一种光合细菌水剂的制备方法及其专用培养基的制作方法_2

文档序号:9780623阅读:来源:国知局
二钢25g、屯水硫酸亚铁18g、屯水硫酸锋5.0g、六水氯化钻1.5g、棚 酸7.0g、四水氯化儘2.0g、二水钢酸钢l.Og、盐酸硫胺素2.0g、烟酸2.0g、对氨基苯甲酸 3. Og、生物素0.50g和乙醇500g,其余为水。
[0030] 所述培养基的抑值可为6.8~7.0(如6.8~6.9或6.9~7.0或6.8或6.9或7.0)。
[0031 ] 所述培养基的电导值可小于8ms/cm。
[0032] 所述培养基还可包括螺旋藻,每95化所述培养基还可包括540~660g(如540~ 600g 或 600 ~660g 或 540g 或 600g 或 660g)螺旋藻。
[0033] 所述螺旋藻可为粉状。
[0034] 每95化所述培养基可由如下组分组成:苹果酸2340g、二水憐酸二氨钢270g、氯化 锭810g、六水氯化儀270g、二水氯化巧68g、S水憐酸氨二钟1350g、碳酸钢2700g、S水乙酸 钢2250g、乙二胺四乙酸二钢25g、屯水硫酸亚铁18g、屯水硫酸锋5.0g、六水氯化钻1.5g、棚 酸7.0g、四水氯化儘2.0g、二水钢酸钢l.Og、盐酸硫胺素2.0g、烟酸2.0g、对氨基苯甲酸 3. Og、生物素0.50g、乙醇500g和螺旋藻600g,其余为水。
[003引所述培养基的抑值可为6.8~7.0(如6.8~6.9或6.9~7.0或6.8或6.9或7.0)。
[0036] 本发明还提供了一种制备光合细菌水剂的方法。
[0037] 本发明所提供的一种制备光合细菌水剂的方法,包括如下步骤:
[0038] (1)将光合细菌接种至上述任一所述培养基,光照培养;
[0039] (2)将步骤(1)得到的培养液与后处理液混合,即为光合细菌水剂。
[0040] 上述方法中,所述后处理液的溶质及其浓度可为:盐酸硫胺素0.8~1.2g/L(如0.8 ~Ig/L或 1 ~1.2g/L或 0.8g/L 或 Ig/L或 1.2g/L)、烟酸 0.8 ~1.2g/L(如 0.8 ~Ig/L或 1 ~ 1.2g/L或0.8g/L或Ig/L或1.2g/L)、对氨基苯甲酸1.6~2.4g/L(如1.6~2g/L或2~2.4g/L 或 1.6g/L 或 2g/L 或 2.4g/L)和苹果酸 200 ~300g/L(如 200 ~250g/L 或 250 ~300g/L 或 200g/L 或250g/L或300g/L)。
[0041] 上述方法中,所述后处理液的溶质及其浓度具体可为:盐酸硫胺素 Ig/L、烟酸Ig/ L、对氨基苯甲酸2g/L和苹果酸250g/L。
[0042] 上述方法中,所述后处理液的溶剂可为质量百分含量为20~30%的乙醇溶液。
[0043] 上述方法中,所述后处理液的溶剂具体可为质量百分含量为20%的乙醇溶液。
[0044] 上述方法中,所述乙醇溶液具体可为乙醇水溶液。
[004引上述方法中,所述光合细菌可为沼泽红假单胞菌。
[0046]上述方法中,所述步骤(1)中所述"将光合细菌接种至上述任一所述培养基"可包 括培养光合细菌得到光合细菌种子液的步骤。
[0047] 所述光合细菌种子液的接种量可为4~8% (如4~5%或5~8%或4%或5%或 8%)〇
[0048] 所述光合细菌种子液的接种量为光合细菌种子液和培养体系的体积之比。
[0049] 上述方法中,所述步骤(1)中所述光照培养的条件为(al)或(a2)或(a3)或(a4):
[0050] (al)培养溫度为 25°C ~30°C(如 25°C ~28°C 或 28°C ~30°C 或 25°C 或 28°C 或 30°C); 在1200~2000勒克斯(如1200~1500勒克斯或1500~2000勒克斯或1200勒克斯或1500勒克 斯或2000勒克斯)照度光照下培养64~8地(如64~7化或72~8地或6地或7化或8地);
[0051 ] (a2)培养溫度为28°C;在1500勒克斯照度光照下培养72h;
[0052] (a3)培养溫度为 25°C ~30°C(如 25°C ~28°C 或 28°C ~30°C 或 25°C 或 28°C 或 30°C); 先在450~600勒克斯(如450~500勒克斯或500~600勒克斯或450勒克斯或500勒克斯或 600勒克斯)照度光照下20h~28h(如20~24h或24~2她或20h或24h或28h),然后在1200~ 2000勒克斯(如1200~1500勒克斯或1500~2000勒克斯或1200勒克斯或1500勒克斯或2000 勒克斯)照度光照下4化~56h(如42~4她或48~56h或4化或4她或56h)。
