广藿香醇衍生物、其制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及广藿香醇衍生物，本发明还涉及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 广藿香醇（Patchouli alcohol)，其结构如式（II )所示，是从岭南药物广藿香 (Pogostemon cablin(Blanco)Benth. (Labiatae))中得到三环倍半砲类化合物。
[0004] 药理研究表明，广藿香醇具有抗炳苺、杌炎、增强认知能力和神经保护等作用。然 而，由于广藿香醇水溶性差、生物利用度低，从而限制了其应用。广藿香醇是三环倍半萜类 化合物，其空间结构为带有5个手性碳原子的四面体刚性结构，所有碳原子都是化学惰性 基团，而唯一的羟基又被两个邻位甲基高位阻的遮挡，很难进行化学反应。这样使得利用 传统的化学方法对广藿香醇进行结构修饰难以实现，目前国内外的科研机构都没有取得突 破，这阻碍了新药的研究与开发。
[0005] 国内外的研究发现，微生物体系作为常用的生物转化体系，对萜类化合物具 有良好的转化效率。例如：J. Aleu利用菌株葡萄孢菌（Botrytis cinerea)对广藿 香醇进行生物转化，获得了 5R/8S/9R-羟基广藿香醇（参见J. Aleu，et al. J. Nat. Prod. 1999, 62:437-440) ;Τ· Kolek 利用蓝色舉头霉（Absidia coerulea)和冻土毛 霉（Mucor hiemalis)转化广藿香醇，获得了 8S/9R-羟基广藿香醇（参见T.Kolek，et al. Biocatal. Biotransfor. 2009, 27:102-106.)。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种广藿香醇衍生物，以解决上述技术问题中的至少一 个。
[0007] 本发明的另一个目的在于提供上述广藿香醇衍生物的制备方法，以解决上述技术 问题中的至少一个。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供上述广藿香醇衍生物在制药中的用途，以解决上述 技术问题中的至少一个。
[0009] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种广藿香醇衍生物，其结构如下式（I ) 所示：
[0011] 其中，式中札为H或0H，R 2为H或0H，R 3为H或0H，R 4为H或0H，R 5为H或0H，R 6 为H或OH。
[0012] 根据本发明的另一方面，还提供了上述式（I )广藿香醇衍生物的制备方法，包括 以下步骤：
[0013] (1)将培养好的小克银汉霉（Cunninghamella echinulata var. elegans，保藏号： ATCC-9245)或者毛霉（Mucor ramannianus Moeller，保藏号：ATCC MYA-883)从马铃薯葡 萄糖琼脂表面刮取，悬浮于无菌水中，并接种在无菌复合培养基中，在摇床上于25~30°C、 120~220rpm的条件下培养24~72小时，然后加入质量体积比为250:1的广藿香醇-甲 醇溶液，于25~30、120~220rpm的条件下继续发酵10~20天，对广藿香醇进行衍生化。 此外，还可以用与小克银汉霉、毛霉功能等同的变异体或突变体对广藿香醇进行衍生化。
[0014] 无菌复合培养基由溶于去离子水的沙氏葡萄糖液体培养基、蔗糖和蛋白胨制成， 其pH值5. 50~7. 50,具体方法如下：沙氏葡萄糖液体培养基10~50克：蔗糖7~30克： 蛋白胨5~0克，以1000毫升去离子水溶解，用0.1 N的氢氧化钠将pH调节至5. 50~7. 50。
[0015] (2)发酵物过滤分离，得到培养液和菌丝体，培养液用等体积的乙酸乙酯萃取1~ 3次，合并萃取液，并浓缩得到深褐色浸膏；
[0016] (3)将浸膏用300~400目的硅胶柱色谱进行分离，以体积比为100 :0~0:100石 油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到广藿香醇衍生物。
[0017] 进一步的，当 R1= R4= 0H、R2= R3= R5= R6= H 时，式（I )为（5R, 8S)-二轻 基-广霍香醇；
[0018] 当 R1= R 3= 0H、R2= R 4= R5= R 6= H 时，式（I )为（5R, 9R)二羟基-广藿香 醇；
[0019] 当私=(^、1?1=1?3=1?4=1?5=1? 6=!1时，式（1)为邮，93)-二羟基-广藿 香醇；
[0020] 当 R5= OHj1= R2= R3= R4= R6= H 时，式（I )为（4R)-羟基-广藿香醇；
[0021] 当 R6= 〇H、R ! = R2= R3= R4= R5= H 时，式（I )为（3R)-羟基-广藿香醇；
[0022] 当 R1= 〇H、R2= R3= R4= R5= R6= H 时，式（I )为（5R)-羟基-广藿香醇；
[0023] 当 R3= 〇H、R ! = R2= R4= R5= R6= H 时，式（I )为（8S)-羟基-广藿香醇；
[0024] 当 R4= 〇H、R != R2= R3= R5= R6= H 时，式（I )为（9R)-羟基-广藿香醇。
