制剂应用于QC靶向抗AD先导药物中。
[0038] 发明还提供一种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的另一应用，其中：将所述谷氨酰胺 酰基环化酶抑制剂应用于治疗QC特异性高表达疾病（包括风湿性关节炎、非酒精性肝炎、 皮肤黑色素瘤、红斑狼疮综合症等）的药物中。
[0039] 发明还提供一种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的另一应用，其中：将所述谷氨酰胺 酰基环化酶抑制剂应用于QC诊断试剂盒中。
[0040] 实施例1 :Ν-(3-(1Η-咪唑-1-基）丙基）-3'，4'_二甲氧基-[1，Γ-联苯]-2-胺 (MQI-I)的合成，其合成路线如下：
[0042] a、3'，4' -二甲氧基-[1，1' -联苯]_2_ 胺：将漠苯胺（5. 81mmol，1 当量），3, 4_ 二 甲氧基苯硼酸（6. 98mmol，1.2当量）和[1，Γ-双（二苯基膦）二茂铁]二氯化钯（II)二 氯甲烧络合物（0. 35mmol，0. 06当量）置于50ml圆底烧瓶中，分别加入IOml的二氧六环和 IOml的2mol/L K2CO3溶液，100°C，回流3h。加入饱和NaCl溶液淬灭反应，冷却至室温，乙 酸乙酯萃取三次，合并后饱和NaCl溶液洗一次，无水Na 2SO4干燥，硅胶柱层析收集产物，收 率为90%。
[0043] 13、^(3-溴丙基）-3'，4'-二甲氧基-[1，1'-联苯]-2-胺：3'，4'-二甲氧 基-[1，1'-联苯]-2-胺（872. 32umol，l 当量）、1，3_ 二溴丙烷（6. llmmol，7 当量）溶于 6ml无水乙腈，加入无水K2CO3 (I. 74mmol，2当量）固体，搅拌回流过夜，蒸除溶剂，乙酸乙酯 和水萃取三次，合并有机相并用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na 2SO4干燥，硅胶柱层析收集产 物，收率为48%。
[0044] c、Ν-(3-(1Η-咪唑-1-基）丙基）-3'，4'_ 二甲氧基-[1，Γ-联苯]-2-胺：咪唑 (285.5111111〇1，1当量）溶于11111无水乙腈，加入干燥1( 20)3(285.5111111〇1，1当量），常温搅拌 15min，加入上述b中所得N-(3-溴丙基）-3'，4' -二甲氧基-[1，Γ -联苯]-2-胺的Iml无 水乙腈溶液，回流过夜，蒸除溶剂，乙酸乙酯和水萃取三次，合并有机相并用饱和NaCl溶液 洗一次，无水Na2SO4干燥，硅胶柱层析收集产物，收率为20 %。
[0045] 实施例2 :4'_氟-N-(3-(4-甲基-IH-咪唑-1-基）丙基）-[1，Γ-联苯]-2-胺 (MQI-31)的合成，其合成路线如下：
[0047] a、4' -氟-[1，Γ -联苯]-2-胺：将溴苯胺（5. 81mmol，1当量）、4_氟苯硼酸 (6. 98mmol，L 2当量）和[1，P -双（二苯基膦）二茂铁]二氯化钯（II)二氯甲烷络合物 (0· 35mmol，0. 06当量）置于50ml圆底烧瓶中，溶剂为IOml二氧六环和IOml 2mol/L K2CO3 溶液，l〇〇°C，搅拌3h，加入饱和NaCl溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次，合并后饱和NaCl溶 液洗一次，无水Na 2SO4干燥，硅胶柱层析收集产物，收率为94%。
[0048] b、N-(3_ 溴丙基）_4' -氟[1，Γ -联苯]-2-胺：4' -氟-[1，Γ -联苯]-2-胺 (534. 15umol，1当量）和1，3-二溴丙烷（3. 74mmol，7当量）溶于4ml无水乙腈，加入无水 K2CO3 (I. 74mmol，2当量）固体，搅拌回流过夜，蒸除溶剂，乙酸乙酯和水萃取三次，合并有机 相并用饱和NaCl溶液洗一次，无水Na 2SO4干燥，硅胶柱层析收集产物，收率为45%。
[0049] c、4'_ 氟-N-(3-(4-甲基-IH-咪唑-1-基）丙基）-[1，1'-联苯]-2-胺：4_ 甲基 咪唑（324.48窗〇1，1当量）溶于1!111无水乙腈，加入无水1(20)3(285.5111111〇1，1当量），常温 搅拌15min ;加入上述b中所得N-(3-溴丙基）-4' -氟[1，Γ -联苯]-2-胺的Iml无水乙 腈溶液，搅拌回流过夜，蒸除溶剂，乙酸乙酯和水萃取三次，合并有机相并用饱和NaCl溶液 洗一次，无水Na 2SO4干燥，硅胶柱层析收集产物，收率为18%。
[0050] 实施例3 :QC抑制剂对QC酶抑制活性测试
[0051] QC酶抑制活性测试原理示意图如图1所示。酶活测试在96孔酶标板中进行，采 用 200ul pH8. OTris 缓冲体系：0· 3mM NADH，2. OmM 新鲜制备 Gln-Gln，14mM α -酮戊二酸， 30U/ml谷氨酸脱氢酶，50mM Tris，pH8. 0缓冲液，最后加入0. 28 μ M重组人QC蛋白与不同 浓度抑制剂的混合液，振荡30秒后以酶标仪动态检测25°C时NADH在340nm波长处15min 内吸收值变化，每隔30s进行一次数据采集，根据测试结果，计算抑制剂对QC酶活抑制作 用的IC5。值，对于不同QC抑制剂的测试结果如表1中所示，其中QC抑制剂的结构式为：
