在；S9. 65 (s，1H)，说明羟基的存 在；S7. 15 (d，J=16, 1H) ; 7. 46 (d，J=16, 1H) ; 7. 71 (d，J=11. 8, 1H) ; 7. 76 (d，J=11. 8, 1H);说 明1，6-二烯的存在；S6. 82-7. 96,说明苯环的存在；S4.61 (s，2H)说明亚甲基的存在；结 合反应原料和高分辨质谱，可以确定其结构式。
[0044] 实施例2
[0045] (1)将乙酰丙酮（lg，10mmol)和氧化硼（lg，）溶解在10mL的乙酸乙酯里，在40°C 下搅拌30min，然后加入香草醒（1. 522g，lOmmol)，对甲酰基苯甲酸甲酯（1. 642g，lOmmol) 和硼酸三丁酯（4. 6g，20mmol)，继续搅拌30min。正丁胺（lmL)溶于10mL乙酸乙酯里缓慢滴 加30min，滴加完毕后在40°C继续搅拌4h，然后放置过夜使得反应完全。混合物用盐酸水 溶液（0. 4N，15mL)在60°C水解lh，水相用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用水洗至中性， 无水硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂，快速硅胶柱层析(石油醚：丙酮=2:1)，得到橙黄色固体产 物，即为中间体（II)。
[0046] (2)将中间体（II) (174mg，0. 46mmol)和氢氧化钾（57mg，1. 37mmol)溶于甲醇-水 (甲醇：水=3:1)体系中，室温搅拌4h，TLC监控(二氯甲烷：甲醇=10:1)，停止反应，乙酸乙 酯萃取3次，合并水相，加入盐酸水溶液（0. 4N)调节pH5-6,乙酸乙酯萃取3次，合并有机 相，无水硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂，得到深黄色固体。即目标产物含羧基多羰基姜黄素衍 生物。
[0047] 实施例3本发明含羧基多羰基姜黄素衍生物的药效试验
[0048] 实验一：乙酰胆碱酯酶抑制剂活性筛选
[0049] 一、实验目的：准确筛选具有乙酰胆碱酯酶抑制剂活性的样品。
[0050] 二、实验材料
[0051]2. 1药品及实验试剂耗材
[0052] 样品：含羧基多羰基姜黄素衍生物(简称Jhs-A-5)，按照实施例1方法制备得到。
[0053] 姜黄素对照品，南京泽朗医药科技有限公司
[0054] 乙酰胆碱酯酶（电鳗)，sigma公司
[0055] 碘化硫代乙酰胆碱，sigma公司
[0056] 5, 5-二硫双硝基苯甲酸（DTNB)，sigma公司
[0057]盐酸他克林（Tacrinehydrochloride),sigma公司
[0058] 磷酸氢二钠，汕头市西陇化工厂有限公司
[0059] 磷酸二氢钠，南京化学试剂有限公司
[0060]十二烷基磺酸钠（SDS)，上海生工生物工程技术服务有限公司
[0061] 二甲基亚砜（DMS0)，江苏强盛化工有限公司
[0062] 96微孔板，costar公司
[0063] 2. 2实验仪器
[0064] M2e型酶标仪，MolecularDevices
[0065]移液器，eppendorf公司
[0066]DK-8B型恒温水浴槽，上海精宏实验设备有限公司
[0067]ZW-A型振荡器，常州国华电器有限公司
[0068] 2. 3试剂配制
[0069] 0?lmol/L磷酸钠缓冲液（PH=7. 4) :77. 4ml的lmol/LNa2HP04,22. 6ml的lmol/L NaH2P04，用蒸馏水将混合的两种磷酸盐溶液稀释至1000ml，PH计测定PH值。
[0070] 底物和显色剂：碘化硫代乙酰胆碱和DTNB用PH7. 4的0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配 制成10mm〇l/L的储存液。
[0071] 乙酰胆碱酯酶溶液：一瓶500U左右，用3ml磷酸钠缓冲液配成母液；用时取60ill 母液加至940yl磷酸钠缓冲液，即浓度10U/ml，用0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制。1%SDS 溶液：用0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制。
[0072] 盐酸他克林溶液：用蒸馏水溶解，配制成5X10-4M的溶液。（直接加入体系，无需 再稀释）
[0073]三、实验方法
