%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0225] 或ii)的生物学活性片段，
[0226] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、β-丙氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛 酸、11-氨基十一酸、12-氨基十二酸、3-氨基异丁酸酯、腐胺、尸胺、3-氨基环己酸酯、丙醛、 丁醛、酪胺、2-氨基讳满、六亚甲基二胺、1,7-二氨基庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基壬 烷、1，10-二氨基癸烷、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、牛 磺酸、甘油醛、3-氨基庚酸、环己胺、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、乙醇胺、丙氨 酸和丙酮酸盐。
[0227] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0228] i)SEQ ID Ν0:2中提供的氨基酸序列，
[0229] ii)与SEQ ID N0:2至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0230] 或ii)的生物学活性片段，
[0231] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、尸胺、六亚甲基二胺、1，7_二氨基 庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基壬烧、1，10-二氨基癸烧、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨 基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、2,4_二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基 糠醛、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0232] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0233] i)SEQ ID N0:6中提供的氨基酸序列，
[0234] ii)与SEQ ID N0:6至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0235] 或ii)的生物学活性片段，
[0236] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:6_氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨基十一酸、12-氨基十二酸、腐胺、尸胺、 3-氨基环己酸酯、丙醛、丁醛、酪胺、2-氨基茚满、2-甲基苄胺、六亚甲基二胺、1，7_二氨基庚 烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基壬烧、1，10-二氨基癸烧、环己胺、6-氨基己醇、7-氨基庚 醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、环己酮、多巴胺、血清素、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0237] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0238] i)SEQ ID N0:7中提供的氨基酸序列，
[0239] ii)与SEQ ID N0:7至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0240] 或ii)的生物学活性片段，
[0241]其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、六亚甲基二胺、1,7-二氨基庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基壬烧、1，10-二氨基癸 烷、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、2,4_二氨基丁酸酯、 2_甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0242] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0243] i)SEQ ID N0:8中提供的氨基酸序列，
