专利名称：残留农药的提取方法和提取试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及残留农药的提取方法和提取试剂盒。更详细地说，涉及能简便 单且有效地提取牲畜剛旨肪成分中的残留农药的方法、和用于其的提取试剂盒。
背景技术：
迄今为止，为了提高农产物的生产性而i顿各种农药。近年来，鹏越关
心食物中的残留物质，对食物中残留物质的测定也重,J^来。与:t)^应，在日 本，设定了关于食品(农产品、牲畜肉等)中残存的残留物质的标准(例如，
食安发第0124001号厚生劳动省医药食品局食品安全部 知附件"作为食品
中残留农药、饲料添加物或动物用医药品成分的物质的i微法"、对食品卫生法
等部^S行改正的法律(参照平成15萌去律第55号，平成15年5月30日公
布))。
然而，现有方法的目标是测定少数残留物质，不适于多数残留物质的测定。 作为农药，使用非常多种多样的药物，为了使测定简单化和ffii!， 一次测定多
种农药的方法的重要性提高。
尤其是在牲畜剛旨肪成分中残留农药的测定中，目前的提取方法提取步骤 繁杂，花费时间、駄、工序(约40个工序)，需魏更简单的方法和试剂盒。 更详细地说，首先，在提取脂肪后，从脂肪分离出农药，为了从分离的农药中 除去夹杂物，必须4OT GPC等高价机器，或ffl31固相提取柱进行清除，操作性 显著差。
如上戶脱，在现有残留农药的测定方法中，从牲畜剛旨肪成分提取残留农 药的工序非常长且烦杂，需要时间，存在测定上的问题。
因此，本发明A)^易的残留农药提取方法进行了研究，发现能简便且有 效地提取残留农药。
更具体地说，着眼于动物脂肪招ffi下凝固且由于比重小而浮在水上。具 体地说，发现在脂肪成分多的组织中加入冷水，在脂肪凝固的状态下，具体地
说，在冰冷下均化后，进行离心分离，获取凝固在离心管上部的脂肪组织，从 而能显著M^脂肪中的夹繊。
经跪样处理糊旨肪成分由于含有水分，因此脂肪难以在腊溶性蹄U中溶 解，因而在^顿脱水剂除去7jC分后，糊旨肪溶解在腊溶性溶剂中，从脂溶性溶 剂向亲水性歸忡转溶农药，进一步将该亲水性溶剂溶液l缩干固，溶鹏疏 水性翻lJ-亲水性蹄啲混合激忡，由此能简便地制 織少的残留农药测 定用检测液。
本发明基于该发现，掛共一种从牲畜剛旨肪成分简单且有效地提取残留农 药的方法和用于其的提取试剂盒。
发明内容
为了解决战课题而进行的本发明是包含下虹序的提取牲畜剛旨肪成分 中的残留农药的方法，
(1) 在水存在下，在脂肪凝固的状态下将牲畜剛旨肪成分均化后，分劇旨
肪的工序；
(2) 用胁JC剂对进行了战处理棚旨肪进行处理的工序；
(3) 将经过脱7jC处理柳旨肪溶鹏脂溶性辭忡后，向亲水性歸忡转溶 农药，然后$織该亲水性歸嗨液，得至贼留农药测定用检测液的工序。
作为上述脱水剂，tt4顿选自硅mi、 M筛、硅胶、^7K硫勝内、无 水硫勝疑嘀船乂性树脂中的1种或2种以上，特别^M顿硅針。
此外，在战(3)的工序中，^^将亲水性、歸赂液 1干固后，再溶解 在溶剂中，然后将该溶液用固相吸附剂处理，作为该固相吸附剂，1M使用选 自硅M^吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种 以上，特别tti^OT硅^l美类吸附剂。
此外，本发明的试剂盒是用于，提取方法的试剂盒，其^M少含有脱7jC 齐诉咽相吸附齐啲牲畜剛旨肪成分中残留农药的提取试剂盒。作为战脱7乂剂，
雌使用选自硅藻土、分子筛、硅胶、^/K硫酸钠、无水硫^l辩n高吸水性树
脂中的1种或2种以上，作为固相吸附剂，^^(顿选自硅mi美类吸附剂、离 子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