[0025] 根据本发明的另一方面，还提供了上述广藿香醇衍生物的制备方法，包括以下步 骤：
[0026] (1)将培养好的小克银汉霉（Cunninghamella echinulata var. elegans，保藏号： ATCC-9245)或者毛霉（Mucor ramannianus Moeller，保藏号：ATCCMYA-883)从马铃薯葡 萄糖琼脂表面刮取，悬浮于无菌水中，并接种在无菌复合培养基中，在摇床上于25~30°C、 120~220rpm的条件下培养24~72小时，然后加入质量体积比为250:1的广藿香醇-甲 醇溶液，于25~30、120~220rpm的条件下继续发酵10~20天，对广藿香醇进行衍生化。 此外，还可以用与小克银汉霉、毛霉功能等同的变异体或突变体对广藿香醇进行衍生化。
[0027] 无菌复合培养基由溶于去离子水的沙氏葡萄糖液体培养基、蔗糖和蛋白胨制成， 其pH值5. 50~7. 50,具体方法如下：沙氏葡萄糖液体培养基10~50克：蔗糖7~30克： 蛋白胨5~0克，以1000毫升去离子水溶解，用0.1 N的氢氧化钠将pH调节至5. 50~7. 50。
[0028] (2)发酵物过滤分离，得到培养液和菌丝体，培养液用等体积的乙酸乙酯萃取1~ 3次，合并萃取液，并浓缩得到深褐色浸膏；
[0029] (3)将浸膏用300~400目的硅胶柱色谱进行分离，以体积比为100 :0~0:100石 油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到18个洗脱流份，按先后顺序标记为流份1~流份18 ;
[0030] (4)使用小克银汉霉进行生物转让时，从流份4中除去溶剂并提纯得到化合物 (5R)-羟基-广藿香醇，从流份6中除去溶剂并提纯得到化合物（8S)-羟基-广藿香醇 和（9R)-羟基-广藿香醇，从流份7除去溶剂并提纯得到化合物（4R)-羟基-广藿香醇和 (3R)-羟基-广藿香醇，从流份10除去溶剂并提纯得到化合物（5R，8S)-二羟基-广藿香 醇、（5R, 9R)-二羟基-广藿香醇和（6S, 9S)二羟基-广藿香醇；
[0031] 使用毛霉进行发酵时，从流份5分离得到化合物（5R)-羟基-广藿香醇，从流份7 分离得到化合物（8S)-羟基-广藿香醇和（9R)-羟基-广藿香醇，从流份8分离得到化合 物（4R)-羟基-广藿香醇和（3R)-羟基-广藿香醇，从流份12分离得到化合物（5R，8S)-二 羟基-广藿香醇、（5R，9R)_二羟基-广藿香醇和（6S，9S)_二羟基-广藿香醇。
[0032] 根据本发明的另一方面，还提供了一种广藿香醇衍生物的组合物，由以下步骤的 制备得到：
[0033] (1)将培养好的小克银汉霉（Cunninghamella echinulata var. elegans，保藏号： ATCC-9245)或者毛霉（Mucor ramannianus Moeller，保藏号：ATCC MYA-883)从马铃薯葡 萄糖琼脂表面刮取，悬浮于无菌水中，并接种在无菌复合培养基中，在摇床上于25~30°C、 120~220rpm的条件下培养24~72小时，然后加入质量体积比为250:1的广藿香醇-甲 醇溶液，于25~30、120~220rpm的条件下继续发酵10~20天，对广藿香醇进行衍生化。 此外，还可以用与小克银汉霉、毛霉功能等同的变异体或突变体对广藿香醇进行衍生化。 [0034] 无菌复合培养基由溶于去离子水的沙氏葡萄糖液体培养基、蔗糖和蛋白胨制成， 其pH值5. 50~7. 50,具体方法如下：沙氏葡萄糖液体培养基10~50克：蔗糖7~30克： 蛋白胨5~0克，以1000毫升去离子水溶解，用0.1 N的氢氧化钠将pH调节至5. 50~7. 50。
[0035] (2)发酵物过滤分离，得到培养液和菌丝体，培养液用等体积的乙酸乙酯萃取1~ 3次，合并萃取液，并浓缩得到深褐色浸膏；
[0036] (3)将浸膏用300~400目的硅胶柱色谱进行分离，以体积比为100 :0~0:100石 油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到18个洗脱流份，按先后顺序标记为流份1~流份18 ;混合 流份1~流份18得到广藿香醇衍生物。
[0037] 根据本发明的另一方面，还提供了一种广藿香醇衍生物的组合物，包括以下化合 物中的两种或两种以上：
[0038] (5R, 8S)-二羟基-广藿香醇、（5R, 9R)-二羟基-广藿香醇、（6S, 9S)-二羟基-广 藿香醇、（4R)-羟基-广藿香醇、（3R)-羟基-广藿香醇、（5R)-羟基-广藿香醇、（8S)-羟 基-广藿香醇和（9R)-羟基-广藿香醇。
[0039] 根据本发明的另一方面，本发明还提供了上述广藿香醇衍生物或者其组合物在制 备抗流感病毒药物中的应用。
[0040] 根据本发明的另一方面，本发明还提供了上述的广藿香醇衍生物或者其组合物在 制备抗炎药物中的应用。
[0041] 在一些具体的实施方式中，上述的药物为片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳 剂。
【附图说明】
[0042] 图1是化合物1和化合物Γ的质谱图。
[0043] 图2是化合物1和化合物Γ的核磁共振氢谱图。
[0044] 图3是化合物1和化合物Γ的核磁共振碳谱图。
[0045] 图4是化合物