[0244] ii)与SEQ ID N0:8至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0245] 或ii)的生物学活性片段，
[0246] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、氨基丙二酸二乙酯、六亚甲基二胺、1,7-二氨基庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基壬 烧、1，10-二氨基癸烧、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、2， 4_二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0247] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0248] i)SEQ ID N0:9中提供的氨基酸序列，
[0249] ii)与SEQ ID N0:9至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少95% 相同的氨基酸序列，或
[0250] 或ii)的生物学活性片段，
[0251] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、N-乙酰基-L-鸟氨酸、六亚甲基二胺、1,7-二氨基庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基 壬烷、1，10-二氨基癸烷、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、 2，4-二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0252] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0253] i)SEQ ID N0:10中提供的氨基酸序列，
[0254] ii)与SEQ ID N0:10至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少 95%相同的氨基酸序列，或
[0255] 或ii)的生物学活性片段，
[0256] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、N-乙酰基-L-鸟氨酸、六亚甲基二胺、1,7-二氨基庚烧、1,8-二氨基辛烧、1,9-二氨基 壬烷、1，10-二氨基癸烷、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、9-氨基壬醇、10-氨基癸醇、 2，4-二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙氨酸和丙酮酸盐。
[0257] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0258] i)SEQ ID NO: 11中提供的氨基酸序列，
[0259] ii)与SEQ ID N0:11至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少 95%相同的氨基酸序列，或
[0260] 或ii)的生物学活性片段，
[0261] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、N-乙酰基-L-鸟氨酸、氨基丙二酸二乙酯、环己胺、六亚甲基二胺、1，7_二氨基庚烷、1， 二氨基辛烧、1,9-二氨基壬烧、1，10-二氨基癸烧、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、 9_氨基壬醇、10-氨基癸醇、2,4_二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙 氨酸和丙酮酸盐。
[0262] 在一个实施方案中，该多肽包含：
[0263] i)SEQ ID N0:12中提供的氨基酸序列，
[0264] ii)与SEQ ID N0:12至少40%相同、或至少80%相同、或至少90%相同、或至少 95%相同的氨基酸序列，或
[0265] 或ii)的生物学活性片段，