[0053] (a4)培养溫度为28°C;先在500勒克斯照度光照下2地,然后在1500勒克斯照度光 照下4她。
[0054] 上述方法中,所述步骤(1)中所述光照培养的光源应富含480nm~880nm波长的可 见光,特别是富含800nm~860nm波长的长波可见光。
[0055] 上述方法中,所述步骤(1)中所述光照培养的光源至所述培养基(光合细菌已接种 至所述培养基)的任何一点,在培养基液体内部经过的路径不超过18cm。目的为保证已接种 光合细菌的所述培养基中各个位置在培养后期透明度下降时仍能得到足够的光照。
[0056] 上述方法中,所述步骤(1)中所述光照培养的条件为已接种光合细菌的所述培养 基处于密闭(隔绝外界空气)的条件。
[0057] 利用上述任一所述方法制备的光合细菌水剂也属于本发明的保护范围。
[0058] 上述任一所述培养基和上述任一所述光合细菌水剂在制备产品中的应用也属于 本发明的保护范围;所述产品可为el)或e2)或e3):
[0059] el)饲料添加剂;
[0060] e2)菌肥;
[0061] e3)水质改良剂。
[0062] 实验证明,本发明提供的光合细菌水剂的制备方法具有如下特点:一是本发明提 供的培养基完全不含生物大分子配料(如酵母膏、蛋白腺、粮食蒸煮液等),而是完全由小分 子化合物提供碳源、氮源、生长因子等,其化合物的选择、配比和量保证了沼泽红假单胞菌 的最佳生长条件,又大大抑制了大多数杂菌的生长;二是采用适当浓度的憐酸盐缓冲液控 制酸碱度,使其浓度既保持在菌种耐受范围之内,又有较好的缓冲力,即完成光合细菌培养 后,培养基的pH值增加程度仅在0.3至0.5,可W保持基本中性的酸碱度,保证了光合细菌处 于最佳生长条件;Ξ是增加了后处理工序,提高了质量和保质期;四是提供了一种既保证了 沼泽红假单胞菌的最佳生长条件,又可W方便实现的吨级规模生产的方法。可见,本发明提 供的光合细菌水剂的制备方法及其专用培养基在光合细菌水剂的吨级规模生产中具有重 要的应用。
【具体实施方式】
[0063] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐 明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
[0064] 下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。
[0065] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0066] 下述实施例中的水可为纯净水、蒸馈水或符合饮用标准但不含消毒剂的净水。
[0067] 培养基的主要原料如苹果酸、碳酸钢、乙酸钢、生长因子、乙醇等均为食品级或饲 料级产品,微量元素如邸TA二钢盐、硫酸亚铁、硫酸锋等均使用分析纯试剂。
[006引下述实施例中的沼泽红假单胞菌(化odopseudomonas palustris)记载于如下文 献中:张玲华等,高活性光合细菌沼泽红假单胞菌培养特性初探,华南师范大学学报(自然 科学版)2001年第4期。
[0069] 实施例1、制备光合细菌水剂
[0070] -、制备光合细菌水剂A [00川 1、配制培养基A
[0072] 配制培养基A的步骤如下:
[0073] (1)酸性配料(包括苹果酸、二水憐酸二氨钢、氯化锭、六水氯化儀和二水氯化巧) 溶解于45化水,得到酸性配料溶液;碱性配料(包括Ξ水憐酸氨二钟、碳酸钢和Ξ水乙酸钢) 溶解于45化水,得到碱性配料溶液;微量元素配料(包括乙二胺四乙酸二钢、屯水硫酸亚铁、 屯水硫酸锋、六水氯化钻、棚酸、四水氯化儘和二水钢酸钢)溶解于1L水,得到微量元素溶 液;生长因子配料(包括盐酸硫胺素、烟酸、对氨基苯甲酸和生物素)溶解于1L 50% (质量百 分比)乙醇水溶液,得到生长因子溶液。
[0074] (2)向步骤(1)配制的酸性配料溶液中,通过揽拌不断加入步骤(1)配制的碱性配 料溶液,得到混配溶液,在混配过程中监测pH值,使混配溶液的抑为6.8~7.0,如果混配溶 液pH值偏高、可加入适量苹果酸,如果混配溶液pH值偏低、可加入适量碳酸钢。
[0075] 上述步骤(2)中,如果因所用净水的酸碱性等原因造成混配溶液的酸碱性超范围, 则在配方中可适当增加或减少碳酸钢的用量,碳酸钢的具体增减量W混配溶液的pH值在 6.8~7.0范围为准。
[0076] (3)
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