一种光合细菌水剂的制备方法及其专用培养基的制作方法_3

文档序号:9780623阅读:来源:国知局
完成步骤(2)后,向混配溶液中加水至94化,得到基本培养基溶液。
[OOW] (4)将1L微量元素溶液和1L生长因子溶液边揽拌边加入基本培养基溶液,获得培 养基A。
[0078] 95化培养基A中的溶解物料含量为:苹果酸2340g、二水憐酸二氨钢270g、氯化锭 810g、六水氯化儀270g、二水氯化巧68g、S水憐酸氨二钟1350g、碳酸钢2700g、S水乙酸钢 2250g、乙二胺四乙酸二钢25g、屯水硫酸亚铁18g、屯水硫酸锋5.0g、六水氯化钻1.5g、棚酸 7.0邑、四水氯化儘2.0邑、二水钢酸钢1.0邑、盐酸硫胺素2.0邑、烟酸2.0邑、对氨基苯甲酸3.0邑、 生物素0.50g和乙醇500g;溶剂为水。培养基A的pH为6.8,电导值小于8ms/cm。
[0079] 2、接种
[0080] (1)菌种液A的制备
[0081 ]将沼泽红假单胞菌单克隆接种于1.2化步骤1制备的培养基A,28°C培养72h,得到 菌种液A'。
[0082]将菌种液A'接种于2化步骤1制备的培养基A, 28°C培养72h,得到菌种液A。菌种液A 中沼泽红假单胞菌的浓度为20.0~30.OX 108c化/mL。菌种液A可W根据生产需要进一步扩 增。
[008引 (2)接种
[0084]将50L步骤(1)制备的菌种液A与95化培养基A混匀(接种量为5 % ),得到初始体系。 沼泽红假单胞菌在初始体系中的浓度为1.0~1.5 X 108c化/mL。
[00扣]3、光照培养
[0086] 将步骤2得到的初始体系分装至20L磨口白小口瓶(装满至瓶口,每个磨口白小口 瓶实际装入约2化培养基,盖严磨口瓶塞),进行光照培养。选用磨口白小口瓶的原因为可W 实现密封(阻止外界空气进入),同时如因产气过多而内部压力过大时又可W由瓶口释放气 体减压。
[0087] 所述光照培养的光源应富含480nm至880nm波长的可见光,特别是富含800nm至 860nm波长的长波可见光;同时由光源至培养液任何一点,经过培养液的路径不超过18cm, W保证培养液中各个位置在培养后期透明度下降时仍能得到足够的光照。
[0088] 光照培养参数为:28°C,7化。采用白识灯为光源,用使培养瓶表面达到500勒克斯 的光照照度先24小时,然后用1500勒克斯的光照照度培养48小时。
[0089] 4、后处理
[0090] 完成步骤3后,收集整个培养体系,每1000体积份培养体系加入1体积份后处理液 并揽拌均匀,得到光合细菌水剂A。
[0091] 所述后处理液的溶质及浓度为:盐酸硫胺素 Ig/L、烟酸Ig/L、对氨基苯甲酸2g/L和 苹果酸250g/l;溶剂为20% (重量百分比)乙醇水溶液。
[0092] 二、制备光合细菌水剂B
[0093] 1、配制培养基B
[0094] 向步骤一中1制备的95化培养基A中加入600g市售粉状螺旋藻,混匀,获得培养基 B。
[0095] 95化培养基B中的溶解物料含量为:苹果酸2340g、二水憐酸二氨钢270g、氯化锭 810g、六水氯化儀270g、二水氯化巧68g、S水憐酸氨二钟1350g、碳酸钢2700g、S水乙酸钢 2250g、乙二胺四乙酸二钢25g、屯水硫酸亚铁18g、屯水硫酸锋5.0g、六水氯化钻1.5g、棚酸 7.0邑、四水氯化儘2.0邑、二水钢酸钢1.0邑、盐酸硫胺素2.0邑、烟酸2.0邑、对氨基苯甲酸3.0邑、 生物素0.50g、乙醇500g和螺旋藻600g;溶剂为水。培养基A的pH为7.0,电导值小于8ms/cm。
[0096] 2、接种
[0097] (1)菌种液B的制备
[0098] 将沼泽红假单胞菌单克隆接种于1.2化步骤1制备的培养基B,28°C培养72h,得到 菌种液B'。
[0099] 将菌种液B'接种于2化步骤1制备的培养基B,28°C培养72h,得到菌种液B。菌种液B 中沼泽红假单胞菌的浓度为20.0~30.0X 108c化/mL。菌种液B可W根据生产需要进一步扩 增。
[0100] (2)接种
[0101] 将50L步骤(1)制备的菌种液B与95化培养基B混匀(接种量为5%),得到初始体系。 沼泽红假单胞菌在初始体系中的浓度为1.0~1.5 X 108c化/mL。
[0102] 然后按照步骤一中3的方法进行培养、按照步骤一中4的方法进行后处理,得到光 合细菌水剂B。
