三阴性乳腺癌标记物及其在诊断和治疗中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肿瘤学和诊断领域。更具体地，本发明涉及一种诊断三阴性乳腺癌的 标记物及其在诊断和治疗中的应用。
【背景技术】
[0002] 人类乳腺癌在临床上大致分为四种亚型。三种亚型（LuminalA,LuminalB，Her2 阳性）的乳腺癌已知是由乳腺管腔细胞病变形成，并知道它们特异的细胞表面分子标志物 分别为雌激素受体（EstrogenReceptor)，孕酮受体（ProgesteroneReceptor)和EGF受体 (EGFReceptor，Her2)。对于这三种乳腺癌，现在临床上已有针对性的治疗靶点药物（见图 14) 〇
[0003] 上述三种受体都不表达的乳腺癌，在临床上被诊断为三阴性乳腺癌。对于三阴性 乳腺癌，由于没有特异性的细胞表面分子标志，无法进行针对性地药物研发。目前在临床上 用于三阴性乳腺癌的一线治疗药物为广普性的细胞毒化疗药物，仍缺乏有效的靶向治疗方 法。现状是三阴性乳腺癌预后差，3-5年复发率及转移率为所有乳腺癌亚型中最高。
[0004] 综上所述，寻找新的具有诊断或联合诊断价值的三阴性乳腺癌标志物，并针对性 地进行靶向药物的研发是当务之急。因此，本领域迫切需要开发可用于检测或判断三阴性 乳腺癌的特异标志物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是提供一种可用于三阴性乳腺癌的特异标志物及其在临床诊断 和肿瘤治疗中的用途。
[0006] 在本发明第一方面，提供了一种蛋白C受体（Procr)的基因、mRNA、cDNA、或蛋白 (包括其活性片段）的用途，它被用作检测三阴性乳腺癌的标志物；用于制备检测三阴性乳 腺癌或对三阴性乳腺癌进行分型的试剂或试剂盒；用作治疗三阴性乳腺癌的靶点；和/或 用于制备治疗三阴性乳腺癌的药物。
[0007] 在另一优选例中，所述的试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片（如DNA 芯片）或蛋白质芯片。
[0008] 在另一优选例中，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。
[0009] 在另一优选例中，所述的Procr基因、mRNA、cDNA、或蛋白来源于哺乳动物，更佳地 来源于啮齿动物（如小鼠、大鼠）、灵长动物和人。
[0010] 在另一优选例中，所述检测是测定组织样品。
[0011] 在另一优选例中，所述的检测还包括检测乳腺癌的转移能力。
[0012] 在另一优选例中，所述用途还包括用于预测乳腺癌患者生存时间（预后）。
[0013] 在本发明的第二方面，提供了一种蛋白C受体（Procr)蛋白或其特异性抗体的用 途，用于制备检测三阴性乳腺癌的诊断试剂或试剂盒。
[0014] 更佳地，所述的检测针对三阴性乳腺癌组织样本。
[0015] 在本发明的第三方面，提供了一种用于检测三阴性乳腺癌的诊断试剂盒，所述的 试剂盒包含：
[0016] (a)抗蛋白C受体（Procr蛋白）的抗体；和/或
[0017] (b)特异性扩增Procr mRNA或Procr cDNA的引物或引物对。
[0018] 在另一优选例中，所述的试剂盒还包括标签或说明书，所述标签或说明书注明所 述试剂盒用于检测或诊断三阴性乳腺癌。
[0019] 在另一优选例中，所述的试剂盒还包括标签或说明书，所述标签或说明书注明所 述试剂盒用于检测或诊断三阴性乳腺癌。
[0020] 在另一优选例中，所述的抗Procr蛋白的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。
[0021] 在另一优选例中，所述的试剂盒还用于预测三阴性乳腺癌患者的生存时间或预 后。
[0022] 在本发明的第四方面，提供了一种检测三阴性乳腺癌的方法，该方法包括：
