测， 其18种氨基酸和粗蛋白含量分析见表2:
[0091] 表2谷胱甘肽废液中的18种氨基酸和粗蛋白含量分析
[0092]
[0093]【菌种来源】
[0094] 产朊假丝酵母菌（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管 理中心，编号CICC31188)。
[0095]【发酵液制备】
[0096] 1)产朊假丝酵母菌菌种活化
[0097] 斜面培养基制备：5°86麦芽汁，琼脂1.5%，自然？11，121°(：，0.10310^，灭菌 30min，无菌条件下制备斜面试管。
[0098] 活化方法：无菌条件下，将冷冻保藏管中的产朊假丝酵母菌接种到斜面中，28°C条 件下活化48h，得到斜面菌种或菌种斜面。
[0099] 2)产朊假丝酵母菌三角瓶种子液制备
[0100] 三角瓶液体培养基制备：5°B6麦芽汁，自然pH，121°C，0. 103MPaMPa，灭菌30min。
[0101] 三角瓶种子液制备方法：无菌条件下，取一环经步骤1)活化的产朊假丝酵母菌斜 面菌种，接入装量为50mL液体培养基的250mL三角瓶中，置于200r/min中摇床中，28°C恒 温培养24h，得到产朊假丝酵母菌三角瓶种子液。
[0102] 3)产朊假丝酵母菌种子罐培养
[0103]种子罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH6. 0,121°C， 0. 103MPa，灭菌lh，降温至28°C，备用。
[0104] 种子罐培养过程：种子罐体积250L，种子罐的装料量控制在种子罐公称容积的 60%，即种子罐的装料量为150L，在无菌条件下，取经步骤2)制备的产朊假丝酵母菌三角 瓶种子液（60个三角瓶的种子液共3L)，即接种量为种子罐装料量的2%，接入种子罐中，发 酵温度控制在28°C，pH控制在6. 0,搅拌转速控制在200r/min，通气量控制在I. 5Wm，培养 24h，得到产朊假丝酵母菌种子罐培养液，培养结束时测得活菌数为5. 33X10sCFU/mL，杂菌 污染率为0.36%。
[0105] 4)发酵罐发酵
[0106]发酵罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH6. 0,121°C， 0. 103MPa，灭菌lh，降温至28°C，备用。
[0107] 发酵罐培养方法：发酵罐的体积为5m3,装料量为3m3,在无菌条件下，取经步骤3) 制备的产朊假丝酵母菌种子罐培养液全部接入发酵罐中，经计算，接种量为发酵罐装料量 的5%，发酵温度控制在28°C，pH控制在6. 0。发酵温度控制在28°C，pH控制在6. 0,搅拌 转速控制在200r/min，通气量控制在I. 5VVm，培养24h。
[0108] 发酵液指标：pH6. 04 ;产朊假丝酵母菌含菌量7. 93X10sCFU/mL;重金属0. 4mg/ Kg;霉菌数6CFU/mL;大肠杆菌7CFU/100mL;沙门氏菌无检出。
[0109] 制备实施例四：
[0110] 【原料】
[0111] 同制备实施例三。
[0112] 【菌种来源】
[0113] 枯草芽孢杆菌（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌种保藏管理 中心，编号CICC20872)。
[0114]【发酵液制备】
[0115]1)枯草芽孢杆菌菌种活化
[0116] 斜面培养基制备：蛋白胨0.5%，牛肉浸取物0.3%，NaC10.5%，琼脂1.5%， pH7.0,121°C，0. 103MPa，灭菌30min，无菌条件下制备斜面试管。
[0117] 活化方法：无菌条件下，将冷冻保藏管中的枯草芽孢杆菌接种到斜面中，29°C条件 下活化24h，得到斜面菌种或菌种斜面。
[0118]2)枯草芽孢杆菌三角瓶种子液制备
[0119] 三角瓶液体培养基制备：蛋白胨0.5%，牛肉浸取物0.3%，NaClO. 5%， MnSO4?H205ppm，pH7. 2,121°C，0. 103MPa，灭菌30min。
[0120] 三角瓶种子液制备方法：无菌条件下，取一环经步骤I)活化的枯草芽孢杆菌斜面 菌种，接入装量为50mL液体培养基的250mL三角瓶中，置于150r/min中摇床中，29°C恒温 培养30h，得到枯草芽孢杆菌三角瓶种子液。
[0121] 3)枯草芽孢杆菌种子罐培养
[0122] 种子罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH7. 2,121 °C， 0. 103MPaMPa，灭菌lh，降温至29°C，备用。
[0123] 种子罐培养方法：种子罐体积250L，种子罐的装料量控制在种子罐公称容积的 60%，即种子罐的装料量为150L，在无菌条件下，取取经步骤2)制备的枯草芽孢杆菌三 角瓶种子液（30个三角瓶的种子液共I. 5L)接入种子罐中，即接种量为种子罐实际装 料量的1%，发酵温度控制在29°C，pH控制在7. 2,搅拌转速控制在150r/min，通气量控 制在I. 5Wm，培养30h，得到枯草芽孢杆菌种子罐培养液，培养结束时测得芽孢形成率为 93.2%，含菌量为11.71父10^^/11^，杂菌污染率为0.2%。
