j)PEP6-PEP5-PEPl-PEP4-PEP2 ；
[0122] (k)PEP4-PEP5-PEPl-PEP6-PEP3 ；
[0123] (1)PEP7-PEP2-PEP4-PEP5-PEP3 ；
[0124] (m)PEP4-PEP2-PEP7-PEP5-PEP3 ；
[0125] (η)PEP7-PEP2-PEP5-PEP4-PEP3 ；
[0126] (o)PEP5-PEP2-PEP7-PEP4-PEP3 ;或
[0127] (p)PEP5-PEP2-PEP4-PEP3-PEP7。
[0128] 在本发明的具有5个连接的表位的肽中，对被连接的5种CTL表位肽的优选2种、 进一步优选3种、更优选4种、最优选5种CTL表位肽，可以诱导和/或活化各CTL表位肽 特异性CTL，以及可以诱导各CTL表位肽特异性免疫球蛋白产生。需要说明的是，在此，"免 疫球蛋白"是指IgG、IgM、IgA、IgD。
[0129] 2.具有5个连接的表位的肽的制造
[0130] 本发明的具有5个连接的表位的肽可以通过常规的液相合成法、固相合成 法等肽合成法、利用自动肽合成仪的肽合成法等来制造 （Kelley et al.，Genetics Engineering Principles and Methods, Setlow, J. K. eds. , Plenum Press NY. (1990) Vol. 12, p. 1-19 ；Stewart et al. , Solid-Phase Peptide Synthesis(1989)ff. H. Freeman Co. ;Houghten，Proc.Natl.Acad. Sci.USA(1985)82:p. 5132、《新生化学実験講座 I 夕 夕質IV》(1992)日本生化学会编，东京化学同人）。就肽合成而言，准备各氨基酸的待被结 合的α-氨基和α-羧基以外的官能团被保护的氨基酸类，以及在各氨基酸的α-氨基和 α -羧基之间进行肽键形成反应。通常，将位于肽的C末端的氨基酸残基的羧基经由适当的 间隔序列或接头与固相结合。将以上得到的二肽的氨基末端的保护基团选择性地除去，与 随后的氨基酸的α-羧基之间形成肽键。连续进行这样的操作，制造具有保护的侧基的肽， 最后除去全部的保护基团，并从固相中进行分离。保护基团的种类和保护方法、肽键合法的 详细内容，详细地记载于上述的文献。
[0131] 可选地，可以通过使用编码本发明的具有5个连接的表位的肽的核酸的基因重组 法和嗤囷体展不法等制造妝。
[0132] 基因重组法包括：将编码本发明的具有5个连接的表位的肽的DNA插入适当的表 达载体中，将载体导入适当的宿主细胞中，将细胞进行培养，从细胞内或从细胞外液回收目 标肽。载体没有限定，例如为质粒、噬菌体、粘粒、噬菌粒、病毒等载体。用于导入载体的宿主 细胞为大肠杆菌和枯草杆菌等细菌、酵母细胞、昆虫细胞、动物细胞（例如哺乳动物细胞）、 植物细胞等，向这些细胞的转化或转染包括例如磷酸钙法、电穿孔法、脂质转染法、粒子枪 法、PEG法等。将转化的细胞进行培养的方法按照用于宿主生物培养的常规方法进行。为 了使本发明的肽容易回收，优选使通过表达而生成的肽分泌于细胞外。为此，将编码使肽能 够从该细胞分泌的肽序列的DNA与编码目标肽的DNA的5'末端侧结合。可选地，也可以回 收累积在细胞内的目标肽。该情况下，将细胞物理性或化学性地破坏，并使用蛋白质纯化技 术回收目标肽。
[0133] 所制造的肽可以通过常规方法，例如通过色谱法诸如凝胶过滤色谱法、离子交换 柱色谱法、亲和色谱法、反相柱色谱法、HPLC、硫酸铵分级、超滤法、免疫吸附法等进行回收 或纯化。
[0134] 3.细胞毒性T淋巴细胞
[0135] 使用本发明的具有5个连接的表位的肽，可以在生物体外获得损害癌细胞的CTL 表位肽特异性的CTL。用于使用CTL表位肽生物体外诱导CTL的方法为公知的（例如日本 特开2006-14637号公报），且在本发明中也可以利用这些方法。例如，将来自健康人或癌 症患者的外周血单核细胞（PBMC)中的板粘附细胞在细胞因子诸如GM-CSF、IL-4等的存在 下进行培养，以诱导树状细胞（DC)。用本发明的具有5个连接的表位的肽冲击致敏该树状 细胞之后，进行X射线照射，以制备抗原递呈细胞（刺激物）。在不能使用DC的情况下，可 以使用本发明的具有5个连接的表位的肽冲击致敏来自健康人或相同的癌症患者的外周 血单核细胞（PBMC)之后，进行了 X射线照射的物质。接着，加入来自健康人的外周血单核 细胞（PBMC)或来自癌症患者的外周血单核细胞（PBMC)或相关淋巴节中的淋巴细胞（应答 物），在细胞因子诸如IL-2、IL-4、IL-7等存在下进行培养。其后，加入本发明的具有5个 连接的表位的肽再次刺激如上述那样经由脉冲致敏而得到的抗原呈递细胞，并在细胞因子 诸如IL-2等存在下进一步培养。
