用于诱导病毒生长的组合物、方法和用图_2

文档序号:9466823阅读:来源:国知局
一个或多于一个的物品。
[0030] 如本文所用,容器可W包括但不限于试管、小型或微量离屯、管、平板、组织培养瓶、 细胞工厂、通道、小瓶、微量滴定板或容器。
[0031] 如本说明书所用,"对象(subject)"或"多个对象(subjects)"可W包括但不限于 哺乳动物,例如人或者驯化的或野生的哺乳动物,例如狗、猫、雪貂、兔、猪、马、牛或动物园 动物。
[0032] 如本文所用,"约"可W指正负10%。
[0033] 如本文所用,"高分子量表面活性剂"可W指具有表面活性的两性分子,其分子量 大于1500。
[0034] 如本文所用/'EO-PO嵌段共聚物"可W指由聚环氧乙烧和聚环氧丙烷嵌段组成的 共聚物。此外,如本文所用,"聚氧丙帰? "可W指WEOx-POy-E化形式的EO-PO嵌段共聚物。 EO-PO嵌段共聚物的运种结构也称为"泊洛沙姆"或"Synperonic"。
[0035] 如本文所用,"减毒病毒"可W指当给予对象例如哺乳动物(例如人或动物)时,显 不出减少的或没有病毒相关疾病的临床征象的病毒。
[0036] 如本文所用加速"可W指在病毒生产开始前减少滞后时间或增加病毒生产速 率,W至于在较短的时间里产生较高浓度的病毒,或者在一些实施方式中相对于对照,隧菌 斑大小增加。
[0037] 如本文所用,"灭活病毒疫苗"可W指通过本领域已知的许多种物理或化学方法中 的任意方法灭活病毒而制备的疫苗。
[0038] 发巧详沐
[0039] 在W下部分,为详述多种实施方式,描述了多种示例性组合物和方法。对本领域 技术人员显而易见的是,实施上述多种实施方式不需要使用本文列出的全部或甚至一些细 节,而浓度,时间和其他细节可W通过日常实验修改。在一些情况下,熟知的方法或组分没 有包括在本说明书中。
[0040] 本文的实施方式设及使用多种组合物W增加培养物中病毒生长的生长速率或减 少滞后时间。根据运些实施方式,组合物可W包括共聚物药剂。本申请的实施方式总体上 设及用于诱导和加速病毒生长的方法、组合物和用途。在某些实施方式中,本申请总体上设 及用于加速病毒生长和/或增加隧菌斑大小的共聚物组合物的方法、组合物和用途。在其 他实施方式中,设及用于加速黄病毒生长、减少生长停滞和/或增加隧菌斑大小的共聚物 组合物的方法、组合物和用途。本文考虑的某些共聚物组合物包括但不限于聚氧两婦叩口 7 (泊洛沙姆4〇7)、聚氧两婦%燃(泊洛沙姆1SS)、聚氧丙矯?|:P85 (泊洛沙姆235)、 聚氧丙締呼123 (泊洛沙姆403)、其他分子量大于3000至4000的EO-PO嵌段共聚物或其 组合。
[00川共聚物
[004引在某些实施方式中,组合物可W包括共聚物,例如,聚氧丙稀吁127 (泊洛沙姆 407)。聚氧丙橄?F]27 (泊洛沙姆407,本文也称为F127)是一种非离子聚氧乙締-聚 氧丙締共聚物。聚氧丙婦Si嵌段共聚物W其非专有名称泊洛沙姆为人所知。它们最初被 开发用作表面活性剂。运些化合物由亲水性环氧乙烧巧0)和疏水性环氧丙烷(PO)嵌段 组成。该EO-PO嵌段共聚物可W包括聚环氧乙烧(-C肥C肥0-表示的EO)和聚环氧丙烷 (-C肥CHC册0-表示的PO)嵌段。两个EO嵌段可W位于该PO嵌段两侧,WEOx-POy-E化排 列。由于PO组分是亲水的而EO嵌段是疏水的,所从當亲水性、分子量和表面活性剂性质可 通过改变E化-POy-E化嵌段结构中的X和y来调整。根据制造商(例如BASF、Lutrol.即127, 泊洛沙姆407),F127可W在乳剂和液体乳胶中用作增稠剂和共乳化剂。
[0043]F127进行一种称为逆向热凝胶作用的过程,因为它在达到生理溫度之后进行从液 体向胶体的相变。较高的溫度促进该嵌段聚合物的环氧烧单元的脱水,运可W导致溶解度 降低。具体地,在高浓度下(例如约10%w/v),某些类型的较高分子量的EO-PO嵌段共聚 物会进行逆向凝胶化,当溫度增加时形成胶体。此外,当运些嵌段共聚物位于临界胶束浓度 (CMC)之上时,它们自组装成胶束。在水溶液中,该EO-PO嵌段共聚物会自组装成具有PO核 屯、和亲水性EO基团冠的胶束。在某些研究中,EO-PO嵌段共聚物制剂已被研究作为潜在的 用于多种疏水性药物和用于蛋白质、DNA或灭活疫苗的药物递送剂。
