胰蛋白酶抑制剂和0. 5ymol/mL的 DTT的提酶缓冲液，使黑曲霉菌体浓度为5mg/mL，加入蜗牛酶并使其浓度为0. 2mg/mL，混匀 后于37°C和120r/min下进行黑曲霉F0S-0620菌体破壁2h，然后在4°C用8000r/min离心 lOmin，离心后的上清液为β-FFase粗酶液，其βFFase酶活为0. 0782U/mg。
[0055] (3)将经过第（2)步所得的β-FFase粗酶液于4°C和8000r/min下离心5min，上 清液上样至预先用PH7. 0的不含NaCl的50mM的Tris-HCl缓冲液平衡好的阴离子交换层 析柱上，先用无NaCl的缓冲液将蛋白质洗至基线，再用含OmM~300mM的NaCl的Tris-HCl 缓冲液进行NaCl梯度洗脱，流速为lmL/min，分部收集，从左到右蛋白峰的洗脱NaCl浓度 为0mM、30mM、100mM，整个洗脱阶段出现3个大小不一的蛋白质峰，在测定每个洗脱峰的 β-FFase酶活时发现第3个峰具有酶活性，合并具有β-FFase组分，透析除盐后用聚乙二 醇 20000 浓缩，其β-FFase酶活为 1. 687U/mg。
[0056] (4)将经过第⑶步所得的β-FFase组分上样至预先用ρΗ7· 0的含（NH4) 2S04 为25%的Tris-HCl缓冲液平衡的疏水亲和层析柱上，再用含（NH4)2S04S0%~25%的 Tris-HCl缓冲液进行从高浓度到低浓度的梯度洗脱，流速为0. 5mL/min，分部收集，洗脱过 程中出现4个不同的蛋白质峰，在对各个洗脱峰进行活性测定时发现第3个峰具有酶活性， 合并具有β-FFase酶活的组分，透析除盐后用聚乙二醇20000浓缩，其β-FFase酶活为 4.274U/mg〇
[0057] 在2mL的蔗糖浓度为600g/L溶液中加入50μL的第（4)步得到的β-FFase酶液， 按照实施例1的条件进行反应后，采用HPLC法测定反应体系中蔗果低聚糖的总含量（占干 物质）为55. 74%。
[0058] 实施例3
[0059] (1)以体积百分比10%的接种量，将处于对数期生长的黑曲霉F0S-0620的菌悬液 接种于发酵诱导培养基中，于40°C和200r/min下培养72h后，所得发酵液用400目的滤袋 过滤，所得菌泥用无菌水清洗后再用400目的滤袋过滤，清洗和过滤的操作重复2次，得到 菌体，在-40°C、真空度为0. 030psi下干燥得到黑曲霉菌体。所述的发酵诱导培养基：按重 量份计，蔗糖10份，酵母浸膏5份，玉米粉5份，NaN030. 5份，pH7. 5,用蒸馏水定容至100 份，混合均匀后于121°C下灭菌冷却后备用。
[0060] (2)在⑴中黑曲霉菌种中，加入含3yg/mL的胰蛋白酶抑制剂和2ymol/mL的 DTT的提酶缓冲液，使黑曲霉菌体浓度为30mg/mL，加入蜗牛酶并使其浓度为0. 8mg/mL，混 匀后于37°C和120r/min下进行黑曲霉F0S-0620菌体破壁5h，然后在4°C用8000r/min离 心lOmin，离心后的上清液为β-FFase粗酶液，其β-FFase酶活为0. 1863U/mg。
[0061] (3)将经过第（2)步所得的β-FFase粗酶液于4°C和8000r/min下离心5min， 上清液上样至预先用PH7. 5的不含NaCl的50mM的Tris-HCl缓冲液平衡好的阴离子交 换层析柱上，先用无NaCl的缓冲液将蛋白质洗至基线，再用含OmM~300mM的NaCl的 Tris-HCl缓冲液进行NaCl梯度洗脱，流速为lmL/min，分部收集，从左到右蛋白峰的洗脱 似(：1浓度为〇1111、3〇1111、10〇1111，整个洗脱阶段出现3个大小不一的蛋白质峰，在测定每个洗 脱峰的β-FFase酶酶活性，合并具有β-FFase组分，透析除盐后用聚乙二醇20000浓缩， 其β-FFase酶活为 4. 057U/mg〇
[0062] (4)将经过第⑶步所得的β-FFase组分上样至预先用ρΗ7· 5的含（NH4)2S04 为25%的Tris-HCl缓冲液平衡的疏水亲和层析柱上，再用含（NH4)2S04S0%~25%的 Tris-HCl缓冲液进行从高浓度到低浓度的梯度洗脱，流速为0. 5mL/min，分部收集，洗脱过 程中出现4个不同的蛋白质峰，在对各个洗脱峰进行酶活性测定，合并具有β--]FFase酶 活的组分，透析除盐后用聚乙二醇20000浓缩，其β-FFase酶活为11. 306U/mg。
