发明所属技术领域的普通技术人员可W容易实施 的方法，利用药剂学上能接受的载体和/或赋形剂来进行制剂化，从而能够W单位用量形 态制备或者内装在多容量容器内来制备。此时，剂型是油性或者水性介质中的溶液、悬浮液 或乳化液形态，或者也可W是浸膏剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或者胶囊剂形态，还可W包括分 散剂或者稳定剂。
【附图说明】
[0032] 图1烦内动脉瘤患者组及对照组CSF2mRNA相对表达情况
[0033] 图2干扰后各组CSF2mRNA相对表达量；图中B组：烦内动脉瘤患者组分离的内皮 祖细胞；C1组：B组+转染脂质体；C2组：B组+转染非特异性的siRNA;S1组：B组+转染 特异性的CSF2-siRNAl，S2组：B组+转染特异性的CSF2-siRNA2,S3组：B组+转染特异性 的CSF2-siRNA3。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本 发明的限制。本领域的普通技术人员可W理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可 W对运些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限 定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条 件实施检测。
[0035] 实施例1病例的收集
[0036] 所有组织标本为2012年10月至2014年5月经DSA确诊的烦内动脉瘤患者，并 进行显微手术开烦治疗。其中动脉瘤组织样本系显微手术中切除的动脉瘤壁组织，对照 的正常脑血管样本组织系同一时期，脑肿瘤开烦病人的颠浅动脉（STA)和/或脑膜中动脉 (MM)。为尽量减小样本间差异，选取的所有动脉瘤组织样本均系囊状动脉瘤。获取的样本 组织立即置于液氮罐中。
[0037] 实施例2高通量测序及分析
[0038] 提取RNA后琼脂糖凝胶电泳，从电泳结果可W初步判定提取的RNA样品质量合格 与否，是否可W用于进一步的转录组测序。进而通过Nano化oplOOO分光光度计检测RNA样 品的提取情况，RNA-seq测序的样品要求：0D260/0D280为1. 8-2. 2。样品合格后送往测序 公司进行测序，测序平台为Illumina公司的化Seq2500高通量测序平台，进行高通量转录 组深度测序，测序公司提供数据分析的结果结合文献我们筛选了差异表达基因CSF2。
[0039] 实施例4烦内动脉瘤患者组及对照组CSF2基因表达情况 阳040] -、材料
[0041] 选取23例烦内动脉瘤患者动脉瘤壁组织及11例对照正常脑血管样本组织，对其 进行分组及编号。样本收集标准见实施例1。
[0042]二、方法
[0043] 2. 1RNA的提取
[0044] 1)动脉瘤（正常对照血管）组织小块放在培养皿中，加入1mlTrizol，用眼科剪 剪碎后，移至匀浆器中匀浆；
[0045] 2)匀浆完成后，取出匀浆液置于EP管中，定容至1ml，可冻存与-70°C;
[0046] 3) 15-30°C放置 5min，加入 200μ1 氯仿，剧烈震荡 15sec，15-30°C放置lOmin;
[0047]4) 2-8°C，低于 12000g/min离屯、1Omin，弃上清，加入 1ml75% 乙醇，低于 7500g/ min离屯、5min，弃上清后，点离；
[0048] 5)待沉淀干燥（呈半透明状，不用完全干燥，否则会降低稳定性），用RNase-化ee water55-60°C溶解，冻存于-70°C。
[0049] 2. 2逆转录合成cDNA
[(K)加]采用Supcr.Sci.ip化IIIReverseTranscriptase(invitrogen，货号 18080-044)进 行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：
[0051] 使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对1 μ g总RNA进行逆反录合成cDNA。采用 25μ1反应体系，每个样品取1μ g总RNA作为模板RNA。获得的cDNA保存放-20°c冰箱备 用。
[0052] 2. 3Real-TimePCR
[0053] 2. 3. 1仪器及分析方法
[0054] 用ABI7500型巧光定量PCR仪，采用2-Δ ΔCT法进行数据的相对定量分析。 阳05引 2. 3. 2引物设计
[0056]采用在线引物设计软件，基因序列参照NCBI:NM_000758. 3(CSF2)，内参选GAPDH， 引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如下：
[0057]CSF2基因扩增引物：
[0058]上游引物：5, -TCCTGAACCTGAGTAGAGA-3'（沈QIDNO. 10)
[0059]下游引物：5' -CTGGAGGTCAAACATTTCTG-3'（沈QIDNO. 11) W60] 扩增长度77bp。
[0061] 内参基因扩增引物：
[0062]上游引物：5, -CGCCTGGAGAAAGCTGCTA-3'（沈QIDNO. 12)
