一种甘薯褐斑病抗性鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种农作物病害抗性鉴定方法，具体的说就是一种镰刀菌引起的甘薯 褐斑病抗性鉴定方法，属于农业植物保护领域。
【背景技术】
[0002] 甘薯褐斑病（sweet potato brown spot)，由镰刀菌（Fusarium spp)侵染引起的， 为甘薯生长期和贮藏期的主要病害之一，是最近几年出现的一种新病害，2012-2015年甘 薯病害普查发现，该病害广泛分布在全国各甘薯生产区。该病害在甘薯薯块上主要表现为 圆形、深褐色至黑色病斑，稍凹陷，具有轻微苦味，病状类似甘薯黑斑病，田间和储藏期均发 生，且发病后薯块不宜食用，储藏期常与其他病害共同发生，使全窖薯块腐烂，造成严重的 经挤损失。
[0003] 甘薯褐斑病病原镰刀菌在土壤中普遍存在，因此化学防治效果不明显，而抗病品 种的选育和推广是控制该病害发生发展的主要手段，因此准确、有效的评价品种的抗病性 显得尤其重要。目前，对甘薯黑斑病、线虫病及软腐病等病害的抗性研究较多，但由于甘薯 褐斑病是最近几年甘薯新发生的病害，不同甘薯品种对褐斑病的抗性鉴定研究相当匮乏， 目前，尚未见标准的甘薯褐斑病抗性鉴定方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种甘薯褐斑病抗性鉴定方法。该方法具有操作过程简便， 易学，省时省力等优点，能快速、准确的确定薯块对甘薯褐斑病的抗感性程度，为甘薯抗病 育种筛选大批材料提供技术支持。
[0005] 本发明是以如下技术方案实现的：一种甘薯褐斑病抗性鉴定方法，75%酒精消毒 薯块，米用0. 5cm长接种针头，蘸取甘薯褐斑病菌孢子，接种薯块，26 °C培养箱中培养，灭菌 湿纱布保湿，培养10天，测量病斑直径，计算抗病表现百分率，评价甘薯薯块抗褐斑病的抗 性，具体按如下步骤进行：
[0006] 1.病原菌分离和准备：从田间采集发病薯块，利用组织分离和单孢分离法分离病 原菌，26°C下在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)平板上培养7天，备用；
[0007] 2.参试薯块准备：在收获时，每个甘薯品种田间选取3块中等大小、表面光滑、无 伤烂的薯块，仔细洗净，晾干，编号，75 %的酒精消毒后待用；
[0008] 3.接种液的配制：将在PDA平板上长出的分生孢子用无菌水冲洗下来，用无菌水 配制成浓度为IX IO6个/ml的孢子悬浮液备用；
[0009] 4.接种鉴定：将配制好的孢子悬浮液分装在容量为100mL的无菌烧杯中，然后取8 号医用针头，用钳子截取到〇. 5cm，蘸取配好的孢子悬浮液，针刺法纵向接种到甘薯薯块上， 每薯块接种三排，每排5个点，每针刺一次，针头需蘸取菌液。将接种后的薯块用灭菌纱布 覆盖保湿，每天换洗纱布，26°C培养箱中培养。
[0010] (5)调查评价：接种10天后，取出薯块，病斑为圆形，测量病斑直径，以中抗品种胜 利百号为对照品种，按以下公式计算抗病表现百分率，再根据抗病表现百分率进行品种的 抗感特性评价；
[0011] 抗病表现百分率= 供试(?种病斑；平均胃径 Xl傭 H 照品种病斑平均直径2
[0012] 所述的甘薯褐斑病抗感特性评价分为五级，各级的评价标准为：
[0013] 高抗：抗病表现百分率彡40 ;
[0014] 抗病：40〈抗病表现百分率彡80 ;
[0015] 中抗：80 <抗病表现百分率彡120 ;
[0016] 感病：120 <抗病表现百分率彡160 ;
[0017] 高感：160 <抗病表现百分率。
[0018] 本发明的优点是，该方法以薯块为材料，室内接种甘薯褐斑病菌鉴定抗感性，接近 于田间甘薯薯块感染甘薯褐斑病的实际情况。该鉴定方法科学、省时省力，操作简单、易学， 对实验设备要求不高，各育种单位均能开展鉴定工作。该鉴定方法能为甘薯抗病育种前期 鉴定提供技术支持，剔除部分感病品种，为后期品种筛选减轻人力、物力。同时，室内灭菌接 种，易于试验条件控制，也增强了结果的准确性。该方法的推广使用，对于筛选抗病品种和 指导甘薯抗病育种具有重要意义和现实作用。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例对本发明作进一步说明：
[0020] 实施例
[0021] -种甘薯褐斑病抗性鉴定方法，我们对收获期采集的16个甘薯品种的薯块进行 褐斑病抗性鉴定试验，按如下步骤进行：
[0022] 1.病原菌分离和准备：从中国农科院徐州甘薯研究中心试验田采集发病薯块，利 用组织分离和单孢分离法分离病原菌，并经柯赫氏法则验证确定。26°C下在马铃薯葡萄糖 琼脂培养基（PDA)平板上培养7天，备用；
[0023] 2.参试薯块准备：在收获时，选16个甘薯品种，每个甘薯品种选取3块中等大小、 表面光滑、无伤烂的薯块，仔细洗净，晾干，编号，75%的酒精消毒后待用；