具体实施方式
本发明的方法是包含J^X序的残留农药的提取方法。在本发明的方法中，首先，在水存在下，在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂 肪试样均化。动物脂肪在低温下凝固，因此如果在该状态下均化，则可在不对 月旨肪产生影响的斜牛下使i辦中的^tl向水相转移，能降低夹杂物含量。更具体地说，相对于牲畜剛旨肪成力H辦，添加0.5 3重量倍， 0.8 2.0重量倍，MM2,0重量倍左右的冷水，然后在冰7賴口下均化。要说明的是， 只要是脂肪能维持凝固状态的温度，就不限定于冰冷却下， 一般优选0 15。C左 右的范围。,化时间没有特别限定，通常进行1 5併中左右，^iS行2 3倂中左右。在均化结束后，进行离心分离，静置，形成脂肪成分凝固在离心管,的 状态，因此，在排除水(水切^)后，得到脂肪。接着该得到柳旨肪駄脱水工序。在本发明的方法中，在下面的工序要将 脂肪溶解在脂溶性蹄忡，此附碟脂肪含有水分，则无法有效鹏行脂肪的 溶解和农药的提取，因此如上戶腿，糊旨肪胁K，降低含水量。作为脱水剂，惯用的脱水剂均可以使用，可以列举例如硅藻土、分子筛、 硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁、高吸水性树脂等，^ {顿硅藻土。这些脱 水剂还可以并用2种以上。该月^K剂糊顿量可以根据脂肪中的水始量、脱水剂的船K能力等进行 适当调整，通常，相对于脂肪为0.5 3倍量(重量比)左右，雌为1 1.5倍 量(重量比)左右。接着将战脱水的脂肪溶角被脂溶性凝忡。本说明书中戶刑胃棚皆溶性翻隄指能溶解脂肪的激IJ，作为劍g溶性歸U， 只要是能溶解脂肪的歸U，均可使用，但在本发明的方法中，由于在下面的工 序要将脂溶性溶齐嗨液中的农药转溶至亲水性溶剂中，因此im能与亲7jC性溶 剂分层的、MU。作为这种脂溶性，lj，可以例示例如正己烷、环己烷、硬脂酸 丁酯等。作为腊溶性激啲〗顿量，只要是能溶解脂肪的量即可，通常，相对于lg 月旨肪，{顿10 100ml左右、雌20 50ml左右、更雌30 40ml左右。
要说明的是，月旨肪在脂溶性 仲的溶解也可以在，脱水剂存在的状态 下进行。溶角裕该腊溶性颟U中柳旨肪接着与亲水性、凝嗨合，将农药转溶至亲水 性翻中。作为在该工序中使用的亲水性 1」，是能与腊溶性M盼层的MU，例如， 在使用正己烷作为脂溶性溶剂的情况下，可以列举乙腈、甲醇、二甲基亚砜(DMSO)。此外，同样，在作为脂溶性激M顿环己烷和硬脂酸丁酯的情况下， 作为亲7jC性蹄lJ，也可以f顿乙腈、甲醇、DMSO等。上述亲7jC性蹄啲j顿量只要是能从溶解在脂溶性辭忡柳旨肪转溶农药 的量，就没有特别限定，通常，以与腊溶性歸瞎本等量的翻IJ融行。接着将转溶了农药的亲7jC性激U溶液鄉，根据情况干固后，再溶鹏适 当的翻忡，制淑戋留农药测定用检测液。作为，再溶自剂，只要是溶解农药，不会对农药的仪器分l^成妨害 的、M!」，就可以使用任意的M!」，通常4柳疏冰性MlJ-亲水性溶剂的混合溶剂， 如果考虑蹄啲毒性、沸点、熔点、价格等，贝UttiM顿正己烷-丙酮混合激U。 要说明的是，对疏冰性辭l」-亲水性凝啲混合比没有特别柳艮定，通常4顿等 量的混合,l」。在该溶解工序后，{顿GC/MS等常用的仪器分析方法，进行残留农药的 分析、定量。要说明的是， 根据需要将，转溶了农药的亲水性 鹏液、劍每其 鄉干固再溶角裕输忡得至啲餘棚固相吸附剂处理，除去夹杂物。作为固相吸附剂，可以根据夹杂物的极性使用例如硅勝美类吸附剂(例如 硅,美载体(Florisil)、含活腺的合成硅勝美载体等)、离子交换体、M、氧 化铝、反相柱担体等。