[0266] 其中所述多肽对选自下述但不限于下述的一种、多种或全部底物具有氨基转移酶 活性:甘氨酸、4-氨基丁酸酯、5-氨基戊酸酯、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、11-氨 基十一酸、12-氨基十二酸、鸟氨酸、赖氨酸、3-氨基环己酸酯、4-氨基-2-羟基丁酸酯、腐胺、 尸胺、N-乙酰基-L-鸟氨酸、氨基丙二酸二乙酯、环己胺、六亚甲基二胺、1，7_二氨基庚烷、1， 二氨基辛烧、1,9-二氨基壬烧、1，10-二氨基癸烧、6-氨基己醇、7-氨基庚醇、8-氨基辛醇、 9_氨基壬醇、10-氨基癸醇、2,4_二氨基丁酸酯、2-甲基苄胺、二羟丙酮磷酸、羟甲基糠醛、丙 氨酸和丙酮酸盐。
[0267] 本发明的多肽可以用于产生工业产品。
[0268] 如本文使用的，术语"工业产品"指在商业规模上制造用于人类使用的产品。工业 产品可以是中间产品，其可以出售或用于产生进一步的产品。例如，本发明的多肽可以用于 产生胺，其自身视为工业产品。这些胺可以出售且用作聚酰胺例如尼龙(即进一步的工业产 品）合成的构件块。工业产品可以是产品的混合物，例如氨基酸和胺的混合物。工业产品可 以与例如一种或多种酶或化合物或自身进一步反应，以产生另一种工业产品。技术人员应 了解工业产品可以是单体，其可以与自身或其他单体反应以形成聚合物。
[0269] 多核苷酸
[0270] 本发明涉及多种多核苷酸。
[0271] 术语"多核苷酸"和"核酸"可互换使用。多核苷酸是核苷酸单体的聚合物。本发明 的多核苷酸可以具有任何长度，并且可以包含脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸、或其类似物 或其混合物。本发明的多核苷酸可以具有基因组、cDNA、半合成或合成起源，双链的或单链 的，并且由于其起源或操作：（1)不结合它在自然界中与之结合的多核苷酸的全部或一部 分，（2)与除了它在自然界中与之连接那种之外的多核苷酸(例如启动子)连接，或(3)不在 自然界中出现。下述是多核苷酸的非限制性例子:基因或基因片段的编码区或非编码区，由 连锁分析限定的多个基因座(基因座）、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)、核 糖体RNA(rRNA)、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、经分离的DNA、经分 离的RNA、嵌合DNA、核酸探针和引物。多核苷酸可以包含经修饰的核苷酸，例如甲基化核苷 酸和核苷酸类似物。如果存在的话，则对核苷酸结构的修饰可以在聚合物装配之前或之后 赋予。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分间断。多核苷酸可以在聚合之后例如通过与标记 组分缀合进一步进行修饰。
[0272] "分离的多核苷酸"意指这样的多核苷酸，其一般已与它在其天然状态中与之结合 或连接的多核苷酸序列分开。优选地，分离的多核苷酸至少60%不含、更优选至少75%不 含、且更优选至少90%不含它与之天然结合或连接的多核苷酸序列。
[0273] "外源多核苷酸"意指在无细胞表达系统或天然不含该多核苷酸的细胞中存在的 多核苷酸，或者与其天然状态相比较，以改变的量表达或以改变的速率(例如在mRNA的情况 下）表达的多核苷酸。在一个实施方案中，将多核苷酸引入天然不含所述多核苷酸的细胞 内。通常，外源DNA用作mRNA转录的模板，其随后在经转化的细胞内翻译成编码本发明的多 肽的氨基酸残基的连续序列。在另一个实施方案中，所述多核苷酸对于细胞是内源的，并且 它的表达通过重组手段加以改变，例如在目的内源基因上游引入外源控制序列，以允许经 转化的细胞表达由该基因编码的多肽。
[0274] 本发明的外源多核苷酸包括未与它存在于其中的基于细胞的表达系统或无细胞 表达系统的其他组分分开的多核苷酸，以及在随后纯化掉至少一些其他组分的在所述基于 细胞的表达系统或无细胞表达系统中产生的多核苷酸。
[0275] 就限定的多核苷酸而言，应了解高于上文提供那些的％相同性数字涵盖优选实施 方案。因此，当适用时，按照最小％相同性数字，优选多核苷酸包含这样的多核苷酸序列，其 与相关指定SEQ ID N0至少50%、更优选至少60%、更优选至少65%、更优选至少70%、更优 选至少75%、更优选至少80%、更优选至少85%、更优选至少90%、更优选至少91 %、更优选 至少92%、更优选至少93%、更优选至少94%、更优选至少95%、更优选至少96%、更优选至 少97%、更优选至少98%、更优选至少99%、更优选至少99.1 %、更优选至少99.2%、更优选 至少99.3%、更优选至少99.4%、更优选至少99.5%、更优选至少99.6%、更优选至少 99.7 %、更优选至少99.8 %、且甚至更优选至少99.9 %相同。
