照品的终浓度为100yM。
[0113] 样品对丁酰胆碱酯酶的抑制率=(溶剂对照〇D4(l5值一样品0D4(I5值）/溶剂对照 OD405 值X100% ;
[0114] 阳性药对丁酰胆碱酯酶的抑制率=(空白对照〇D4(l5值一阳性药0D4(I5值）/空白对 照 〇D4Q5 值X100%。
[0115] 四、实验结果
[0116] 姜黄素和含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5对丁酰胆碱酯酶活性抑制的影响
[0117] 结果显示，含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5与溶剂对照相比，有显著统计学 差异（P〈0. 05);特别是含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5对丁酰胆碱酯酶的抑制率在 85%以上，说明有很强的抑制活性。
[0118] 表2姜黄素和Jhs-A-5对丁酰胆碱酯酶活性抑制的影响
[0120] 注：与空白对照组比较，AP<0.05,AAP<0.01 ;与溶剂对照组比较，*P < 0. 05,#P< 0. 01
[0121] 实验三：DPPH自由基清除能力活性筛选
[0122] 1实验目的：迅速准确筛选具有清除DPPH自由基的抗氧化活性的样品。
[0123] 2实验材料
[0124] 2.1实验试剂及耗材
[0125] 样品：含羧基多羰基姜黄素衍生物(简称Jhs-A-5)，按照实施例1方法制备得到
[0126] 姜黄素对照品，南京泽朗医药科技有限公司
[0127]DPPH，sigma公司，批号：STBB0555
[0128] 无水乙醇，南京化学试剂有限公司
[0129] DMS0,江苏强盛化工有限公司
[0130] 槲皮素，中国药品生物制品检定所
[0131] 96微孔板，costar公司
[0132] 2. 2实验仪器
[0133]M2e型酶标仪，MolecularDevices公司
[0134]移液器，eppendorf公司
[0135] DK-8B型恒温水浴槽，上海精宏实验设备有限公司
[0136]ZW-A型振荡器，常州国华电器有限公司
[0137] 2. 3试剂配制
[0138] 所筛选样品粉末用DMS0溶解为10mM的溶液，然后按样品与乙醇1:9的体积配成 不同浓度的溶液（DMS0的含量为10%)。
[0139]DPPH溶液：称取0. 158gDPPH粉末溶于40ml的无水乙醇制成浓度为ImM的母液， 4 °C避光保存备用。
[0140] 槲皮素溶液：称取5mg槲皮素溶于1ml的DMS0中，使用时用DMS0稀释为0. 5mg/ ml，再按样品与乙醇1:9的体积用无水乙醇配制（DMS0的含量为10%)，终浓度为25yg/ml。
[0141] 3实验方法
[0142] 取DPPH溶液（0. 2mM) 50ill与50ill样品液在96孔板中混匀，于25 °C水浴中孵 育30min，然后测定其517nm处的吸光度值A0,同时取50yl无水乙醇+50yl样品液作为 样品的颜色对照组测其吸光度值A1，以及DPPH溶液50yl+50yl含10%DMS0的无水乙醇作 为溶剂对照组测其吸光度值A2。按下式计算其对DPPH自由基清除率。同时以槲皮素作为 阳性对照。
[0143]清除率P(%) = [ 1 - (A0 -Al) /A2]X100% ;
[0144] 其中：A0=50iUDPPH溶液+50iU样品液的吸光度值；Al=50iU无水乙醇+50iU 样品液的吸光度值；A2=50ylDPPH溶液+50iill0%DMS0的无水乙醇的吸光度值。根据结 果计算EC50值，即50%的DPPH?被清除时的各化合物浓度。
[0145] 4实验结果
[0146] 姜黄素和含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5对DPPH清除能力的影响
[0147] 结果显示，姜黄素及含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5与溶剂对照相比，均有 显著统计学差异（P〈〇. 01);姜黄素与阳性药槲皮素的DPPH清除能力相当，DPPH清除率均在 90%以上，有较强的清除活性，Jhs-A-5的DPPH清除率为95. 24%，活性显著高于姜黄素，有 高强度的清除活性。
[0148] 表3姜黄素和Jhs-A-5对DPPH清除能力的影响
[0151] 注：与溶剂对照组比较，*P< 0? 05,**P< 0? 01
[0152] 实验四：稳定性实验
[0153] 1材料与方法
[0154] 1.1材料
[0155] 姜黄素、含羧基多羰基姜黄素衍生物Jhs-A-5
[0156] 1.2仪器设备
[0157] 721分光光度计、恒温水箱。
[0158] 1.3实验内容和方法
[0159] 1. 3. 1两种色素的吸收光谱
[0160] 将两种物质配成0. 01%的溶液，用721分光光度计分别测定吸收光谱。