[0024] 3.接种液的配制：将在PDA平板上长出的分生孢子用无菌水冲洗下来，用无菌水 配制成浓度为IX IO6个/ml的孢子悬浮液备用；
[0025] 4.接种鉴定：将配制好的孢子悬浮液分装在容量为100mL的无菌烧杯中，然后采 用取8号医用针头，用钳子截取到0. 5cm，蘸取配好的孢子悬浮液，针刺法纵向接种到甘薯 薯块上，每薯块接种三排，每排5个点，每针刺一次，针头需蘸取菌液。将接种后的薯块灭菌 纱布保湿，每天换洗纱布，26°C培养箱中培养。
[0026] 5. (5)调查评价：接种10天后，取出薯块，病斑为圆形，测量病斑直径，以中抗品种 胜利百号为对照品种，按以下公式计算抗病表现百分率，再根据抗病表现百分率进行品种 的抗感特性评价；
[0027] immune ?臟鮮賊径2 X100 饥w衣从日刀i 只寸照品种病斑平馳径= u
[0028] 所述的甘薯褐斑病抗感特性评价分为五级，各级的评价标准为：
[0029] 高抗：抗病表现百分率< 40 ;
[0030] 抗病：40 <抗病表现百分率< 80 ;
[0031] 中抗：80 <抗病表现百分率彡120 ;
[0032] 感病：120 <抗病表现百分率< 160 ;
[0033] 高感：160 <抗病表现百分率。
[0034] 表1 :甘薯薯块对甘薯褐斑病抗性鉴定结果
[0037] *HR:高抗，high resistance ;R:抗，resistance ;MR :中抗，middle resistance ;HS:高感，high susceptibility ;S:感，susceptibility ;MS :中感，middle susceptibility
[0038] 结论：
[0039] 从表1可以看出：接种褐斑病菌的薯块置于26°C生化培养箱中培养10天后调查 病斑发病直径，并计算抗病表现百分率进行评价，其中：吉徐1号和徐薯25对甘薯褐斑病的 抗性级别为"抗病";徐薯29、商薯19、胜利百号等品种对甘薯褐斑病的抗性级别为"中抗"； 烟薯25和广薯87对甘薯褐斑病的抗性级别为"感病";徐薯26、岩薯5号、徐渝薯34、徐渝 薯35、徐薯33、徐薯28、龙薯9号、济薯25及栗子香等品种抗性级别为"高感"，属于高感品 种。
【主权项】
1. 一种甘薯褐斑病抗性鉴定方法，其特征是：用75%酒精消毒薯块，采用0. 5cm长接种 针头，蘸取甘薯褐斑病菌孢子，接种薯块，26°C培养箱中培养，灭菌湿纱布保湿，培养10天， 测量病斑直径，计算抗病表现百分率，评价甘薯薯块抗褐斑病的抗性，具体按如下步骤进 行： (1) 病原菌分离和准备：田间采集发病薯块，利用组织分离和单孢分离法分离病原菌， 26°C下在马铃薯葡萄糖琼脂培养基PDA平板上培养7天，备用； (2) 参试薯块准备：在收获时，每个甘薯品种田间选取3块中等大小、表面光滑、无伤烂 的薯块，仔细洗净，晾干，编号，75 %的酒精消毒后待用； (3) 接种液的配制：将在PDA平板上长出的分生孢子用无菌水冲洗下来，用无菌水配制 成浓度为1X106个/ml的孢子悬浮液备用； (4) 接种鉴定：将配制好的孢子悬浮液分装在容量为100ml的无菌烧杯中，然后采用8 号医用针头，用钳子截取到0. 5cm，蘸取配好的孢子悬浮液，针刺法纵向接种到甘薯薯块上， 每薯块接种三排，每排5个点，每针刺一次，针头需蘸取菌液；将接种后的薯块灭菌纱布保 湿，每天换洗纱布，26°C培养箱中培养； (5) 调查评价：接种10天后，取出薯块，病斑为圆形，测量病斑直径，以中抗品种胜利百 号为对照品种，按以下公式计算抗病表现百分率，再根据抗病表现百分率进行品种的抗感 特性评价?所述的甘薯褐斑病抗感特性评价分为五级，各级的评价标准为： 高抗：抗病表现百分率< 40 ; 抗病：40 <抗病表现百分率< 80 ; 中抗：80 <抗病表现百分率彡120 ; 感病：120 <抗病表现百分率彡160 ; 高感：160 <抗病表现百分率。
【专利摘要】本发明公开了一种甘薯新病害甘薯褐斑病抗性鉴定方法，属于农作物病虫害抗性鉴定方法。该方法科学，操作过程简单，试验条件要求不高，选取待鉴定的3块中等大小、表面光滑、无伤烂的薯块，仔细洗净，晾干，编号，75％的酒精消毒，接种预先用无菌水配制好的浓度为1×106个/mL的褐斑病孢子悬浮液中，灭菌湿纱布保湿，26℃室温下培养10天，调查各试验薯块的为害直径，计算抗病表现百分率，通过抗病表现百分率的大小即可判断各供试品种薯块对甘薯褐斑病的抗感情况。
【IPC分类】C12Q1/04
【公开号】CN105018566
【申请号】CN201510450340
【发明人】张成玲, 谢逸萍, 赵永强, 孙厚俊, 徐振, 杨冬静
【申请人】江苏徐州甘薯研究中心
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月28日