[0276] 本发明的多核苷酸或对于本发明有用的多核苷酸可以在严格条件下与本文限定 的多核苷酸选择性杂交。如本文使用的，严格条件是这样的：（1)在42°C下在杂交期间采用 变性剂例如甲酰胺，例如50% (v/v)甲酰胺与0.1 % (w/v)牛血清白蛋白、0.1%Ficoll、 0.1 %聚乙烯吡咯烷酮、含有750mM NaCl以pH 6.5的50mM磷酸钠缓冲液、75mM柠檬酸钠;或 (2)在42°C下采用在0.2x SSC和0.1%SDS中的50% 甲酰胺、5x SSC(0.75M NaCl、0.075M柠 檬酸钠）、50mM磷酸钠缓冲液(pH 6.8)、0.1 %焦磷酸钠、5x Denhardt ' s溶液、超声处理的鲑 精DNA(50g/ml)、0.1 % SDS和10 %硫酸葡聚糖，和/或(3)在50°C下采用低离子强度和高温用 于洗涤，例如0 · 015M NaCl/Ο · 0015M梓檬酸钠/0 · 1 % SDS。
[0277] 当与参考多核苷酸相比较时，本发明的多核苷酸可以具有一个或多个突变，其是 核苷酸残基的缺失、插入或置换。相对于参考序列具有突变的多核苷酸可以是天然存在的 (即，从天然来源中分离的)或合成的(例如通过对核酸进行定点诱变或DNA改组）。
[0278] 重组载体
[0279] 本发明的一个实施方案包括重组载体，其包含本文限定的至少一种多核苷酸，并 且能够将所述多核苷酸递送到宿主细胞内。重组载体包括表达载体。重组载体含有异源多 核苷酸序列，即天然地未发现与本发明的多核苷酸邻近的多核苷酸序列，其优选衍生自除 了本发明的多核苷酸由其衍生的物种之外的物种。载体可以是RNA或DNA、原核或真核的，并 且通常为衍生自病毒的病毒载体或质粒。
[0280] 质粒载体通常包括另外的核酸序列，其提供用于在原核细胞中的容易选择、扩增 和转化，例如pUC衍生的载体、pSK衍生的载体、pGEM衍生的载体、pSP衍生的载体、pBS衍生的 载体、或含有一个或多个T-DNA区的二元载体。另外的核酸序列包括提供载体的自主复制的 复制起点、优选编码抗生素或除草剂抗性的可选标记物基因、提供插入在核酸构建体中编 码的核酸序列或基因的多重位点的独特多重克隆位点、以及增强原核细胞和真核细胞转化 的序列。
[0281] 如本文使用的，"可操作地连接"指在两个或更多个核酸(例如DNA)区段之间的功 能关系。通常，它指转录调节元件（启动子)与所转录序列的功能关系。例如，如果启动子刺 激或调节编码序列在适当细胞中的转录，则它与本文限定的多核苷酸的编码序列可操作地 连接。一般地，与所转录序列可操作地连接的启动子转录调节元件与所转录序列在物理上 邻接，即它们是顺式作用的。然而，一些转录调节元件例如增强子无需与它们增强其转录的 编码序列在物理上邻接或定位紧密接近。
[0282] 当存在多重启动子时，每个启动子可以独立地是相同或不同的。
[0283] 重组载体还可以含有：（a)编码信号肽序列的一种或多种分泌信号，以允许本文限 定的所表达多肽从产生多肽的细胞中分泌，或提供所表达多肽的定位，例如用于将多肽保 留在细胞中的内质网(ER)中，或转移到质粒内，和/或(b)含有导致核酸分子作为融合蛋白 表达的融合序列。合适的信号区段的例子包括能够指导本文限定的多肽的分泌或定位的任 何信号区段。重组载体还可以包括在本文限定的多核苷酸的核酸序列周围和/或之内的介 入和/或未翻译序列。
[0284] 为了促进转化体的鉴定，除本文限定的多核苷酸的核酸序列之外，重组载体期望 地包含可选择或可筛选标记物基因。"标记物基因"意指这样的基因，其对表达标记物基因 的细胞赋予独特表型，并且因此允许此类经转化的细胞区别于不具有标记物的细胞。可选 择标记物基因赋予性状，其可以基于对选择剂(例如除草剂、抗生素、辐射、热或破坏未经转 化的细胞的其他处理）的抗性"加以选择"。可筛选标记物基因（或病毒基因）赋予可以通过 观察或测试，即通过"筛选"鉴定的性状(例如葡萄糖醛酸酶、荧光素酶、GFP或未经转化的 细胞中不存在的其他酶活性）。标记物基因和目的核苷酸序列无需是连接的，未连接基因的 共转化在例如US 4，399,216中得到描述。标记物的实际选择并非关键，只要它与宿主细胞 组合起作用（即选择性）。
[0285] 细菌可选择标记物的例子是赋予抗生素抗性，例如氨苄青霉素、红霉素、氯霉素或 四环素抗性，优选卡那霉素抗性的标记物。用于选择植物转化体的示例性可选择标记物包 括但不限于编码潮霉素 Β抗性的hyg基因；赋予对卡那霉素、巴龙霉素、G418的抗性的新霉素 磷酸转移酶(nptll)基因；如例如EP 256223中所述，赋予对谷胱甘肽衍生的除草剂的抗性， 来自大鼠肝脏的谷胱甘肽-S-转移酶基因；如例如W0 87/05327中所述，在过表达后，赋予对 谷氨酰胺合成酶抑制剂例如草丁膦的抗性的谷氨酰胺合成酶基因；如例如EP 275957中所 述，赋予对选择剂草丁膦的抗性，来自绿色产色链霉菌（S t r e p t 〇 m y c e s viridochromogenes)的乙酰基转移酶基因；如例如由Hinchee等人（1988)描述的，编码5-稀 醇式莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的基因，赋予对N-膦酰甲基甘氨酸的耐受性；如例如W0 91/02071中所述，赋予针对双丙氨膦的抗性的bar基因；腈水解酶基因，例如来自臭鼻克雷 伯氏菌(Klebsiella ozaenae)的bxn，其赋予对溴苯腈的抗性(Stalker等人，1988);赋予对 氨甲蝶呤的抗性的二氢叶酸还原酶(DHFR)基因（Thillet等人，1988);突变型乙酰乳酸合酶 基因(ALS)，其赋予对咪唑啉酮、磺酰脲或其他ALS抑制化学制品的抗性(EP 154,204);突变 的邻氨基苯甲酸合酶基因，其赋予对5-甲基色氨酸的抗性;或茅草枯脱卤素酶基因，其赋予 对除草剂的抗性。