[0136] 作为用于CTL诱导的细胞培养用培养基，使用T淋巴细胞可以生存的任何培养基 即可。例如，可以使用在 RHAMa 培养基（Kawai，K.，Sasaki, T·，Sai j〇-Kurita，K·，Akaza, H .,Koiso, K. , and Ohno, Τ. , Cancer Immunol. Immunother. 35, 225-229, 1992 中所记载的 LAK medium)、A頂V 培养基（GIBC0 BRL, Life Technologies, INC.)、或 RPMI1640 培养基等中添 加多种细胞因子诸如IL-2等和胎牛血清（FCS)等的培养基。
[0137] 培养条件按照本领域技术人员公知的条件即可。例如，将培养温度设为33°C~ 41°C、优选37°C。另外，可以将含有空气或适当浓度的氧和为了将培养基的pH保持在约7. 4 而含有适当浓度的二氧化碳（例如5% CO2)的惰性气体作为气相使用。优选培养4~10 天，更优选7天。通过进行这样的培养而诱导的CTL含有对构成具有5个连接的表位的肽 的5个CTL表位肽中优选2种、进一步优选3种、更优选4种、最优选5种CTL表位肽的各 CTL表位肽特异性的CTL，并因此它们可以特异性地损害癌细胞。
[0138] 4.药物组合物
[0139] 本发明的具有5个连接的表位的肽可以作为用于癌症的免疫疗法中使用的药物 组合物的有效成分利用。
[0140] 在本发明的药物组合物中，可以含有一种或多种上述的具有5个连接的表位的肽 作为有效成分。通过含有多种具有5个连接的表位的肽，可以得到更强的效果。
[0141] 观察到编码本发明的具有5个连接的表位的肽中所含的PEP1、PEP2、PEP3、PEP4、 PEP5、PEP6及PEP7的基因在多个实体癌症及血液癌症中表达。作为实体癌症，可列举例如： 脑肿瘤、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、食道癌、胃癌、GIST、胰腺癌、结 肠癌、直肠癌、肛门癌、肾癌、肝癌、胆道癌、头颈癌、膀胱癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、皮肤 癌、舌癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、血管肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤等。作 为血液癌症，可列举例如：白血病、恶性淋巴瘤、骨髓瘤等。因此，本发明的具有5个连接的 表位的肽对这些癌症的治疗或预防是有用的。在此，"癌症的治疗或预防"是指预防癌症的 发生/复发、抑制癌症的进展/恶化、改善癌症的症状。
[0142] 本发明的药物组合物可以含有常规的各种有机或无机载体物质等作为药学上可 接受的制剂原料。作为可以利用的药物载体，可以例示根据制剂的施用形式而通常使用的 稳定剂、抗菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、PH调节剂、表面活性剂（界面活性剤）、填充剂、增 稠剂、粘结剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂（表面活性剤）、润滑剂、舒缓剂、稀释剂或赋形 剂等，优选制备这些物质作为利用常规方法添加的配合剂。
[0143] 另外，本发明的药物组合物可以含有已知在疫苗的施用时使用的佐剂。作为佐 剂，可以列举：完全弗氏佐剂（CFA)、不完全弗氏佐剂（IFA)、明矾、脂质A、单磷酰脂质A、 BCG (Baci I Ius-Calmette-Guerrin)等细菌制剂、结核菌素等细菌成分制剂、钥孔虫戚血 兰素和酵母甘露聚糖等天然高分子物质、胞壁酰三肽或胞壁酰二肽或它们的衍生物、白矾 (alum)、非离子性嵌段共聚物等，可以使用这些物质的1种或使用2种以上的组合。佐剂可 以与本发明的药物组合物以混合物形式或作为乳液同时进行施用。
[0144] 进而，除上述具有5个连接的表位的肽之外，本发明的药物组合物可含有以下的 一种或多种组合：公知的来自肿瘤抗原分子的CTL表位肽或含有其的肽、或将它们连接而 成的肽（以下，记载为"公知的来自肿瘤抗原分子的CTL表位肽等"）。作为公知的来自肿 瘤抗原分子的CTL表位肽，可列举例如：WT-1 pl26-134、修饰的（M236Y)WT-1 p235-243、 NY-ES0-1 pl57-165、修饰的（T210M)gp100 p209-217、存活素 -2B p80-88、Her-2/neu p63-71、VEGFR2 pl69-177、MART-1 p26-35、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 p298-306、SPARC P143-151等，但并不限定于这些。该情况下，本发明的具有5个连接的表位的肽和公知的来 自肿瘤抗原分子的CTL表位肽等既可以为单一剂型的制剂形式，也可以是，含有本发明的 具有5个连接的表位的肽