛快速整粒即得包被壳聚糖。
[0059] 下述实施例2-7中所使用的中草药提取物、木肩粉及包被壳聚糖均为实施例1制 备,杏鲍菇菌种为福建省漳州市龙海食用菌研宄所提供的"龙海3号",其它原料均为市购。
[0060] 实施例2
[0061] -种防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0062] 1)取保存好的杏鲍菇斜面菌种0. 2cm2的菌种块2块接种于平板培养基进行活化, 25°C恒温培养10天,如此活化2次,得平板种子;
[0063] 2)将平板种子用直径为0. 5cm的打孔器截取0. 2cm2的菌种块3块接入250mL三角 瓶中,液体种子培养基装液量为lOOmL,于25°C恒温培养2天,然后放入恒温摇床中,25°C、 100r/min振荡培养3天得液体种子;
[0064] 3)将液体种子以10%的接种量接种于50〇1^摇瓶中,摇瓶培养基装液量25〇11^,于 25°C、150r/min振荡恒温培养4天得摇瓶种子;
[0065] 4)将摇瓶种子以10%的接种量接种于5L种子罐中,种子罐培养基装液量3L,于 25°C、通气量4L/min条件下恒温培养4天得种子罐种子;
[0066] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 31°C、通气量4L/min恒温发酵18h,然后以0. 7°C /min速率降温至20°C,向发酵罐中加入 9g包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量7L/min条件下恒温发酵13h,最后以0. 4°C / min速率升温至25°C,在通气量6L/min条件下恒温发酵48h即得防止栽培时杂菌感染的杏 鲍菇液体菌种;
[0067] 所述平板培养基组成为:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨5g/L,磷酸二氢钾 3g/L,硫酸镁 I. 5g/L,琼脂 20g/L,VB10.0 2g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0068] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 4g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 2g/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0069] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物0. 8g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0070] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物1.0 g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 4g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0071] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物2. 2g/L,木肩粉I. 2g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0072] 所述发酵培养基的制备方法为:按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量5倍的水,用乳酸调节pH值为5. 5,加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅 拌边加入黄豆饼粉,升温至93°C,保温,液化12min,然后降温至55°C,保温,边搅拌边加入 40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解25min,边搅拌边加入剩余水和其 它原料,均匀混合,调整pH值为6. 0,121°C灭菌40min即得发酵培养基。
[0073] 经上述方法制备的防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种菌丝球密度为 5. 5 X IO5个/L,菌丝球直径为0. 5mm,菌丝球干重为100g/L,胞外多糖为3. 5g/L。
[0074] 实施例3
[0075] -种防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0076] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0077] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 30°C、通气量3L/min恒温发酵12h,然后以0. 6°C /min的速率降温至18°C,向发酵罐中加入 8g包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量6L/min条件下恒温发酵10h,最后以0. 3°C / min的速率升温至24°C,在通气量5L/min条件下恒温发酵45h即得防止栽培时杂菌感染的 杏鲍菇液体菌种;
[0078] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0079] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 3g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. lg/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0080] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物0. 5g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. ZgA^VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0081] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物0. 8g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0082] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物2. lg/L,木肩粉I. lg/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0083] 所述发酵培养基的制备方法为:按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量4倍的水,用乳酸调节pH值为5,加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边 加入黄豆饼粉,升温至90°C,保温,液化10min,然后降温至50°C,保温,边搅拌边加入40u/ g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20min,边搅拌边加入剩余水和其它原 料,均匀混合,调整pH值为6. 0,123°C灭菌30min即得发酵培养基。
[0084] 经上述方法制备的防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种菌丝球密度为 5. 0 X IO5个/L,菌丝球直径为0. 6mm,菌丝球干重为96g/L,胞外多糖为3. 2g/L。
[0085] 实施例4
[0086] -种防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0087] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0088] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 32°C、通气量5L/min恒温发酵24h,然后以0. 8°C /min的速率降温至22°C,向发酵罐中加入 IOg包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量8L/min条件下恒温发酵16h,最后以0. 5°C / min的速率升温至26°C,在通气量7L/min条件下恒温发酵52h即得防止栽培时杂菌感染的 杏鲍菇液体菌种;
[0089] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0090] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 5g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0091] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡
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