用于诱导病毒生长的组合物、方法和用图
【专利说明】用于诱导病毒生长的组合物、方法和用途
[000。 本申请是申请日为2009年12月4日、申请号为200980154016. 5、题为"用于诱导 病毒生长的组合物、方法和用途"的专利申请的分案申请。
[0002] 巧关申请的香叉参考
[0003] 本申请要求2008年12月5日提交的美国临时专利申请号61/120, 262的权益，为 一切目的，该临时申请W其全部被并入本文。 发明领域
[0004] 本申请的实施方式总体上报道用于加速或增加的病毒生长的方法、组合物和用 途。在某些实施方式中，本申请报道用于诱导病毒加速生长和/或增加病毒隧菌斑大小的 共聚物组合物的方法、组合物和用途。在其他实施方式中，报道了能加速黄病毒生长，减少 黄病毒滞后时间和/或增加黄病毒隧菌斑大小的共聚物组合物的方法、组合物和用途。
[000引 发巧背景
[0006] 抵御传染性疾病的疫苗已用于增进人和动物健康。一种用于病毒疫苗的成功技术 是用该病毒的减弱或减毒的毒株（"活减毒病毒"）免疫动物或人。由于免疫后有限的复制， 该减毒的毒株不引起疾病。然而，该有限的病毒复制足W表达病毒抗原的所有组成成分，并 产生对该病毒潜在和持久的免疫应答。因此，在随后暴露于该病毒的致病毒株时，免疫的个 体受到保护不得病。
[0007] 最近的技术进步，例如重配，反向遗传学和寒冷适应，已引起了用于流感病毒和轮 状病毒的活减毒病毒的发展。许多用重组DNA技术制备的活病毒疫苗正处于人类临床试验 中，包括用于西尼罗河病（WestNiledisease)、登革热、追疾、肺结核和HIV的疫苗。运些 重组病毒疫苗依赖于对充分鉴定的减毒病毒疫苗，例如腺病毒、痘苗病毒、黄热病17D或登 革热病毒、DEN-2PDK-53的操作。整体而言，活减毒病毒疫苗是人类历史上最成功的医学干 预之一，仅次于抗生素的出现，具有增进全世界公共健康的前景。
[0008] 其他疫苗已通过在细胞培养中生长之后灭活病毒而开发。由于高浓度抗原的存 在，运些"灭活病毒"疫苗诱导免疫应答。有效的灭活病毒疫苗的实例包括但不限于狂犬病 疫苗、流感疫苗、甲型肝炎疫苗和脊髓灰质炎疫苗。
[0009] 黄病毒引起多种具有显著影响的人和动物疾病。它们是有包膜的病毒，具有大约 11000个碱基的RNA基因组。大多数黄病毒是通过节肢动物媒介传播的，通常是蚊子。存在 超过70种不同的黄病毒，基于血清学将其分成=个主要类型：登革热型、日本脑炎型和黄 热型。日益扩张的城市化、全球旅行和环境的改变（例如砍伐森林或雨带分布）已导致了 几种威胁人类公共健康的黄病毒的出现。运样的病毒包括但不限于黄热病毒、登革热病毒、 西尼罗河病毒、日本脑炎病毒和婢媒脑炎病毒。
[0010] 已制备了活减毒疫苗和灭活病毒疫苗，其是安全的并能抵御黄病毒疾病，例如黄 热病和日本脑炎。
[0011] 发巧概沐
[0012] 本发明的实施方式总体上设及用于诱导、增加和加速病毒生长的方法、组合物和 用途。在某些实施方式中，本申请报道了用于诱导加速病毒生长和/或增加病毒隧菌斑大 小的共聚物组合物的方法、组合物和用途。在其他实施方式中，报道了用于加速黄病毒生 长、减少黄病毒滞后时间和/或增加黄病毒隧菌斑大小的共聚物组合物的方法、组合物和 用途。
[0013] 生产疫苗的一个限制因素是大规模制造和体外培养病毒，W满足对疫苗的需求。 因此，本领域存在的需求之一是增加和加速病毒生长。本发明的某些实施方式设及增加和 加速病毒生长的方法和组合物。运些组合物对，例如，生产在其他技术，例如制造病毒相关 的基因治疗和其他病毒产品中使用的病毒疫苗和病毒副产品是有用的。此外，本文的实施 方式对增加或加速在灭活病毒疫苗中使用的病毒培养物的生长可W是有用的。
[0014] 本文公开的某些组合物可W包括单独的共聚物或共聚物与其他用于增加和加速 病毒生长的药剂或化合物的组合。本文的其他实施方式设及增加活减毒病毒生长的赋形 剂的组合。本文所用的共聚物包括但不限于聚氧丙婦（Huronic) '吁127 (泊洛沙姆407)、 聚氧两婦@於儲（泊洛沙姆188)、聚氧两婦吁123 (泊洛沙姆40扣、聚氧丙婦(泊洛沙 姆235)、其他分子量大于3000至4000的聚环氧乙烧-聚环氧丙烷巧O-PO)嵌段共聚物或 其组合。