这些固相吸附剂可以并用2种以上。固相吸附齐啲〗顿量可以根据溶液中所含夹杂物的翻行适当调整，通常， 相对于溶液量，4顿10 50 (w/v) %左右， {顿20 35 (w/v) %左右。M31该操作，能显著降低溶液中色體夹雑的含量，因此在仪器分析时， 能使样品的前处理工序简化鹏观啶时^>噪音。另外，固相吸附剂与溶液的分离可以M31滤、离心分离等常用方法进行。根据本发明的方法，會^M^除去有机酸或其它夹繊的工作量，可以节约
时间(以提取+观啶时间计，从约9H到约2H)、费用、工微(从约40个工 JW^、至约23个工序)地获得没有噪音的观啶,。由此，在牲畜肉脂肪成分 的残留农药观啶中，与现有方法相比，育g简便地在短时间得到噪音少的l^。另外，本发明的方法和试剂盒并不限于牲畜剛旨肪成分中残留农药的提取， 还可以在例如黄油、奶酪等固i狩L制品中残留农药的提取中使用。本发明牲畜剛旨肪成分中残留农药的提取试剂錢在战提取方法中i顿 的试剂盒，至d^有脱7jC剂和固相吸附剂。作为Jl^脱水剂和固相吸附抓可以列举战例示的物质。此外，在本发明的试剂盒中，作为其它构成要素，可以含有上述脂溶性溶 剂、亲水性歸U、残留农药测定用凝嘮。作为残留农药测定用蹄U， ^^7jC性蹄U-亲7jC性凝啲混合蹄U，更优 选亍OT正己烷-丙酮混合旨IJ。作为本发明试剂盒的iM方法，只要根据战本发明的提取方谢顿即可。作为本发明，的牲畜肉脂肪成分，只要是需要测定残留农药的牲畜肉类， 就没有特另啲限定，可以列稱列如猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉、兔肉等。作为提W"象的农药，只要是在农业领域中使用的农药就没有限定。特别 适合于腊溶性农药。产业实用性根据本发明的方法，由于^7jC的存在下，在牲畜肉脂肪成分凝固的状态下 将其均匀化，因此可在不对脂肪成分产生影响的条件下除去试样中的夹杂物， 无需柱纯化等复杂工序就可制备出残留农药测定用检测液。因此，根据本发明 的方法，具有能使提取操作显著简化的特另嗷果。实施例以下，基于比较例和实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明并不限 于这些实施例。另外，在各例中，括号中的数字転工序的步骤数。 比较例l (现有方法)由猪腿肉(块)取出200g脂肪成分多的部位(1)，用绞肉机切碎(2)。在 匀化器杯(水乇、^于^寸'一力7 7。)中称量取出20g (3)，添加20ml水(4)，
在10000转下均化3併中(5)。彌加丙酮'正己烷混合液(1: 2) lOOml，翻 10000转下均化3 ^H中(6)。将匀化物转移至离心管(7)，在2500转下离心5 併中(8)。将上清 分液漏斗中(9)后，，留物转移至匀化器杯中(10)， 添加50ml正己烷(11)，在10000转下均化3^H中(12)。将匀化物转移至离心 管(13)，在2500转下离心5倂中(14)。将上清加入已经加入了先前的上清的 分液漏斗中(15)，添加50g^7jC硫M (16)，振荡I^7K5併中(17)。过滤溶 液，将滤液輕300ml的梨型娜中(18)。在35。C的離^f牛下鹏繊(19)。 在要干固前停止舰泉缩，在氮气气流下干固，得到脂肪(20)。称量lg月旨肪 (21)，溶角祐丙酮环己烷混合液(l: 4)中(22)，定容为10ml得至腿取液(23)。 将提取 移至离心管(24)，在3000转下离心5么H中(25)，将所得上清中的 5ml注入以丙酮环己烷混合液(1: 4)稳定化(26)的GPC柱(27)，用丙酮邻 己烷混合液(1: 4)进衍先脱(28)，取含有农药的流份(29)。