[0044]目前还不清楚运些聚氧丙締聚氧丙俯Si嵌段共聚物活性的机制。然而,聚氧丙 婦&F127 (泊洛沙姆407)已被研究作为结合壳聚糖的疫苗递送系统的缓释组分。用含有F127的破伤风类毒素接种小鼠,增加了对鼻内递送和全身递送的破伤风抗原的抗体应答。 在某些方法中,聚氧丙綺聚氧丙綺I?'已显示诱导细胞膜微粘度和流动性的改变,运些改变可 W有助于其多能性。
[004引 聚氧丙贿吁127 (泊洛沙姆407)已在包括牙齿、口和缓泻药物的多种人类制药 应用中使用。疫苗制剂也已使用表面活性剂作为稳定剂W防止物质损失。用某些浓度的F127 (0.Ol%w/v)递送DNA疫苗的研究已显示增加的药物递送,可能是通过增加细胞摄取 和招募成熟的树突细胞。在体溫时的凝胶形成允许使用该EO-PO嵌段共聚物凝胶作为疫苗 和药物递送应用中的药物胆存库。
[0046] 本文公开的某些组合物可W包括单独的共聚物或共聚物与其他药剂或化合物的 组合。此外,本文公开的组合物可W包括培养基组合物,除了其他的培养基添加物外,该培 养基组合物具有一种或多种被加入到培养基中的共聚物药剂(或多个)。用于本文公开的 组合物的培养基可W包括本领域已知的已知培养本文考虑的病毒生物的任意培养基,或者 对特定病毒生物特异的培养基。本文的其他实施方式设及极大地增加活病毒(例如减毒病 毒)生长的赋形剂的组合。而本文的其他组合物和方法设及减少与病毒生物生长有关的滞 后时间。一些实施方式设及调整病毒生物的隧菌斑大小。本文所用的共聚物包括但不限于 聚氧丙滿吁口7 (泊洛沙姆407)、聚氧丙烁吁68 (泊洛沙姆188)、聚氧两婦呼85 (泊洛沙 姆235)、聚氧丙婦?|pi23 (泊洛沙姆403)、其他分子量大于3000至4000的EO-PO嵌段共 聚物或其组合。
[0047] 本文考虑的组合物可W在病毒培养物被引入宿主培养物之前、期间或之后单独使 用或者与培养基结合使用。本文所公开的组合物的细胞培养基可W是液体、固体或半固体 液体。在某些实施方式中,补充组合物可W在整个病毒生长期间加入,W监测、调节或促进 病毒生长过程。在其他实施方式中,可W加入一种或多种补充共聚物组合物,W减少滞后时 间,加速病毒生长和/或增加病毒隧菌斑大小。本文考虑的组合物可W单独使用,与其他补 充物(例如维生素、金属离子和氨基酸)组合使用,或当将培养基加入到培养物时作为培养 基补充物。
[0048] 其他实施方式包括用于培养病毒培养物例如活减毒病毒的原液,运些活减毒病毒 包括但不限于小RNA病毒(例如脊髓灰质炎病毒、口蹄疫病毒)、專状病毒(例如SARS病毒、 猫传染性腹膜炎病毒)、披膜病毒(例如辛德比斯病毒、马脑炎病毒、基孔肯亚病毒、风疹病 毒、罗斯河病毒、牛腹泻病毒、猪霍乱病毒)、黄病毒(例如登革热病毒、西尼罗河病毒、黄热 病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、婢媒脑炎病毒)、冠状病毒(例如人冠状病毒(普 通感冒)、猪肠胃炎病毒)、弹状病毒(例如狂犬病病毒、水瘤性口炎病毒)、线状病毒(例如 马尔堡病毒、埃博拉病毒)、副粘病毒(例如麻疹病毒、犬攝热病毒、腮腺炎病毒、副流感病 毒、呼吸道合胞病毒、新城疫病毒、牛攝病毒)、正粘病毒(例如人流感病毒、禽流感病毒、马 流感病毒)、布尼亚病毒(例如汉坦病毒、拉克罗斯病毒化沁rossevirus)、山谷热病毒)、 沙粒病毒(例如拉沙病毒、马丘坡病毒)、呼肠病毒(例如人呼肠病毒、人轮状病毒)、双RNA 病毒(例如传染性粘液囊病病毒(infectiousbursalvirus)、鱼膜腺坏死病毒)、逆转录 病毒(例如HIV1、HIV2、HTLV-1、HTLV-2、牛白血病病毒、猫免疫缺陷病毒、猫肉瘤病毒、小 鼠乳腺瘤病毒)、嗜肝DNA病毒(例如乙型肝炎病毒)、细小病毒(人细小病毒B、犬细小病 毒、猫白细胞减少症病毒)、乳多空病毒(例如人乳头瘤病毒、SV40、牛
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