[0161] 1. 3. 2热对两种色素稳定性的影响
[0162] 将两种物质的溶液分取四等份，分别置于401：、601：、801：、1001：不同温度下加热 30min后，观察颜色变化，并测定吸光值。
[0163] 1. 3. 3两种色素对光的稳定性
[0164] 将两种色素溶液在同一pH值下，放在日光下照射，分别在lh、2h、3h、4h、5h、6h、 7h、8h、9h不同时间点测定吸光值。
[0165] 2.实验结果与结论
[0166] 2. 1两种物质的吸收光谱分析
[0167] 姜黄素在430nm处有一强吸收峰。Jhs_A_5在306nm处有一强吸收峰。
[0168] 2. 2热对两种物质稳定性的影响
[0169] 将两种色素溶液分别在40°C、60°C、8(TC及KKTC四个不同的温度下热处理后，在 各自的最高吸收波长下测定其吸光度，结果见图3,Jhs-A-5对热的稳定性较稳定，姜黄素 对热的稳定性相对较弱。
[0170] 2. 3两种物质对光的稳定性分析
[0171] 将两种物质溶液处理后，在在各自最高吸光波长下测定其吸光度，结果见图4， Jhs-A-5的耐光性要强于姜黄素，姜黄素在光照下，稳定性差。
[0172] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种通式（I )所述化合物或其药学上可接受的盐：2. -种权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法通过如下反应路线制 备：3. 根据权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于所述的反应条件a为氧化硼、 乙酸乙酯、硼酸三丁酯和正丁胺的存在下进行反应；反应条件b为在氢氧化钾、水和甲醇的 存在下进行反应。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于该方法具体包括如下步骤： (1) 以乙酰丙酮、香草醛和对甲酰基苯甲酸甲酯为原料，在氧化硼、乙酸乙酯、硼酸三丁 酯和正丁胺的存在下，在35~45°C条件下搅拌反应得到反应混合物，将所述的反应混合物 提取分离制得中间体（Π ); (2) 中间体（II)与氢氧化钾在水和甲醇的存在下，室温搅拌反应得到反应混合物，将所 述的反应混合物分离制得化合物（I)。5. 根据权利要求4所述的含羧基多羰基姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于所述的 乙酰丙酮、香草醛和对甲酰基苯甲酸甲酯的摩尔比为1~10 :1~10 :1~10 ;中间体（II) 与氢氧化钾摩尔比为1~10 :1~10。6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤（1)所述分离的过程为：将得到的 混合物用盐酸水溶液水解，得到的水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水洗至中性，无水 硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂，快速硅胶柱层析；步骤（2)所述分离的过程为：将得到的反应 混合物经乙酸乙酯萃取，合并水相，加入盐酸水溶液调节PH5-6,再用乙酸乙酯萃取，合并有 机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂。7. 根据权利要求6所述的含羧基多羰基姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于所述的 盐酸水溶液的浓度为〇. 3~0. 5N ;水解温度为50~70°C;硅胶柱层析采用的流动相为石油 醚和丙酮的混合液，优选石油醚和丙酮的体积比为2:1。8. 根据权利要求1所述的含羧基多羰基姜黄素衍生物，其特征在于药学上可接受的盐 为含羧基多羰基姜黄素衍生物盐酸盐，含羧基多羰基姜黄素衍生物硫酸盐，或含羧基多羰 基姜黄素衍生物对甲苯磺酸盐。9. 权利要求1所述的含羧基多羰基姜黄素衍生物在制备治疗老年痴呆症药物中的应 用。10. -种药物组合物，其特征在于，含有治疗有效量的权利要求1所述的含羧基多羰基 姜黄素衍生物和药学上可接受的载体。
【专利摘要】本发明公开了一种含羧基多羰基姜黄素衍生物及其制备方法和应用，该含羧基多羰基姜黄素衍生物结构如式(I)所示，该含羧基单羰基姜黄素衍生物稳定性高，溶解度高，具有抑制β-分泌酶，乙酰胆碱酯酶和抗氧化，保护神经细胞的作用，可用于制备治疗老年痴呆症药物。
【IPC分类】C07C65/40, A61K31/192, C07C27/02, A61P25/28
【公开号】CN104974037
【申请号】CN201410149418
【发明人】萧伟, 王振中, 李兆亮, 孟兆青, 陶晓倩, 丁岗
【申请人】江苏康缘药业股份有限公司
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月13日