本发明涉及一种微生物复合清防蜡剂的制备方法，属于清防蜡剂制备技术领域。
背景技术：
油井结蜡会影响正常生产，因此油井清防蜡也是采油中需要解决的问题。防蜡技术是往油井中投加添加剂来达到清防蜡的目的。防蜡机理：结蜡过程主要是晶体的生长过程，若能控制品核形成，就能阻断晶体长大，蜡晶最终不能形成。
目前油田上所用的清防蜡剂主要有油基清防蜡剂和水基清防蜡剂两大类。由于油基清防蜡剂闪点低易目前油田上所用的清防蜡剂主要有油基清防蜡剂和水基清防蜡剂两大类。由于油基清防蜡剂闪点低易燃，使用安全性低，防蜡效果差。而水基清防蜡剂使用安全但清蜡效果差，而且需在较高温度下使用。而常规的微生物法是一种利用微生物清防蜡剂进行油井清防蜡的技术。微生物清防蜡剂是由多种好氧及兼性厌氧菌组成的石油烃降解菌混合菌。这些混合菌是从高含蜡油井采出液中分离出来的，它们以原油中的蜡质成分为生长繁殖的唯一碳源。当将混合菌制剂注入到油井中时，混合菌将以原油中的蜡质组分为碳源进行新陈代谢，使长链烃转化为短链烃，并产生脂肪酸、糖脂、类脂体等多种生物表面活性剂，并改变金属或粘土矿物表面的润湿性，从而阻止蜡结晶的析出、长大和沉积。因此，菌剂的投加具有明显而长效的油井清防蜡效果。但对于高温（90℃以上）高盐（矿化度15％以上）的油井的结蜡问题，常规的微生物法不能有效解决，其清防蜡效果较差，远不能满足油田实际生产的要求。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对目前现有的微生物清防蜡剂应用于高温（90℃以上）高盐（矿化度15％以上）的油井时，清防蜡效果较差，不能满足油田实际生产的要求的问题，本发明首先将以咸鱼为原料，发酵得到嗜盐菌液，再以沼气液为原料，过滤后，将滤液置于自制的培养基中进行培养，得到嗜热菌菌种，接着将其与嗜盐菌液接种至自制的驯化培养基中进行重复培养，得到石蜡培养基混合菌落，对其进行培养，得到混合菌种，最后将其与石油磺酸钠等物质进行混合，即可得到微生物复合清防蜡剂，本发明制备的微生物复合清防蜡剂在高温（90℃以上）高盐（矿化度15％以上）的油井中，清防蜡效果较好，足够满足油田实际生产的要求。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）称取20～30g咸鱼加入到发酵罐中，再加入质量分数为15%氯化钠溶液将咸鱼浸没，并于35～45℃下发酵5～6天，发酵结束，收集发酵液并过滤，收集滤液，得到嗜盐菌液，备用；
（2）称取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、5～8g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合后转移至灭菌罐中，在100～105℃下灭菌5～10min，制得培养基，再取沼气液进行过滤，收集滤液，取100～200mL滤液加入到培养基中，并置于摇床中，在130～150r/min、80～85℃下培养2～3h，去除杂菌，再降温至70～75℃，培养2～3天，待培养结束，收集培养液并置于离心机中，在800～1000r/min下离心20～30min，收集下层菌种，得到嗜热菌菌种；
（3）分别称取10～15g牛肉膏、10～15g葡萄糖、20～30g石蜡和200～300mL去离子水搅拌混合2～3min，在100～110℃下灭菌处理5～10min，制得驯化培养基，选取15～20个驯化培养基，分别将步骤（1）备用的嗜盐菌液和上述制备的嗜热菌菌种接种至5个驯化培养基中，并置于摇床中，在40～50℃、120～140r/min下培养3～5天，对比5个驯化培养基中的菌落分布情况选取菌落生长茂盛的接种到另外5个驯化培养基上，控制其它条件不变，将葡萄糖的质量每次减少5g，石蜡增加5g，重复驯化培养至培养基中无葡萄糖后，制备得到石蜡培养基混合菌落；
（4）称取20～30g石蜡、10～15g玉米粉和500～600mL去离子水搅拌混合10～15min，制得混合培养基，按8～10%接种量将上述石蜡培养基混合菌落接种到混合培养基上，并置于培养箱中，在45～55℃下培养6～8天，待培养结束，置于离心机中，在800～1000r/min下离心20～30min，收集下层菌种，得到混合菌种；
（5）按重量份数计，称取20～30份上述混合菌种、10～20份石油磺酸钠、6～8份十八胺聚氧乙烯醚、30～40份异丁醇、8～12份腐殖酸和5～8份丙烯酸甲酯，搅拌混合10～15min，即可得到微生物复合清防蜡剂。