[0023]a)准备受试者测试样品；
[0024]b)检测测试样品中蛋白C受体（Pr〇Cr)mRNA或蛋白的表达量，并将表达量检测 结果与参比值进行比较，其中Procr的表达量显著高于参比值表明受试者患有三阴性乳腺 癌，或患三阴性乳腺癌的几率高于正常人群。
[0025] 在另一优选例中，所述的"显著高于"指测试样品的表达量E1与参比值E0之比 彡1. 5,较佳地彡2. 0,更佳地彡3。
[0026] 在另一优选例中，所述测试样品为乳腺组织样品。
[0027] 在另一优选例中，所述的样品包括乳腺癌组织样品。
[0028] 在本发明的第五方面，提供了一种对乳腺癌进行分型的方法，包括步骤：
[0029] (a)提供一乳腺癌组织样品，所述样品为雌激素受体阴性（ER)，孕酮受体阴性 (PR)和Her2阴性（Her2 )的三阴性乳腺癌；
[0030] (b)检测测试样品中蛋白C受体（Procr)基因或蛋白的表达量，并将表达量检测结 果与参比值进行比较，其中Procr的表达量显著高于参比值，则将所述乳腺癌样品分型为 Procr阳性乳腺癌；否则将所述乳腺癌样品分型为Procr阴性乳腺癌。
[0031] 在另一优选例中，所述的"显著高于"指测试样品的表达量E1与参比值E0之比 彡1. 5,较佳地彡2. 0,更佳地彡3。
[0032] 在另一优选例中，所述参比值为正常乳腺组织或非三阴性乳腺癌样品中Procr的 表达量。
[0033] 在另一优选例中，所述检测步骤（b)包括通过RT-qPCR方法或测序进行检测。
[0034] 在另一优选例中，所述的检测步骤（b)包括使用抗Procr蛋白的抗体进行检测。
[0035] 在另一优选例中，检测步骤（b)通过免疫组化或酶联免疫反应法（ELISA法）实 现。
[0036] 在另一优选例中，所述抗Procr蛋白的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体（如抗血 清）。
[0037] 在另一优选例中，所述方法还包括评估测试样品中其他乳腺癌标记物的表达。
[0038] 在另一优选例中，所述的其他乳腺癌标记物包括：甲胎蛋白AFP、雌激素受体，孕 酮受体和Her受体或其组合。
[0039] 在本发明的第六方面，提供了一种蛋白C受体（Procr蛋白）或其特异性抗体的用 途，用于制备检测三阴性乳腺癌的诊断试剂或试剂盒。
[0040] 在另一优选例中，所述的检测为组织样品检测或血清检测。
[0041] 在另一优选例中，所述的Procr蛋白或其特异性抗体偶联有或带有可检测标记。
[0042] 在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位 素或酶。
[0043] 在另一优选例中，所述诊断试剂是单克隆抗体。
[0044] 在另一优选例中，所述的试剂是蛋白质芯片。
[0045] 在另一优选例中，所述的核酸芯片包括基片和点样在基片上的癌症相关基因的特 异性寡核苷酸探针，所述的癌症相关基因的特异性寡核苷酸探针包括与Procr多核苷酸 (mRNA或DNA)特异性结合的探针。
[0046] 在另一优选例中，所述的蛋白质芯片包括基片和点样在基片上的癌症相关蛋白的 特异性抗体，所述的癌症相关蛋白的特异性抗体包括抗Procr的特异性抗体。
[0047] 在另一优选例中，所述的特异性抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。
[0048] 在本发明的第八方面，提供了一种用于检测三阴性乳腺癌的诊断试剂盒，所述的 试剂盒含有一容器，所述容器中含有Procr蛋白或其特异性抗体；以及标签或说明书，所述 标签或说明书注明所述试剂盒用于检测或诊断三阴性乳腺癌。
[0049] 在另一优选例中，所述的标签或说明书中注明以下内容：
[0050] 如果检测对象的Procr蛋白浓度C1与正常人群的参比值C0之比彡1.5,较佳地 > 2. 0,更佳地> 3,则该对象发生乳腺癌的几率大于正常人群。