[0074] 0?lmol/L磷酸钠缓冲液（PH=7. 4) :77. 4ml的lmol/LNa2HP04, 22. 6ml的lmol/L NaH2P04，用蒸馏水将混合的两种磷酸盐溶液稀释至1000ml。碘化硫代乙酰胆碱和DTNB用PH7. 4的0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制成10mm〇l/L的储存液。取96孔板一块，每孔依次加 入40ill磷酸缓冲液、20 DNTB，10ill样品溶液(终浓度为100iig/ml)、10ill乙酰胆 碱酯酶溶液(约〇. 1U)，于37°C孵育10分钟。以1%DMS0为溶剂对照，盐酸他克林为阳性对 照。加入20 底物碘化硫代乙酰胆碱，37°C继续孵育10分钟。加入30iill%SDS终止 酶反应，置酶标仪上，405nm测定光吸收值。
[0075] 姜黄素对照品的处理方式与含羧基多羰基姜黄素衍生物（Jhs-A-5)相同，姜黄素 对照品的终浓度为1〇〇UM。
[0076] 样品对乙酰胆碱酯酶的抑制率=(溶剂对照0D4(I5值一样品0D4(I5值）/溶剂对照 OD405值X100%;
[0077] 阳性药对乙酰胆碱酯酶的抑制率=(空白对照0D4(I5值一阳性药0D4(I5值）/空白对 照〇D4Q5值X100%。
[0078]四、实验结果
[0079] 含羧基多羰基姜黄素衍生物对乙酰胆碱酯酶活性抑制的影响
[0080] 结果显示，含羧基多羰基姜黄素衍生物与溶剂对照相比，有显著统计学差异 (P〈0. 05);特别是含羧基多羰基姜黄素衍生物对乙酰胆碱酯酶的抑制率在85%以上，说明有 强的抑制活性。
[0081] 表lJhs-A-5对乙酰胆碱酯酶活性抑制的影响
[0082]
[0083] 注：与空白对照组比较，AP< 0.05,AAP< 0.01;与溶剂对照组比较，*P < 0. 05,#P< 0. 01
[0084] 实验二：丁酰胆碱酯酶抑制剂活性筛选
[0085] -、实验目的：准确筛选具有丁酰胆碱酯酶抑制剂活性的样品。
[0086] 二、实验材料
[0087] 2. 1药品及实验试剂耗材
[0088] 样品：含羧基多羰基姜黄素衍生物(简称Jhs-A-5)，按照实施例1方法制备得到。
[0089] 姜黄素对照品，南京泽朗医药科技有限公司
[0090] 马源丁酰胆碱酯酶，sigma公司
[0091] 碘化硫代丁酰胆碱，sigma公司
[0092]5, 5-二硫双硝基苯甲酸（DTNB)，sigma公司
[0093]盐酸他克林（Tacrine hydrochloride), sigma公司
[0094] 磷酸氢二钠，汕头市西陇化工厂有限公司
[0095] 磷酸二氢钠，南京化学试剂有限公司
[0096] 十二烷基磺酸钠（SDS)，上海生工生物工程技术服务有限公司
[0097] 二甲基亚砜（DMS0)，江苏强盛化工有限公司
[0098]96微孔板，costar公司
[0099]2. 2实验仪器
[0100]M2e型酶标仪，Molecular Devices，
[0101] 移液器，eppendorf公司
[0102] DK-8B型恒温水浴槽，上海精宏实验设备有限公司，
[0103]ZW-A型振荡器，常州国华电器有限公司
[0104] 2. 3试剂配制
[0105] 0? lmol/L磷酸钠缓冲液（PH=7. 4) :77. 4ml的lmol/L Na2HP04,22. 6ml的lmol/L NaH2P04,用蒸馏水将混合的两种磷酸盐溶液稀释至1000ml，PH计测定PH值。
[0106] 底物和显色剂：碘化硫代丁酰胆碱和DTNB用PH7.4的0. lmmol/L磷酸钠缓冲液配 制成10mm〇l/L的储存液。
[0107] 马源丁酰胆碱酯酶溶液：称取24. 5mg的马源丁酰胆碱酯酶冻干粉，用3ml磷酸钠 缓冲液配成60U/ml的母液；用时取10ill母液加至110ill磷酸钠缓冲液，即浓度5U/ml， 用0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制。
[0108]1%SDS溶液：用0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制。
[0109] 盐酸他克林溶液：用蒸馏水溶解，配制成5X10-4M的溶液。（直接加入体系，无需 再稀释）
[0110] 三、实验方法
[0111] 0?lmol/L磷酸钠缓冲液（PH=7. 4) :77. 4ml的lmol/LNa2HP04,22. 6ml的lmol/L NaH2P04，用蒸馏水将混合的两种磷酸盐溶液稀释至1000ml。碘化硫代乙酰胆碱和DTNB用PH7. 4的0.lmmol/L磷酸钠缓冲液配制成10mm〇l/L的储存液。取96孔板一块，每孔依次加 入40ill磷酸缓冲液、20 DNTB，10ill样品溶液(终浓度为100iig/ml)、10ill丁酰胆 碱酯酶溶液(约〇. 05U)，于37°C孵育10分钟。以1%DMS0为溶剂对照，他克林为阳性对照。 加入20 底物碘化硫代丁酰胆碱，37°C继续孵育10分钟。加入30iill%SDS终止酶反 应，置酶标仪上，405nm测定光吸收值。
[0112] 姜黄素对照品的处理方式与含羧基多羰基姜黄素衍生物（Jhs-A-5)相同，姜黄素 对