[0286] 优选的可筛选标记物包括但不限于编码β-葡萄糖醛酸酶(GUS)的uidA基因，关于 所述GUS的各种生色底物是已知的；编码关于其的生色底物是已知的酶的β-半乳糖苷酶基 因；可以用于钙敏感性生物发光检测的水母素基因 （Prasher等人，1985);绿色荧光蛋白基 因（Niedz等人，1995)或其衍生物；或允许生物发光检测的萤光素酶（luc)基因（0w等人， 1986)。"报道分子"意指通过其化学性质，提供了可经分析鉴定的信号的分子，所述信号促 进通过参考蛋白质产物来测定启动子活性。
[0287] 优选地，重组载体稳定地被掺入细胞的基因组内。相应地，重组载体可以包含适当 元件，其允许载体被掺入细胞的基因组或染色体内。
[0288] 表达载体
[0289] 如本文使用的，"表达载体"是DNA或RNA载体，其能够转化宿主细胞且实现一种或 多种指定多核苷酸的表达。优选地，表达载体还能够在宿主细胞内复制。表达载体可以是原 核或真核的，并且通常是病毒或质粒。本发明的表达载体包括任何载体，其在本发明的宿主 细胞中起作用（即指导基因表达），所述宿主细胞包括细菌、真菌、体内寄生虫、节肢动物、动 物、植物和藻类细胞。本发明的特别优选的表达载体可以指导在细菌或真菌细胞中的基因 表达。
[0290] 本发明的表达载体含有调节序列例如转录控制序列、翻译控制序列、复制起点、以 及其他调节序列，其与宿主细胞相容且控制本发明的多核苷酸的表达。特别地，本发明的表 达载体包括转录控制序列。转录控制序列是控制转录的起始、延伸和终止的序列。特别重要 的转录控制序列是控制转录起始的那些，例如启动子、增强子、操纵子和阻遏子序列。合适 的转录控制序列包括可以在本发明的宿主细胞中起作用的任何转录控制序列。使用的调节 序列的选择取决于宿主细胞。此类调节序列可以得自任何真核生物，或可以是化学合成的。 各种此类转录控制序列是本领域技术人员已知的。
[0291] 优选的转录控制序列包括在细菌、真菌、节肢动物、线虫、植物或哺乳动物细胞中 起作用的那些，例如但不限于tac、]^(：、1:印、1：1'(3、(《711'〇、〇11^|/]^。、1'1'1113、细菌卩策菌体人、细 菌噬菌体T7、T71ac、细菌噬菌体T3、细菌噬菌体SP6、细菌噬菌体SP01、金属硫蛋白、α-交配 因子、毕赤酵母属(Pichia)醇氧化酶、甲病毒属亚基因组启动子(例如辛德毕斯病毒亚基因 组启动子）、抗生素抗性基因、杆状病毒、玉米夜蛾(Heliothis zea)昆虫病毒、牛痘病毒、疱 疹病毒、垸熊痘病毒、其他痘病毒、腺病毒、巨细胞病毒（例如立即早期启动子）、猿猴病毒 40、逆转录病毒、肌动蛋白、逆转录病毒长末端重复序列、劳斯肉瘤病毒、热休克、磷酸盐和 硝酸盐转录控制序列、以及能够控制在原核细胞或真核细胞中的基因表达的其他序列。
[0292] 5'非翻译的前导序列可以衍生自选择为表达本发明的多核苷酸的异源基因序列 的启动子，或可以就待产生的酶的编码区而言是异源的，并且可以在需要时进行特异性修 饰，以便增加 mRNA的翻译。关于优化转基因表达的综述，参见Koziel等人（1996)。本发明并 不限于其中非翻译区衍生自伴随启动子序列的5'非翻译序列的构建体。前导序列还可以衍 生自无关启动子或编码序列。
[0293] 转录终止伴随3'非翻译DNA序列，其在表达载体中与目的多核苷酸可操作地连接。 重组DNA分子的3 '非翻译区含有多腺苷酸化信号，其在宿主细胞中起作用，以促使腺嘌呤核 苷酸添加到RNA的3'末端。
[0294] 通过操纵例如在宿主细胞内的多核苷酸拷贝数、那些多核苷酸由其转录的效率、 所得的转录物由其翻译的效率以及翻译后修饰的效率，重组DNA技术可以用于改善经转化 的多核苷酸的表达。可用于增加本文限定的多核苷酸表达的重组技术包括但不限于:使多 核苷酸与高拷贝数质粒可操作地连接、将多核苷酸分子整合到一条或多条宿主细胞染色体 内、将载体稳定性序列加入质粒、置换或修饰转录控制信号(例如启动子、操纵子、增强子）、 置换或修饰翻译控制信号（例如核糖体结合位点、夏因-达尔加诺序列（Shine-Dalgarno sequence))、修饰多核苷酸以对应于宿主细胞的密码子使用、和缺失使转录物失稳的序列。
[0295] 宿主细胞和重组细胞
[0296] 如本文使用的，术语"宿主细胞"指能够用本发明的外源多核苷酸转化的细胞。一 旦被转化，宿主细胞就能够被称为"重组细胞"或