一种荧光探针的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】一种荧光探针的制备方法及应用，它涉及一种荧光探针的制备方法及应用。本发明是要解决现有Cu2+荧光探针存在灵敏度低、空间分辨率低且易引起干扰的问题。方法：一、将焦脱镁叶绿酸-a甲酯溶于四氢呋喃中，加入氢氧化钠水溶液，回流搅拌。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷，分出水层，用2％盐酸调pH＝5。用二氯甲烷萃取三遍，浓缩反应液，用二氯甲烷/正己烷重结晶得到化合物A；二、将化合物A溶于氯仿中，加入醇胺，在氮气保护下室搅拌24小时，浓缩反应液得到粘稠状剩余物，分散在二氯甲烷中，用水洗涤三次.有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，剩余物硅胶柱层析分离得荧光探针。本发明制备的荧光探针作为探针用于检测水中铜离子。
【专利说明】一种荧光探针的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种荧光探针的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 重金属对环境的污染和对生物体的危害日益严重，引起人们广泛的关注，环境和 生物体中重金属的检测显得尤为重要。铜是一种广泛存在于环境和生物体中的常见重金属 元素，铜已成为重要的环境污染物之一。铜离子在人体中的含量仅低于锌离子和铁离子。它 在人体中参与体内的造血作用，酶反应及一些生物氧化还原过程。适量的存在有益于维持 机体的正常工作，然而过量会导致威尔森氏症、Menkes综合征、帕金森氏症和肾病等疾病。 荧光法因其动态响应范围宽、成本低及易于操作等优点在测定重金属中得到广泛应用。二 价铜离子是d 9结构的顺磁性离子，对荧光具有极强的猝灭作用。已有的Cu 2+荧光探针通常 存在灵敏度低、空间分辨率低且易引起干扰等不足，在实际分析中的应用受到限制。因此， 开发高灵敏度和高选择性的Cu 2+荧光分子探针具有重要意义。
【发明内容】
[0003] 本发明是要解决现有Cu2+荧光探针存在灵敏度低、空间分辨率低且易引起干扰的 问题，而提供一种荧光探针的制备方法及应用。
[0004] 本发明一种荧光探针的制备方法是按以下步骤进行：
[0005] -、化合物A的制备：将焦脱镁叶绿酸-a甲酯溶解于四氢呋喃中，再向其中加入 质量分数为10%的NaOH溶液，然后在氮气保护下从室温加热至65°C回流5h?12h后， 自然冷却至室温而后，加入二氯甲烷分层，上层为水层，下层为二氯甲烷层，然后向水层中 滴加质量分数为2%的盐酸调至pH为5,然后采用二氯甲烷萃取3?5次，浓缩反应液， 采用溶剂重结晶，得到化合物A ;所述焦脱镁叶绿酸-a甲酯的质量与四氢呋喃的体积比为 Img: (0. 1?0. 5)mL ;所述焦脱镁叶绿酸-a甲酯的质量与质量分数为10%的NaOH溶液的 体积比为Img: (4?8)mL ;所述溶剂为二氯甲烷和正己烷的混合物；
[0006] 二、荧光探针的制备：将步骤一得到的化合物A溶于氯仿中，然后再加入醇胺，在 氮气的保护下室温搅拌24h后，浓缩反应液得到粘稠状剩余物，然后将粘稠状剩余物分散 到二氯甲烷中，采用去离子水洗涤3?5次，静置分层，上层为水层，下层为二氯甲烷层，下 层采用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到剩余物，剩余物采用硅胶柱层析分离，得到荧光探 针；所述化合物A的质量与氯仿的体积比为Img: (0. 1?0. 5)mL ;所述化合物A与醇胺的摩 尔比为1:1。
[0007] 本发明所述的荧光探针的制备方法通过如下反应过程实现：
[0008]
【权利要求】
1. 一种荧光探针的制备方法，其特征在于荧光探针的制备方法是按以下步骤进行： 一、 化合物A的制备：将焦脱镁叶绿酸-a甲酯溶解于四氢呋喃中，再向其中加入质量分 数为10%的NaOH溶液，然后在氮气保护下从室温加热至65°C回流5h?12h后，自然冷却 至室温而后，加入二氯甲烷分层，上层为水层，下层为二氯甲烷层，然后向水层中滴加质量 分数为2 %的盐酸调至pH为5,然后采用二氯甲烷萃取3?5次，浓缩反应液，采用溶剂重 结晶，得到化合物A ;所述焦脱镁叶绿酸-a甲酯的质量与四氢呋喃的体积比为lmg: (0. 1? 〇. 5)mL ;所述焦脱镁叶绿酸-a甲酯的质量与质量分数为10%的NaOH溶液的体积比为 lmg: (4?8)mL ;所述溶剂为二氯甲烷和正己烷的混合物； 二、 荧光探针的制备：将步骤一得到的化合物A溶于氯仿中，然后再加入醇胺，在氮气 的保护下室温搅拌24h后，浓缩反应液得到粘稠状剩余物，然后将粘稠状剩余物分散到二 氯甲烷中，采用去离子水洗涤3?5次，静置分层，上层为水层，下层为二氯甲烷层，下层采 用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到剩余物，剩余物采用硅胶柱层析分离，得到荧光探针；所 述化合物A的质量与氯仿的体积比为lmg: (0. 1?0. 5)mL ;所述化合物A与醇胺的摩尔比 为 1:1〇
2. 根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于步骤一中所述焦脱镁 叶绿酸-a甲酯的质量与四氢呋喃的体积比为lmg:0. 2mL。
3. 根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于步骤一中所述焦脱镁 叶绿酸-a甲酯的质量与四氢呋喃的体积比为lmg:0. 4mL。
4. 根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于步骤一中所述焦脱镁 叶绿酸-a甲酯的质量与质量分数为10%的NaOH溶液的体积比为lmg:5mL。
5. 根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于步骤一中所述溶剂为 二氯甲烷与正己烷按体积比1:8混合得到的混合物。
6. 根据权利要求1所述的一种荧光探针的制备方法，其特征在于步骤二中所述化合物 A的质量与氯仿的体积比为lmg:0. 23mL。
7. 如权利要求1所述的一种荧光探针的应用，其特征在于荧光探针作为探针用于检测 水中铜离子。
【文档编号】C09K11/06GK104496996SQ201410765730
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】金英学, 朱国华, 李文婷, 王志强 申请人:哈尔滨师范大学