将所取的洗脱 液在35"的 驢割牛下自 (30)。在要干固前停止MiB^，在氮气气流 中干固(31)，然后>|繊留物溶角祐丙酮'正己烷混合液(1: 1) 2ml中(32)。 加入以丙酮亚己烷混合液(1: 1)进fiH周节(33)的PSA固相提取柱(3ml， 500mg)中(34)， aA丙酮'正己烷混合液(1: 1) 18ml，分取洗脱液(35)。 在35。C的M^劍牛下MJBM (36)，在要干固前停止MJBW，在氮气气流下 干固(37)，然后))繊留物溶鹏lml丙酮'正己烷混合液(1: 1)中(38)，转 移至i辦瓶中(39)，供于GC/MS分析(40)。实施例1 (本发明方法)由猪腿肉(块)取出200g脂肪成分多的部位(1)，用绞肉机切碎(2)。在 匀化器杯中称量取出20g (3)，添加30ml冷7K (4)，在冰7賴卩下，在10000转 下均化3射中(5)。将匀化,移至离心管(6)，在4。C， 5000xg下离心10分 钟(7)。从离心管的边缘除水的同时取出在离心管上部凝固的脂肪(8)。称量 lg月旨肪(9)，加入lg硅^i (10)，然后加入40ml正己烷溶解脂肪(11)，转 移至分液漏斗(12)。加入40ml乙腈(13)，振荡15併中(14)，取出乙腈层(15)， 在35。C下Mffi干固(16)。溶鹏正己烷'丙酮混合液(4: 1) lml中(17)，转 移至1.5ml离心管(Eppendorftube)(18)，加入0.3g硅Mf美载体(19)，搅拌(20)。 在4。C、 10000转下离心5射巾(21)。将上清^Mi^f瓶(22)，供于GC/MS
分析(23)。战现有方法和本发明方法的工微以及实施方法所需时间(提取+测定时间)如下现有方法 40个工序 540併中本发明方法 23个工序 120倂中实施例2在Jd^现有方法和本发明方法中，进行在lg月旨肪成分中添加0.2昭各种农 药时的回收i微。在表l中示出其微结果(回收率％)。另外，在表中的农 药中，进口食用肉中必须检査的农药是p，P"DDT、狄氏剂和七氯3种。由下表1的结果可知，本发明的方法回收率高，认为根据本发明的方法， 能有效地提取各种残留农药。
表1在lg月旨肪中，添加相当于0.2吗量农药时的回收率腊溶性农药农药名称现有方法本发明方法p,p-DDT71.382.7狄氏剂76.181.7七氯73.283.3叶蝉散73.183.8仲丁威76.580.3灭线磷75.480.7氯苯胺灵76.788.2嗯虫威75.378.7a-BHC73.177.8特丁磷68.871.1r-BHC76.788.0二嗪磷68.570.8乙嘧硫磷78.780.1七氟菊酯74.378.7抗蚜威76.779.7b-BHC87.488.7呋草磺83.487.7d-BHC85.388.2甲基立枯磷74.378.1甲基对硫磷83.187.3甲萘威72.780.2甲基嘧啶磷70.671.8禾草畏70.280.3杀螟硫磷83.387.7马拉硫磷80.282.3异丙甲草胺65.471.1杀草丹66.670.7毒死蜱68.872.8倍硫磷71.273.8甲基毒虫畏80.183.1乙霉威79.987.3氧异柳磷67.288.1对硫磷80.383.8三氯杀螨醇(DEG)70.583.7噻唑磷68.871.8毒虫畏67.888.1艾氏剂69.780.3异丙胺磷74.588.9二甲戊乐灵78.781.7啶斑肟z70.270.4稻丰散76.583.8喹硫磷74.38U啶斑月亏E71.273.1丙草胺68.971.3氟酰胺72.177.1p,p-DDE72.381.8氟硅唑65.472.8腈菌唑69.871.9环唑醇73