1. 9. IR(KBr): 3145,3061，3037,2929,2868,1718,1653,1597,1550,1506,1456,1379,1348,1247,1215， 1139,1064,743,696cm1·虫 NMR (300MHz，DMS0-d6) δ /ppm :8. 81 (s，1H)，8· 37 (d，J = 9. 0Hz， lH)，8.16(d，J = 6.0Hz，1H) ,7.87-7. 28 (m，15H)，5.42 (s，2H)，5.08 (d，J = 15.0Hz，1H)， 4. 99 (d，J = 12. 0Hz，1H)，3. 26 (m，1H)，3. 60 (m，2H)，3. 44 (m，2H)，3. 33 (m，2H)，3. 24 (m，2H)， 3. 00 (m，2H)，1. 62 (m，1H)，1. 49 (s，1H)，1. 32 (m，2H)，1. 22 (m，2H)。
[0079] 实验例1评价化合物5a_q的细胞毒作用
[0080] 化合物5a-q用含0. 5% DMS0的1640培养基配制成所需浓度。分别将生长状态良 好、处于对数生长期的HL-60、S180、MCF-7、A549细胞按照4X 104个/mL的密度接种于96孔 板，每孔100 μ L。在37°C，5% C02培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100 μ Μ、50 μ Μ、 25 μ Μ、10 μ Μ和1 μ Μ加入经灭菌处理的化合物5a_q的溶液，对照组加入等体积溶解样品 的含0. 5% DMSO的1640培养基。继续培养48小时后，每孔加25 μ L浓度为5mg/mL的MTT 溶液，置于37°C孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100 μ L DMSO,振荡约15min溶解沉 淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD (吸光度）值。按抑制率=[(含0. 5% DMSO的 1640培养基组的OD平均值-化合物5a_q组的OD平均值）/含0. 5 % DMSO的1640培养基 组的OD值]X 100 % "计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a_q的浓度作 图，计算本发明化合物的IC5。（半数有效抑制浓度）值。
[0081] 化合物5a_q用含0. 5% DMS0的DMEM培养基配制成所需浓度。分别将生长状态 良好、处于对数生长期的HCT-8, SH-sy5y，细胞按照4X 104个/mL的密度接种于96孔板， 每孔100yL。在37°C、5% C02培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μΜ、50μΜ、 25 μ Μ、10 μ Μ和1 μ Μ加入经灭菌处理的化合物5a_q的溶液，对照组加入等体积溶解样品 的含0. 5% DMS0的DMEM培养基。继续培养48小时后，每孔加25 μ L浓度为5mg/mL的MTT 溶液，置于37°C孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100 μ L DMS0,振荡约15min溶解沉 淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定0D (吸光度）值。按抑制率=[(含0. 5% DMS0的 DMEM培养基组的0D平均值-化合物5a-q组的0D平均值）/含0. 5 % DMS0的DMEM培养基 组的0D平均值]X 100%计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a_q的浓度 作图，计算本发明化合物的IC5。（半数有效抑制浓度）值。
[0082] 结果列入表1和表2。从结果可看出本发明化合物除51，n，o，p，q外，其余化合物 都能有效地抑制六株肿瘤细胞增殖。
[0083] 表 1 化合物 5a_q 抑制 HCT-8, S180 和 SH_sy5y 增殖的活性（IC5。，无 ± SD μΜ:)
[0084]
[0086] 表2化合物5a_q抑制HL60, A549和MCF-7增殖的活性（IC5。，SD μΜ )
[0089] η = 15
[0090] 实验例2评价化合物5a_q抑制肿瘤生长的活性
[0091] 化合物5a_q用0. 5%的CMC-Na悬浮；阿霉素和阿糖胞苷用生理盐水溶解。用 0. 5%的CMC-Na悬浮；阿霉素和阿糖胞苷用生理盐水溶解。无菌条件下取接种于ICR小鼠 7天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为1 X 107个/mL，接种于健 康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0. 2mL。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日口服 0. 2mL化合物5a_q的CMC-Na悬浮液，剂量为1 μ mol/kg，每天1次，连续给药7天。空白组 小鼠每口服0. 2mL0. 5%羧甲基纤维素钠溶液。阳性对照小鼠每天腹腔注射阿霉素（剂量为 2 μ mol/kg)或阿糖胞苷（剂量为8. 2 μ mol/kg)，每天1次，连续给药7天。实验进行至第 8天，称小鼠体重，用乙醚将小鼠麻醉后将其断颈处死，并剖取各组小鼠的肿瘤称重，最后统 计各组动物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，瘤重抑制率％= [1_(化合物 5组瘤重/空白组瘤重）]X 100%。结果列入表3。表3结果表明化合物5a_q组小鼠的瘤 重显著小于空白组小鼠的瘤重，说明化合物5a_q具有良好的抗肿瘤活性。它们的这个有效 剂量（Ιμπιο?/kg)比发明人公开的1-(乙基-ΑΑ-0Βζ1)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的有效剂量 (8. 9 μ mol/kg)低 8. 9 倍。
[0092] 表35a_r对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响(无 ±SD g)
[0093]
[0094]
[0095] 注：η > 12 ;a)与0. 5 %羧甲基纤维素钠组比较p < 0. 01 ;b)与生理盐水比较p < 0. 05 ;c)与0. 5%羧甲基纤维素钠组比较p < 0. 01，与阿糖胞苷组比较p > 0. 05。
[0096] 实验例3测定化合物5a_q的透射电镜照片
[0097] 将5a_q按照5X 10 6M的浓度配置化合物的纯水溶液，均匀的铺在铜网上，在透射 电镜（TEM，JEM-1230, JE0L)下观察化合物的自组装性质。得到的照片见图2。结果表明， 5a_q在水中均可形成纳米颗粒，直径在20_200nm之间。
【主权项】