[0103] 实施例2、光合细菌水剂的应用
[0104] -、光合细菌水剂在兔业养殖中的应用 [010引1、试验地点
[0106] 石家庄市深泽县京深懒兔养殖股份有限公司。
[0107] 2、试验用兔 [010引 2.1仔兔
[0109] 光合细菌水剂饲料A试验一组:健康仔兔10只,光合细菌水剂饲料B试验一组:健康 仔兔10只,对照一组:健康仔兔10只。
[0110] 光合细菌水剂饲料A试验二组:患病仔兔13只,光合细菌水剂饲料B试验二组:患病 仔兔13只,对照二组:患病仔兔12只。
[0111] 2.2青年兔
[0112] 光合细菌水剂饲料A试验Ξ组:健康青年兔15只,光合细菌水剂饲料B试验Ξ组:健 康青年兔15只,对照Ξ组:健康青年兔15只。
[0113] 光合细菌水剂饲料A试验四组:患病青年兔20只,光合细菌水剂饲料的式验四组:患 病青年兔20只,对照四组:患病青年兔20只。
[0114] 2.3哺乳兔
[0115] 光合细菌水剂饲料A试验五组:健康哺乳兔3只,光合细菌水剂饲料B试验五组:健 康哺乳兔3只,对照五组:健康哺乳兔3只。
[0116] 光合细菌水剂饲料A试验六组:患病哺乳兔18只,光合细菌水剂饲料的式验六组:患 病哺乳兔18只,对照六组:患病哺乳兔18只。
[0117] 3、饲料的种类和投喂量
[0118] (1)饲料的种类
[0119] a、光合细菌水剂饲料A
[0120] 将光合细菌水剂A拌入常规饲料制得。
[0121] b、光合细菌水剂饲料B
[0122] 将光合细菌水剂B拌入常规饲料制得。
[0123] C、常规饲料
[0124] (2)饲料的投喂量
[0125] 试验组每天晚上投喂一次光合细菌水剂饲料A,投喂量为仔兔5mL光合细菌水剂饲 料A/只,青年兔15mL光合细菌水剂饲料A/只,哺乳兔20mL光合细菌水剂饲料A/只。
[0126] 对照组每天晚上投喂一次常规饲料,投喂量与对应试验组的投喂量相同。
[0127] 试验组和对照组在其他时间段均投喂常规饲料,且投喂量相同。
[012引 4、试验设计
[0129]将光合细菌水剂饲料A投喂试验组,常规饲料投喂对照组,投喂量按上述步骤3(2) 进行,连续投喂30天,进行观察记录。
[0130] 按照上述方法,将光合细菌水剂A替换为光合细菌水剂B,其它步骤均不变,得到用 光合细菌水剂饲料B饲喂试验用兔的观察记录。
[0131] 试验结果见表1、表2和表3。
[0132] 表1.健康仔兔和健康青年兔饲喂光合细菌水剂饲料试验结果
[0139] 结果表明,试验一组健康仔兔比对照一组健康仔兔增重快,兔疫力强;试验Ξ组健 康青年兔比对照Ξ组健康青年兔增重快,兔疫力强;试验五组健康哺乳兔比对照五组健康 哺乳兔泌乳力强、乳汁充足,仔兔健壮、肤色红润;试验组患病兔比对照组患病兔痊愈率高, 恢复快。可见,用光合细菌水剂A或光合细菌水剂Β饲料饲喂兔,能增强免疫力,有良好的防 病、抗病效果,而且促长、增重快,并能提高兔产品质量,大幅度提高养殖户的经济效益。光 合细菌水剂饲料B的饲喂效果略好于光合细菌水剂饲料A的饲喂效果,健康仔兔和健康青年 兔的增重略有增加,患病仔兔的痊愈率也略有提高,但并无显著性差异。
[0140] 二、光合细菌水剂在奶牛养殖中应用
[0141] 1、奶牛专业养殖村的实验
[0142] (1)试验地点
[0143] 河北省定州市回族乡号头庄。
[0144] (2)试验用牛
[0145] 试验组:产后40天奶牛10头,怀孕1个月奶牛10头、怀孕3个月奶牛10头,未孕牛10 头。
[0146] 对照组:共40头奶牛,均为未孕奶牛。
[0147] (3)饲料的种类和投喂量
[0148] ①饲料的种类
[0149] a、光合细菌水剂饲料A
[0150] 将光合细菌水剂A拌入常规饲料制得。
[0151] b、常规饲料
[0152] ②饲料的投喂量
[0153] 试验组每天早晨投喂一次光合细菌水剂饲料A,投喂量为250mL-300mL光合细菌 水剂A/头。
[0154] 对照组每天早晨投喂一次常规饲料,饲料投喂量与对应试验组相同。
[0155] 试验组和对照组在其他时间段均投喂常规饲料,且投喂量相同。
[0156] (4)试验设计
[0157] 将光合细菌
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