[0063]下游引物：5' -ACGACCTGGTCCTCGGTGTA-3'（沈QIDNO. 13)
[0064] 扩增长度104bp。 W65] 操作过程如下：
[0066]( 一）反应体系：用F*owerSYBR迟.GreenPCRMasterMix(invitrogen,货号 4367659)进行扩增：2Xmix10μ1 ;10uM的上游引物和下游引物各0. 5μ1 ;模板2μ1，加 入灭菌蒸馈水补平至25μ1。
[0067]扩增程序为：95°C5min，（95°C15sec，57°C45sec)Χ35 个循环。 W側（二）引物筛选
[0069] 将各样本cDNA混合后，W此为模板进行5倍梯度稀释，稀释后样品各取2 μ 1作模 板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95°C进行融解曲线分析，根 据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行引物筛选。
[0070] (Ξ)样品RealTimePCR检测
[007U将各样品cDNA10倍稀释后取2μ1作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物 进行扩增。同时在60-95°C进行溶解曲线分析。 阳07引S、结果
[0073] 实时定量PCR扩增曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，表明各反应管的扩增 效率相近，极限平而无上扬现在，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物 溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；根据qRT-PCR的相对定量公 式：2-ACtX100%，比较CSF2基因在烦内动脉瘤组和对照组中的表达水平。结果显示： qRT-PCR扩增结果稳定，其中CSF2基因在烦内动脉瘤组中的表达水平为对照组的约3. 2倍， 见图1，W上结果验证了高通量转录组表达数据的整合分析CSF2基因在烦内动脉瘤患者中 高表达的结果。
[0074] 实施例4循环血EPCs的体外培养 W巧]一、材料
[0076] 烦内动脉瘤组和对照组各选择5例，抽取静脉血约20血。烦内动脉的结构不同于 烦外动脉，其由内皮细胞构成的内膜、平滑肌细胞构成的中膜和胶原纤维构成的外膜3层 结构组成。循环血内皮祖细胞巧PCs)可参与出生后血管再生和内皮损伤后的内皮修改，在 烦内动脉瘤的发生和发展过程中起着十分重要的作用。
[0077]二、方法
[007引2. 1人外周血内皮祖细胞的体外分离及培养[00巧]Ficoll密度梯度离屯、法分离外周血单个核细胞：
[0080] (1)取人淋己细胞分离液6血，4°C600巧m，离屯、lOmin，备用；
[0081] (2)将采集的抗凝血20血与0. 01M憐酸盐（1 X PB巧缓冲液2血按照1:1混匀。
[0082] (3)将步骤2的混匀液缓慢加入到步骤1得到的人淋己细胞分离液中（二者体积 比例为2:3，血样与淋己细胞分离液分层）；室溫，150化9111，离屯、2〇1]1；[]1;
[0083] (4)离屯、后标本分层明显（分四层），用取样枪吸取中间白膜层（单个核细胞层）， 置于离屯、管，加入2mLlXPBS缓冲液；在室溫W1500巧m离屯、lOmin，进行第一次洗涂；
[0084] (6)弃上清，加入2血1XPBS缓冲液，用取样枪轻吹打，充分混匀，在20°CW 120化pm离屯、lOmin，进行第二次洗涂； 阳0财 （7)弃上清，加入内皮祖细胞培养液巧GM)，吹打均匀，重悬细胞，细胞计数，台吩 蓝染色鉴定细胞活力（每孔1. 5-2mL);
[0086] 做调整细胞密度，按照1Xl〇6/cm2,接种入预先包被FN的6孔细胞培养板，置于 37°C5%C〇2培养箱中培养。
[0087] 2. 2细胞活力检测 阳08引末次离屯、后，弃上清，加入EGM培养基，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0. 2%台 吩蓝染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。死的细胞可被染成蓝色， 活细胞不着色。计数200个单核细胞，计算活细胞的百分率（活细胞百分率=活细胞数/ 总细胞数X100% )。
[0089] 2. 3内皮祖细胞的培养及观察
[0090] 培养至第4天时，换液去除未贴壁细胞。W后每3天换液一次，贴壁生长的细胞继 续培养至14天。每日在倒置显微镜下观察细胞生长形态学变化。
[0091] 2. 4内皮组细胞的鉴定
[0092] EPCs具有摄取acLDL和结合UEA-1的特性，我们用经培养7天后的细胞进行运步 实验，通过运步实验，可W进一步鉴定培养的EPCs的内皮特性。具体如下：
[0093](1)贴壁细胞与DU-acLDU2. 4 μg/ml)37°C解育1小时W检测EPCs对acLDL的 摄取；
[0094] 似2%多聚甲醒室溫固定10分钟后PBS洗净； 阳0巧]做将FITC-肥A-1 (10μg/ml)加入上述标本37°C解育1小时；
[0096] (4)巧光显微镜鉴定acLDL和UEA-1双染色阳性细胞的阳性率及数量。
[0097]S、实验结果
[0098] 外