1. 下式的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋，式中残基， kPhe残基，kVal残基、kAla残基，kGly残基，kAsp(OBzl)残基，kGlu(OBzl)残基， L-T;rp残基，L-Tyr残基，L-Ser残基，L-T虹残基，L-Pro残基，L-Met残基，L-Arg(N〇2)残 基，kAsn残基，kGln残基和kLys残基。2. 权利要求1的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的制备方法，该方法 包括： (I) 将khp-OBzl在Η氣醋酸的催化下与1，1，3,3-四甲氧基丙焼进行 Pictet-Spengler缩合，得到1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋； 似将1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-β-巧晰-3-駿酸予醋在四氨巧喃中用 高儘酸钟氧化，得到1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰-3-駿酸予醋； (3) 在浓盐酸和冰醋酸的水溶液中1- (2, 2-二甲氧己基）-目-巧晰-3-駿酸予醋水解 为1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋； (4) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Leu-OBz1还原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Leu-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (5) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 'Ser-Phe-OBzl还原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Phe-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (6) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Val-OBzl还原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Val-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (7) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 .Ser-Ala-OBzl还原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Ala-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (8) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 'Ser-Gly-OBz还原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Gly-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (9) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 'Ser-Asp(OBzl) -OBzl还原性胺解，得 到1-(己基-Ser-Asp(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (10) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 .Ser-Glu(OBzl)-OBzl还原性胺解， 得到1-(己基-Ser-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (II) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-T巧-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-T巧-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (12) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Tyr-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Tyr-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (13) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Ser-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Ser-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (14)将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-化r-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-T虹-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (巧）将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Pro-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Pro-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (16) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Met-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Met-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (17) 将1-己醒基-β-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 'Ser-Arg(N02) -OBzl还原性胺解，得 到1-(己基-Ser-Arg(N02) -OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (18) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Asn-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Asn-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (19) 将1-己醒基-β-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 ·Ser-Gln-OBzl还原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Gln-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (20) 将1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋与肥1 .Ser-Lys(Fmoc) -OBzl还原性胺解， 得到l-(己基-Se;r-Lys(Fmoc)-0Bzl)-目-[?卡晰-3-駿酸予醋； (21) 将1-(己基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋冰浴下用脈巧的二甲 基甲醜胺（20% )溶液脱除Fmoc保护基得得到1-(己基-Ser-Lys-OBzl)-目-巧晰-3-駿 酸予醋。3. 权利要求1的1-(己基-Ser-ΑΑ-ΟΒζυ-β-巧晰-3-駿酸予醋的纳米结构。4. 权利要求1的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在制备抗肿瘤疾病药 物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。公开了它们的制备方法，公开了它们的纳米结构，公开了它们抑制肿瘤细胞增殖的活性，进一步公开了它们抑制S180小鼠肿瘤生长的活性，阐明了它们在制备抗肿瘤疾病药物中的应用。
【IPC分类】C07K5/062, A61P35/00, C07K1/06, A61K38/05, B82Y30/00
【公开号】CN105315324
【申请号】CN201410252600
【发明人】彭师奇, 赵明, 吴建辉, 王玉记, 王之京
【申请人】首都医科大学
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年6月10日