[0051] 在另一优选例中，所述的Procr蛋白或其特异性抗体偶联有或带有可检测标记。
[0052] 在本发明的第九方面，提供了一种用于检测乳腺癌的诊断试剂盒，所述的试剂盒 含有一容器，所述容器中含有特异性扩增ProcrmRNA或cDNA的特异性引物；以及标签或说 明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于通过定量检测Procr的表达量来判断患三阴 性乳腺癌的几率。
[0053] 在另一优选例中，所述的标签或说明书中注明以下内容：
[0054] 如果检测对象的ProcrmRNA的量与一般人群中ProcrmRNA的量之比彡1. 5 (较 佳地> 2. 0,更佳地> 3)，则该对象发生三阴性乳腺癌的几率大于一般乳腺癌人群。
[0055] 在本发明的第十方面，提供了一种蛋白C受体（Procr蛋白）基因、RNA、或蛋白的 用途，它被用作检测三阴性乳腺癌的标志物或对三阴性乳腺癌进行分型的标志物。
[0056] 在本发明的第十一方面，提供了一种蛋白C受体（Procr蛋白）的拮抗剂的用途， 它被用于制备（a)抑制三阴性乳腺癌细胞生长的药物；(b)降低三阴性乳腺癌细胞转移能 力的药物，（c)阻遏三阴性乳腺癌细胞的上皮-间充质转化的特性；或（d)治疗三阴性乳腺 癌的药物。
[0057] 在本发明的第十二方面，提供了一种用于治疗乳腺癌的药物组合物，它含有药学 上可接受的载体以及蛋白C受体（Procr蛋白）的拮抗剂。
[0058] 在另一优选例中，所述的拮抗剂包括：
[0059] ⑴针对Procr的siRNA、shRNA、反义RNA、抗体、或其组合；
[0060] (ii)Pr〇cr的可溶性片段或胞外片段，或含有所述片段的融合蛋白。
[0061] 在另一优选例中，所述的融合蛋白保留了Procr与蛋白C的结合活性。
[0062] 在另一优选例中，所述的胞外片段的序列为SEQIDN0. :2中第1-210位或第 18 - 210位，或其保留结合与蛋白C的结合活性的活性片段。
[0063] 在另一优选例中，所述的药物组合物还含有其他额外的治疗剂。
[0064] 在另一优选例中，所述的治疗剂是针对LuminalA阳性、LuminalB阳性和/或 Her2阳性的乳腺癌的靶点药物或化疗药物。
[0065] 在另一优选例中，所述的药物通过选自下组的用药方式进行给药：口服、静脉注 射、肌肉注射、皮下注射、舌下含化、直肠灌注、鼻腔喷雾、口腔喷雾、皮肤局部或全身经皮用 药。
[0066] 在另一优选例中，所述的药物的制剂选自下组：片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、喷 雾剂。
[0067] 在另一优选例中，所述的抑制剂以0. 05_5mg/kg体重的剂量（每次或每天）施用 于哺乳动物。
[0068] 在另一优选例中，所述的哺乳动物包括人、小鼠、大鼠，更佳地，为人。
[0069] 在本发明的第十三方面，提供了一种体外检测乳腺组织中ProcrmRNA的表达是否 异常的方法，包括以下步骤：
[0070]A、用特异性Procr的引物，作定量PCR检测，测定待测乳腺组织中ProcrmRNA的 数值；
[0071]B、将步骤A测得的Procr的数值与正常乳腺组织中的Procr的数值进行比较，如 测得的数值高于正常值，则表示被检测乳腺组织中Procr的表达异常。
[0072] 在本发明的第十四方面，提供了一种体外检测乳腺组织中Procr蛋白的表达是否 异常的方法，包括以下步骤：
[0073]A、用特异性抗Procr的抗体检测待测乳腺组织中Procr蛋白的数量；
[0074]B、将步骤A测得的Procr的数量与正常乳腺组织中的Procr的数量进行比较，如 测得的蛋白数量高于正常值，则表示被检测乳腺组织中Procr的表达异常。
[0075] 在本发明的第十五方面，提供了一种（a)治疗乳腺癌，（b)阻遏乳腺干细胞发生上 皮-间充质转化；