[0124] 4)发酵罐发酵
[0125]发酵罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释12倍，pH7. 2,121°C， 0. 103MPaMPa，灭菌lh，降温至29°C，备用。
[0126] 发酵罐培养方法：发酵罐的体积为5m3,装料量为3m3,在无菌条件下，取经步骤3) 制备的地衣芽胞杆菌种子罐培养液全部接入发酵罐中，经计算，接种量控制在发酵罐实际 装料量的5%，发酵温度控制在29°C，pH控制在7. 2,搅拌转速控制在150r/min，通气量控 制在I. 5VVm，培养30h。
[0127] 发酵液指标：测得芽孢形成率为92. 8%，枯草芽孢杆菌含菌量12. 77X10sCFU/mL; 重金属0. 20mg/Kg;霉菌数10CFU/mL;大肠杆菌6CFU/100mL;沙门氏菌无检出。
[0128] 制备实施例五：
[0129] 【原料】
[0130] 2015年5月，以取自山东金城生物药业有限公司的谷胱甘肽废液（即微生物发 酵法生产谷胱甘肽时的发酵液离心后的残液）为原料。经山东省农业科学院农业资源与 环境研究所检测，其成分组成：氮I. 49g/100mL;磷0. 102g/100mL;钾3. 0g/100mL;有机 质 40. 51g/100mL;可溶性固形物含量 38. 56g/100mL，含糖量 18. 18g/100mL，pH5. 12 ;水分 55. 04% 〇
[0131] 经农业部都市农业（北方）重点实验室日历L-8900高速氨基酸自动分析仪检测， 其18种氨基酸和粗蛋白含量分析见表3 :
[0132] 表3谷胱甘肽废液中的18种氨基酸和粗蛋白含量分析
[0134] 【菌种来源】
[0135] 德氏乳杆菌保加利亚亚种（提供形式：安瓿管冻干粉）购买至中国工业微生物菌 种保藏管理中心，编号CICC6100)。
[0136] 【发酵液制备】
[0137] 1)德氏乳杆菌保加利亚亚种菌菌种活化
[0138] 斜面培养基制备：酪蛋白胨（胰酶消化）10g，肉汤提取物10g，酵母粉5g，葡萄糖 20g，吐温 80lg，K2HP042g，醋酸钠 5g，柠檬酸二铵 2g，MgSO4 ? 7H200. 2g，MnS04 ?H2OO. 05g， 琼脂15g，pH6. 3,121°C，0. 103MPa，灭菌30min，无菌条件下制备斜面试管。
[0139] 活化方法：无菌条件下，将冷冻保藏管中的德氏乳杆菌保加利亚亚种接种到斜面 中，30°C条件下活化28h，得到斜面菌种或菌种斜面。
[0140] 2)德氏乳杆菌保加利亚亚种三角瓶种子液制备
[0141] 三角瓶液体培养基制备：酪蛋白胨（胰酶消化）10g，肉汤提取物10g，酵母 粉 5g，葡萄糖 20g，吐温 80lg，K2HP042g，醋酸钠 5g，柠檬酸二铵 2g，MgSO4 ? 7H200. 2g， MnS04 ?H2OO. 〇5g，pH6. 3,121。(：，0.IO3MPa,灭菌 3〇min。
[0142] 三角瓶种子液制备方法：无菌条件下，取一环经步骤I)活化的德氏乳杆菌保加利 亚亚种斜面菌种，接入装量为50mL液体培养基的250mL三角瓶中，置于150r/min中摇床 中，30°C恒温培养28h，得到德氏乳杆菌保加利亚亚种三角瓶种子液。
[0143] 3)德氏乳杆菌保加利亚亚种种子罐培养
[0144]种子罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释15倍，pH6. 3,121°C， 0. 103MPa，灭菌lh，降温至30°C，备用。
[0145] 种子罐培养过程：种子罐的体积为250L，种子罐的装料量控制在种子罐公称容 积的60%，即种子罐的装料量为150L，取经步骤2)制备的德氏乳杆菌保加利亚亚种三角 瓶种子液（45个三角瓶的种子液共2. 25L)接入种子罐中，经计算，接种量控制在种子罐 实际装料量的1.5%，发酵温度控制在30°C，pH控制在6. 3,搅拌转速控制在150r/min， 不通气，培养28h，得到德氏乳杆菌保加利亚亚种种子罐培养液，培养结束时测得活菌数为 18. 44X108CFU/mL，杂菌污染率为 0. 5 %。
[0146] 4)发酵罐发酵
[0147]发酵罐液体培养基制备：谷胱甘肽废液用纯水稀释15倍，pH6. 3,121°C， 0. 103MPa，灭菌lh，降温至30°C，备用。
[0148] 发酵罐培养方法：发酵罐的体积为7. 5m3,装料量为4. 5m3,在无菌条件下，取经步 骤3)制备的德氏乳杆菌保加利亚亚种培养液全部接入发酵罐中，经计算，接种量控制在发 酵罐实际装料量的3%，发酵温度控制在30°C，pH控制在6. 3,搅拌转速控制在150r/min， 不通气，培养28h，得到发酵液。
[0149] 发酵液指标：pH6. 22;德氏乳杆菌保加利亚亚种含菌量22. 31X10sCFU/mL;重金 属2mg/Kg;霉菌数10CFU/mL;大肠杆菌5CFU/100mL;沙门氏菌无检