[0055] 实施例4QC抑制剂抗AD作用
[0056] 以双转基因 AD 小鼠（B6C3-Tg(APPswe, PSENldE9) 85Dbo/MmJNju)为模型动物，选 择雌性2月龄AD小鼠，设用药组和对照组，各6只，以MQI-I为实验用药，剂量8. Omg/kg，腹 腔注射，隔两天给药1次，对照组给等量缓冲溶液，连续用药6周后开展行为学实验。Nest construction行为学实验，在各笼中随机放入等量的试纸团，并均勾分布，在间隔24小时 后，观察记录小鼠对试纸团的挪移、粉碎及用试纸团筑巢的情况，结果表明，用药组小鼠再 筑行为明显改善，认知、记忆功能显著增强。AD相关病理学实验，处死小鼠，取脑组织，蔗糖 梯度脱水，OCT包埋后进行冠装冰冻切片，然后进行Western Blot和ThS染色分析，结果表 明，用药后小鼠脑部的老年斑沉淀明显减少。综合上述实验，MQI-I在小鼠体内显示出显著 的抗AD作用。
[0057] 综上所述，本发明中的制备方法，其仅需Suzuki偶联、SN2反应等即可完成，相比 现有技术，本发明的工艺路线简单可行，收率高，更适合大规模制备；本发明的QC抑制剂对 QC抑制活性显著，部分化合物的IC5。已达到4. 72 μ M，作为先导化合物值得进一步的优化设 计、合成，具备开发成为新型、高效QC的极大潜力。本发明的QC抑制剂可用于AD、肿瘤、风 湿性关节炎等多种与QC特异性高表达相关疾病病因性治疗药物的开发、发病机理及分子 机制研究、早期诊断及诊断试剂盒的开发等。
[0058] 应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可 以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保 护范围。
【主权项】
1. 一种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的制备方法，所述谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的结其中，A单元是苯环、六元杂芳环、五元杂芳 环、七元芳环、萘、蒽、萘醌或多芳环体系，&是氢、直链状烷基、支链状烷基、烷氧基、卤素、 羧基、硝基、磺酸基、胺基、磷酸基及其取代物中的一种； B单元是苯环、六元杂芳环、五元杂芳环、七元芳环、萘、蒽、萘醌或多芳环体系，R2是氢、 直链状烷基、支链状烷基、烷氧基、卤素、羧基、硝基、磺酸基、胺基、磷酸基及其取代物中的 一种； C单元中，咪唑环上R3是氢、直链状烷基、支链状烷基、烷氧基、卤素、胺基及其取代物中 的一种； 其特征在于，制备方法包括步骤： (1) 以带有硼酸基、胺基和札的A单元原料和带有溴取代基和R2的B单元原料起始， 经Suzuki偶联反应，制备A单元和B单元偶联的中间体； (2) 以A单兀和B单兀偶联的中间体和二漠烷基链为原料，经SN2反应制备含有烷基链 的中间体； (3) 以含有烷基链的中间体和咪唑或含取代基咪唑为原料，经SN2反应制备得到谷氨 酰胺酰基环化酶抑制剂。2. -种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的应用，其特征在于：将所述谷氨酰胺酰基环化酶 抑制剂应用于QC靶向抗AD先导药物中。3. -种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的应用，其特征在于：将所述谷氨酰胺酰基环化酶 抑制剂应用于治疗QC特异性高表达疾病的药物中。4. 一种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的应用，其特征在于：将所述谷氨酰胺酰基环化酶 抑制剂应用于QC诊断试剂盒中。
【专利摘要】本发明公开一种谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的制备方法及应用。其中，制备方法包括步骤：(1)以带有硼酸基、胺基和R1的A单元原料和带有溴取代基和R2的B单元原料起始，经Suzuki偶联反应，制备A单元和B单元偶联的中间体；(2)以A单元和B单元偶联的中间体和二溴烷基链为原料，经SN2反应制备含有烷基链的中间体；(3)以含有烷基链的中间体和咪唑或含取代基咪唑为原料，经SN2反应制备得到谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂。本发明中的制备方法，其仅需Suzuki偶联、SN2反应等即可完成，本发明的工艺路线简单可行，收率高，更适合大规模制备；QC抑制剂可广泛应用于高效QC抑制剂类新药的开发、AD等QC特异性高表达相关疾病的药物、创新药物及诊断试剂盒的开发等。
【IPC分类】A61P25/28, C07D233/61, A61K31/417
【公开号】CN105384691
【申请号】CN201510701143
【发明人】吴海强, 董瑶, 邹永东, 郑易之, 李满满, 刘志刚, 贺震旦, 余熙
【申请人】深圳大学
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年10月26日