[0063] 在2mL的蔗糖浓度为300g/L溶液中加入50μL的第（4)步得到的β-FFase酶液， 按照实施例1的条件进行反应后，采用HPLC法测定反应体系中蔗果低聚糖的总含量（占干 物质）为58. 52%。
[0064] 实施例4
[0065] (1)以体积百分比7 %的接种量，将处于对数期生长的黑曲霉F0S-0620的菌悬液 接种于发酵诱导培养基中，于37°C和150r/min下培养60h后，所得发酵液用400目的滤袋 过滤，所得菌泥用无菌水清洗后再8000r/min离心lOmin，清洗和离心的操作重复2次，得 到菌体，在_40°C、真空度为0. 030psi下干燥得到黑曲霉菌体。所述的发酵诱导培养基：按 重量份计，鹿糖4份，酵母浸膏3份，玉米粉2份，NaN030. 3份，pH7. 0,用蒸馏水定容至100 份，混合均匀后于121°C下灭菌冷却后备用。
[0066] (2)在⑴中黑曲霉菌种中，加入含2yg/mL的胰蛋白酶抑制剂和1ymol/mL的 DTT的提酶缓冲液，使黑曲霉菌体浓度为15mg/mL，加入蜗牛酶并使其浓度为0. 5mg/mL，混 匀后于37°C和120r/min下进行黑曲霉F0S-0620菌体破壁4h，然后在4°C用8000r/min离 心lOmin，离心后的上清液为β-FFase粗酶液，其β-FFase酶活为0. 1356U/mg。
[0067] (3)将经过第（2)步所得的β-FFase粗酶液于4°C和8000r/min下离心5min， 上清液上样至预先用PH7. 3的不含NaCl的50mM的Tris-HCl缓冲液平衡好的阴离子交 换层析柱上，先用无NaCl的缓冲液将蛋白质洗至基线，再用含OmM~300mM的NaCl的 Tris-HCl缓冲液进行NaCl梯度洗脱，流速为lmL/min，分部收集，从左到右蛋白峰的洗脱 似(：1浓度为〇1111、3〇1111、10〇1111，整个洗脱阶段出现3个大小不一的蛋白质峰，在测定每个洗 脱峰的β-FFase酶酶活性，合并具有β-FFase组分，透析除盐后用聚乙二醇20000浓缩， 其β-FFase酶活为 2. 918U/mg〇
[0068] (4)将经过第⑶步所得的β-FFase组分上样至预先用ρΗ7· 3的含（NH4) 2S04 为25%的Tris-HCl缓冲液平衡的疏水亲和层析柱上，再用含（NH4)2S04S0%~25%的 Tris-HCl缓冲液进行从高浓度到低浓度的梯度洗脱，流速为0. 5mL/min，分部收集，洗脱过 程中出现4个不同的蛋白质峰，在对各个洗脱峰进行酶活性测定，合并具有β-FFase酶活 的组分，透析除盐后用聚乙二醇20000浓缩，其β-FFase酶活为7. 278U/mg。
[0069] 在2mL的蔗糖浓度为400g/L溶液中加入50μL的第（4)步得到的β-FFase酶液， 按照实施例1的条件进行反应后，采用HPLC法测定反应体系中蔗果低聚糖的总含量（占干 物质）为57. 48%。
[0070] 实施例5
[0071] (1)以体积百分比8%的接种量，将处于对数期生长的黑曲霉F0S-0620的菌悬液 接种于发酵诱导培养基中，于33°C和150r/min下培养72h后，所得发酵液用400目的滤袋 过滤，所得菌泥用无菌水清洗后再用400目的滤袋过滤，清洗和过滤的操作重复2次，得到 菌体，在-40°C、真空度为0. 030psi下干燥得到黑曲霉菌体。所述的发酵诱导培养基：按重 量份计，鹿糖8份，酵母浸膏4份，玉米粉3份，NaN030 . 4份，pH6. 5,用蒸馏水定容至100份， 混合均匀后于121°C下灭菌冷却后备用。
[0072] (2)在⑴中黑曲霉菌种中，加入含2. 5μg/mL的胰蛋白酶抑制剂和1. 5ymol/mL 的DTT的提酶缓冲液，使黑曲霉菌体浓度为20mg/mL，加入蜗牛酶并使其浓度为0. 6mg/mL， 混匀后于37°C和120r/min下进行黑曲霉F0S-0620菌体破壁3h，然后在4°C用8000r/min离心lOmin，离心后的上清液为β-FFase粗酶液，其β-FFase酶活为0. 1532U/mg。
[0073] (3)将经过第（2)步所得的β-FFase粗酶液于