[0015] 根据运些实施方式，病毒可W包括但不限于黄病毒、披膜病毒、冠状病毒、弹状病 毒、线状病毒、副粘病毒、正粘病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、鼠 疫病毒、小RNA病毒、專状病毒、呼肠病毒、细小病毒、乳多空病毒、腺病毒、瘤疹病毒和痘病 毒。一些设及病毒培养中使用的组合物的实施方式可W包括但不限于具有一种或多种病毒 的培养物，例如多种病毒的混合物或单种病毒，或一种或多种活减毒病毒，运些病毒在单独 的一种或多种共聚物组合物中生长，或与其他药剂组合中生长。
[0016] 在其他实施方式中，与不含公开的组合物的对照培养物相比，本文设及的组合物 可W在减少的或相似的生长时期内增加在滴定（tittering)、制造或测量病毒制剂的活性 中使用的隧菌斑大小。在本发明的一些方面，可W在减少的时期里得到较高的病毒滴度。可 选地，与没有使用本文设及的组合物的对照病毒培养物相比，本文设及的组合物可W减少 滞后时间或者加速生长时间直到几天。
[0017] 其他实施方式设及用于制剂的病毒群体和设及能减少或预防由本文设及的一种 或多种病毒引起的医学状况开始的疫苗制剂的方法。根据运些实施方式，医学状况可W包 括但不限于包括西尼罗河热、登革热、日本脑炎、库阿撒鲁尔森林病、澳大利亚和新几内亚 墨莱溪谷脑炎、库宁病毒（Kunjin virus)(西尼罗河病毒的近支）、A化hurma出血热、圣路 易斯脑炎、丙型肝炎病毒感染、婢媒脑炎、黄热、非洲的尤苏图病毒、科坦戈病毒和化onde 病毒〇Jsu1:u, Koutango, Yaonde viruses)、W及南非的化cipacore病毒的状况和感染。在 某些实施方式中，产生疫苗制剂的生产时间可W通过使用本文考虑的用于加速病毒生长生 产和制备、减少滞后时间和/或增大病毒群体的隧菌斑大小的组合物而被缩短。
[0018] 在某些实施方式中，本文考虑的用于生产的病毒培养物可用于组合物，该组合物 包括但不限于部分或完全脱水的或水合的疫苗制剂或其他病毒制剂。
[0019] 在某些实施方式中，用于本文考虑的疫苗组合物中的活减毒病毒可W包括但不 限于一种或多种活减毒黄病毒疫苗，该减毒黄病毒疫苗包括但不限于减毒黄热病毒（例 如17D)、减毒日本脑炎病毒（例如SA14-14-2)、减毒登革热病毒（例如DEN-2/PDK-53或DEN-4A30)、减毒嵌合型西尼罗河疫苗或重组嵌合黄病毒。
[0020] 其他实施方式设及用于培养本文考虑的病毒培养物的试剂盒。考虑试剂盒可W包 括部分或完全脱水的病毒培养物，该培养物在产生用于疫苗生产或其他病毒组合物用途的 活减毒病毒群体中使用。还考虑试剂盒可W包括一种或多种本文公开的生长诱导组合物。 [00引]附图简沐
[0022] W下附图形成本说明的一部分，它们被包含W进一步说明本文的某些实施方式。 通过单独参考一幅或多幅附图或与给出的特定实施方式的详细描述结合，可W更好地理解 运些实施方式。
[0023] 图1表示在细胞感染和在病毒吸附过程中引入对照药剂或共聚物组合物后， 聚氧丙婦聚氧丙婦吁口7 (泊洛沙姆407)对病毒生长的效果的示例性曲线图。
[0024] 图2表示说明病毒吸附和/或生长过程中存在共聚物时病毒培养物生长的示例性 曲线图。
[0025]图3表示说明在病毒吸附和生长过程中存在增加量的含共聚物的组合物时病毒 培养物生长的示例性曲线图。
[0026]图4表示说明在病毒吸附过程中存在或不存在特定的共聚物时病毒培养物生长 的示例性曲线图。
[0027]图5表示说明存在或不存在多种浓度的共聚物时示例性病毒培养物的隧菌斑大 小变化的示例性表格。
[002引定义
[0029] 如本文所用，"一（a)"或"一（an)"可W指