本发明的应用方法：将本发明制备的微生物复合清防蜡剂注入至高温（90℃以上）高盐（矿化度15％以上）的油井的油管和油套环形空间中，注入的量为管道有效管容的2/3，待注入结束后，关井浸泡反应4～6h，关闭原油进罐闸门，接好油管出口与套管出口管线，开井进行油套循环2h，即可正常使用了。经检测，其溶蜡速率高于127g/min·m2，防蜡率达到0.032g/min以上，清防蜡效果好。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的微生物复合清防蜡剂使用于高温（90℃以上）高盐（矿化度15％以上）的油井中时，清防蜡效果好，溶蜡速率高于127g/min·m2，防蜡率达到0.032g/min以上；
（2）本发明制备的微生物复合清防蜡剂不具有腐蚀性，不会腐蚀油管；
（3）本发明制备步骤简单，所需成本低。
具体实施方式
首先称取20～30g咸鱼加入到发酵罐中，再加入质量分数为15%氯化钠溶液将咸鱼浸没，并于35～45℃下发酵5～6天，发酵结束，收集发酵液并过滤，收集滤液，得到嗜盐菌液，备用；称取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、5～8g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合后转移至灭菌罐中，在100～105℃下灭菌5～10min，制得培养基，再取沼气液进行过滤，收集滤液，取100～200mL滤液加入到培养基中，并置于摇床中，在130～150r/min、80～85℃下培养2～3h，去除杂菌，再降温至70～75℃，培养2～3天，待培养结束，收集培养液并置于离心机中，在800～1000r/min下离心20～30min，收集下层菌种，得到嗜热菌菌种；再分别称取10～15g牛肉膏、10～15g葡萄糖、20～30g石蜡和200～300mL去离子水搅拌混合2～3min，在100～110℃下灭菌处理5～10min，制得驯化培养基，选取15～20个驯化培养基，分别将备用的嗜盐菌液和上述制备的嗜热菌菌种接种至5个驯化培养基中，并置于摇床中，在40～50℃、120～140r/min下培养3～5天，对比5个驯化培养基中的菌落分布情况选取菌落生长茂盛的接种到另外5个驯化培养基上，控制其它条件不变，将葡萄糖的质量每次减少5g，石蜡增加5g，重复驯化培养至培养基中无葡萄糖后，制备得到石蜡培养基混合菌落；称取20～30g石蜡、10～15g玉米粉和500～600mL去离子水搅拌混合10～15min，制得混合培养基，按8～10%接种量将上述石蜡培养基混合菌落接种到混合培养基上，并置于培养箱中，在45～55℃下培养6～8天，待培养结束，置于离心机中，在800～1000r/min下离心20～30min，收集下层菌种，得到混合菌种；按重量份数计，称取20～30份上述混合菌种、10～20份石油磺酸钠、6～8份十八胺聚氧乙烯醚、30～40份异丁醇、8～12份腐殖酸和5～8份丙烯酸甲酯，搅拌混合10～15min，即可得到微生物复合清防蜡剂。
实例1
首先称取30g咸鱼加入到发酵罐中，再加入质量分数为15%氯化钠溶液将咸鱼浸没，并于45℃下发酵6天，发酵结束，收集发酵液并过滤，收集滤液，得到嗜盐菌液，备用；称取30g葡萄糖、15g酵母膏、8g氯化钠和1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合后转移至灭菌罐中，在105℃下灭菌10min，制得培养基，再取沼气液进行过滤，收集滤液，取200mL滤液加入到培养基中，并置于摇床中，在150r/min、85℃下培养3h，去除杂菌，再降温至75℃，培养3天，待培养结束，收集培养液并置于离心机中，在1000r/min下离心30min，收集下层菌种，得到嗜热菌菌种；再分别称取15g牛肉膏、15g葡萄糖、30g石蜡和300mL去离子水搅拌混合3min，在110℃下灭菌处理10min，制得驯化培养基，选取20个驯化培养基，分别将备用的嗜盐菌液和上述制备的嗜热菌菌种接种至5个驯化培养基中，并置于摇床中，在50℃、140r/min下培养5天，对比5个驯化培养基中的菌落分布情况选取菌落生长茂盛的接种到另外5个驯化培养基上，控制其它条件不变，将葡萄糖的质量每次减少5g，石蜡增加5g，重复驯化培养至培养基中无葡萄糖后，制备得到石蜡培养基混合菌落；称取30g石蜡、15g玉米粉和600mL去离子水搅拌混合15min，制得混合培养基，按10%接种量将上述石蜡培养基混合菌落接种到混合培养基上，并置于培养箱中，在55℃下培养8天，待培养结束，置于离心机中，在1000r/min下离心30min，收集下层菌种，得到混合菌种；按重量份数计，称取30份上述混合菌种、20份石油磺酸钠、8份十八胺聚氧乙烯醚、40份异丁醇、12份腐殖酸和8份丙烯酸甲酯，搅拌混合15min，即可得到微生物复合清防蜡剂。
