从骨髓中提取免疫细胞的方法_2

文档序号:9762775阅读:来源:国知局
附权利要求为准。
[0025]实施例一
[0026]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0027]I)采集人骨髓,用含15 %胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0028]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;
[0029]3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0030]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离心,吸取白膜层细胞获得免疫细胞;
[0031]5)将免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀,分装于细胞冻存管中,将细胞冻存管放置于程序冻存盒中,先于_80°C冷冻,然后转入液氮中冻存。
[0032]其中,分离液的制备方法为:在具备局部百级层流净化条件的环境下,在20°C下,将符合药用标准的右旋糖酐3g,海藻糖4g,超低粘度海藻酸钠0.Sg,泛影葡胺lg,聚二烯丙基二甲基氯化铵0.15g充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100mL,再经过0.22μπι滤膜过滤至一支无菌、无内毒素的容器内。
[0033]实施例二
[0034]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0035]I)采集人骨髓,用含15 %胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0036]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;
[0037]3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0038]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离心,吸取白膜层细胞获得免疫细胞;
[0039]5)将免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀,分装于细胞冻存管中,将细胞冻存管放置于程序冻存盒中,先于_80°C冷冻,然后转入液氮中冻存。
[0040]其中,分离液的制备方法为:在具备局部百级层流净化条件的环境下,在20°C下,将符合药用标准的右旋糖酐5g,海藻糖2g,超低粘度海藻酸钠0.3g,泛影葡胺3g,聚二烯丙基二甲基氯化铵0.1g充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液lOOmL,再经过0.22μπι滤膜过滤至一支无菌、无内毒素的容器内。
[0041 ] 实施例三
[0042]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0043]I)采集人骨髓,用含15%胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0044]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;
[0045]3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0046]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离心,吸取白膜层细胞获得免疫细胞;
[0047]5)将免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀,分装于细胞冻存管中,将细胞冻存管放置于程序冻存盒中,先于_80°C冷冻,然后转入液氮中冻存。
[0048]其中,分离液的制备方法为:在具备局部百级层流净化条件的环境下,在20°C下,将符合药用标准的右旋糖酐3.5g,海藻糖3.5g,超低粘度海藻酸钠0.4g,泛影葡胺2.5g,聚二烯丙基二甲基氯化铵0.15g充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100mL,再经过0.22Mi滤膜过滤至一支无菌、无内毒素的容器内。
[0049]实施例四
[0050]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0051 ] I)采集人骨髓,用含15 %胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0052]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;
[0053]3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0054]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离心,吸取白膜层细胞获得免疫细胞;
[0055]5)将免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀,分装于细胞冻存管中,将细胞冻存管放置于程序冻存盒中,先于_80°C冷冻,然后转入液氮中冻存。
[0056]其中,分离液的制备方法为:在具备局部百级层流净化条件的环境下,在20°C下,将符合药用标准的右旋糖酐4.5g,海藻糖2.5g,超低粘度海藻酸钠0.Sg,泛影葡胺1.5g,聚二烯丙基二甲基氯化铵0.12g充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100mL,再经过0.22Mi滤膜过滤至一支无菌、无内毒素的容器内。
[0057]实施例五
[0058]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0059]I)采集人骨髓,用含15%胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0060]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;[0061 ] 3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0062]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离心,吸取白膜层细胞获得免疫细胞;
[0063]5)将免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀,分装于细胞冻存管中,将细胞冻存管放置于程序冻存盒中,先于_80°C冷冻,然后转入液氮中冻存。
[0064]其中,分离液的制备方法为:在具备局部百级层流净化条件的环境下,在20°C下,将符合药用标准的右旋糖酐3.6g,海藻糖3.3g,超低粘度海藻酸钠0.5g,泛影葡胺2.2g,聚二烯丙基二甲基氯化铵0.14g充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100mL,再经过0.22Mi滤膜过滤至一支无菌、无内毒素的容器内。
[0065]实施例六
[0066]从骨髓中提取免疫细胞的方法,包括如下步骤:
[0067]I)采集人骨髓,用含15 %胎牛血清的α-ΜΕΜ培养液5倍稀释,400g,5min离心,弃上清及脂肪层,获骨髓细胞;
[0068]2)将外周血移入离心管中,750g,10min离心,吸取上层血浆备用,下层细胞用于分离外周血淋巴细胞;骨髓细胞中加入含15 %上述上层血浆的α-ΜΕΜ培养液制成细胞悬液;
[0069]3)将含有海藻糖,超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中;
[0070]4)将细胞悬液平铺到所述离心液上,在8-25°(3,50(^-80(^,10?301^11条件下离
当前第2页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1