.277.8乙酯杀螨醇78.883.7线虫磷68.873.3p，p-DDD78.888.3灭锈胺76.679.4克瘟散70.571.8丙环唑170.170.2丙环唑287.187.3环草定68.470.2欣克草81.283.4戊唑醇84.387.7EPN65.470.8异菌脲67.478.8吡螨胺68.771.3蚊蝇醚67.577.2赛洛宁72.381.7伏杀硫磷62.372.9苯噻草胺80.387.8氟丙菊酯76.581.1氯苯嘧啶醇75.478.2吡唑硫磷68.972.7氯菊酯58.870.7哒螨酮67.571.7氟氯氰菊酯78.681.3氯氰菊酯77.581.0氟氰戊菊酯74.578.7氰戊菊酯78.381.0氟胺氰菊酯73.377.9溴氰菊酯73.278.2异狄氏剂76.580.8灭梭威68.870.1硫线磷66.571.2三唑醇78.480.8多效唑78.981.1o,p陽DDT75.480.7七氯环氧化物B77.680.1七氯环氧化物A78.982.3硫丹P78.582.3硫丹a76.481.权利要求
1、提取牲畜肉脂肪成分中的残留农药的方法，其包含下述工序(1)在水存在下，在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪成分均化后，分离脂肪的工序；(2)用脱水剂对进行了上述处理的脂肪进行处理的工序；(3)将经过脱水处理的脂肪溶解在脂溶性溶剂中后，向亲水性溶剂中转溶农药，然后浓缩该亲水性溶剂溶液，得到残留农药测定用检测液的工序。
2、 权利要求1戶，的提取方法，期寺征在于，，脱水剂皿自硅fc、 好筛、硅胶、^7jC硫,、^7jC硫^^和高B及水性树脂中的l种或2种以上。
3、 权利要求1或2臓的提取方法，欺寺征在于，在权利要求1臓方法 的(3)的工序中，包含将亲水性翻溶液鄉干固后，再溶角裕翻忡，然后 将该激OT固相吸附剂处理的工序。
4、 权利要求3戶/M的提取方法，其特征在于，固相吸附剂皿自硅勝幾 吸附剂、离子交换体、 、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
5、 权利要求4戶舰的提取方法，其特征在于，硅膨錢吸附剂是硅膨鐡 体或含活性炭的硅勝美载体。
6、 牲畜剛旨肪成分中的残留农药的提取试剂盒，其特征在于至少含有船K 剂和固相吸附剂。
7、 权利要求6戶腿的提取试剂盒，其中，船K剂魏自硅^:、好筛、 、无水硫酸钠、无水硫,和高吸水性树脂中的1种或2种以上。
8、 权利要求6或7戶脱的提取试剂盒，欺寺征在于，固相吸附剂魏自硅 ^f美类吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
全文摘要
本发明涉及牲畜肉脂肪成分中的残留农药的提取方法和用于其的提取试剂盒。本发明残留农药的提取方法包含如下工序(1)在水存在下，在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪成分均化后，分离脂肪的工序；(2)用脱水剂对进行了上述处理的脂肪进行处理的工序；(3)将经过脱水处理的脂肪溶解在脂溶性溶剂中后，向亲水性溶剂中转溶农药，然后浓缩该亲水性溶剂溶液，获得残留农药测定用检测液的工序。此外，本发明的试剂盒是用于该方法的试剂盒。根据本发明的方法和试剂盒，具有能实现操作的简便化和降低有机酸等夹杂物提取量的效果。
文档编号G01N31/12GK101213446SQ20068002125
公开日2008年7月2日 申请日期2006年4月24日 优先权日2005年4月25日
发明者北山雅彦, 大森丘, 小园正树 申请人:日本肉类批发商株式会社