本发明的应用方法：将本发明制备的微生物复合清防蜡剂注入至高温（92℃）高盐（矿化度17％）的油井的油管和油套环形空间中，注入的量为管道有效管容的2/3，待注入结束后，关井浸泡反应6h，关闭原油进罐闸门，接好油管出口与套管出口管线，开井进行油套循环2h，即可正常使用了。经检测，其溶蜡速率为128g/min·m2，防蜡率达到0.035g/min，清防蜡效果好。
实例2
首先称取20g咸鱼加入到发酵罐中，再加入质量分数为15%氯化钠溶液将咸鱼浸没，并于35℃下发酵5天，发酵结束，收集发酵液并过滤，收集滤液，得到嗜盐菌液，备用；称取20g葡萄糖、10g酵母膏、5g氯化钠和800mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合后转移至灭菌罐中，在100℃下灭菌5min，制得培养基，再取沼气液进行过滤，收集滤液，取100mL滤液加入到培养基中，并置于摇床中，在130r/min、80℃下培养2h，去除杂菌，再降温至70℃，培养2天，待培养结束，收集培养液并置于离心机中，在800r/min下离心20min，收集下层菌种，得到嗜热菌菌种；再分别称取10g牛肉膏、10g葡萄糖、20g石蜡和200mL去离子水搅拌混合2min，在100℃下灭菌处理5min，制得驯化培养基，选取15个驯化培养基，分别将备用的嗜盐菌液和上述制备的嗜热菌菌种接种至5个驯化培养基中，并置于摇床中，在40℃、120r/min下培养3天，对比5个驯化培养基中的菌落分布情况选取菌落生长茂盛的接种到另外5个驯化培养基上，控制其它条件不变，将葡萄糖的质量每次减少5g，石蜡增加5g，重复驯化培养至培养基中无葡萄糖后，制备得到石蜡培养基混合菌落；称取20g石蜡、10g玉米粉和500mL去离子水搅拌混合10min，制得混合培养基，按8%接种量将上述石蜡培养基混合菌落接种到混合培养基上，并置于培养箱中，在45℃下培养6天，待培养结束，置于离心机中，在800r/min下离心20min，收集下层菌种，得到混合菌种；按重量份数计，称取20份上述混合菌种、10份石油磺酸钠、6份十八胺聚氧乙烯醚、30份异丁醇、8份腐殖酸和5份丙烯酸甲酯，搅拌混合10min，即可得到微生物复合清防蜡剂。
本发明的应用方法：将本发明制备的微生物复合清防蜡剂注入至高温（94℃）高盐（矿化度17％）的油井的油管和油套环形空间中，注入的量为管道有效管容的2/3，待注入结束后，关井浸泡反应6h，关闭原油进罐闸门，接好油管出口与套管出口管线，开井进行油套循环2h，即可正常使用了。经检测，其溶蜡速率为128g/min·m2，防蜡率达到0.034g/min，清防蜡效果好。
实例3
首先称取25g咸鱼加入到发酵罐中，再加入质量分数为15%氯化钠溶液将咸鱼浸没，并于37℃下发酵5天，发酵结束，收集发酵液并过滤，收集滤液，得到嗜盐菌液，备用；称取25g葡萄糖、12g酵母膏、7g氯化钠和900mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合后转移至灭菌罐中，在102℃下灭菌7min，制得培养基，再取沼气液进行过滤，收集滤液，取150mL滤液加入到培养基中，并置于摇床中，在140r/min、82℃下培养2h，去除杂菌，再降温至72℃，培养2天，待培养结束，收集培养液并置于离心机中，在900r/min下离心25min，收集下层菌种，得到嗜热菌菌种；再分别称取12g牛肉膏、12g葡萄糖、25g石蜡和250mL去离子水搅拌混合2min，在105℃下灭菌处理7min，制得驯化培养基，选取17个驯化培养基，分别将备用的嗜盐菌液和上述制备的嗜热菌菌种接种至5个驯化培养基中，并置于摇床中，在45℃、130r/min下培养4天，对比5个驯化培养基中的菌落分布情况选取菌落生长茂盛的接种到另外5个驯化培养基上，控制其它条件不变，将葡萄糖的质量每次减少5g，石蜡增加5g，重复驯化培养至培养基中无葡萄糖后，制备得到石蜡培养基混合菌落；称取25g石蜡、12g玉米粉和550mL去离子水搅拌混合12min，制得混合培养基，按9%接种量将上述石蜡培养基混合菌落接种到混合培养基上，并置于培养箱中，在50℃下培养7天，待培养结束，置于离心机中，在900r/min下离心25min，收集下层菌种，得到混合菌种；按重量份数计，称取25份上述混合菌种、15份石油磺酸钠、7份十八胺聚氧乙烯醚、35份异丁醇、10份腐殖酸和7份丙烯酸甲酯，搅拌混合12min，即可得到微生物复合清防蜡剂。
本发明的应用方法：将本发明制备的微生物复合清防蜡剂注入至高温（91℃）高盐（矿化度16％）的油井的油管和油套环形空间中，注入的量为管道有效管容的2/3，待注入结束后，关井浸泡反应5h，关闭原油进罐闸门，接好油管出口与套管出口管线，开井进行油套循环2h，即可正常使用了。经检测，其溶蜡速率为129g/min·m2，防蜡率达到0.034g/min，清防蜡效果好。