专利名称：烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法
烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法技术领域
本发明属于农药残留的理化检测技术领域，具体涉及一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法。
背景技术：
苦参碱是一种从苦参植株中提取出的生物碱，它作为一种天然植物源农药，具有植物源农药低毒、高效的特点。烟草中使用该农药的量不断加大，以防治烟草中的蚜虫、烟蓟马、烟粉虱等害虫。但是，高剂量的苦参碱对小白鼠具较强的神经急性毒性，且还具有一定的遗传毒性。因此，苦参碱在烟草中的大量使用必将存在一定的安全隐患，进而影响到烟草的质量安全。现有技术中，对苦参碱的前处理方法常常采用碱性溶液将苦参碱转化为分子形态，再用三氯甲烷等有机溶剂进行萃取或直接用极性较大的乙醇、乙腈进行提取，再对提取液进行一定的净化，上述二种方法提取的色素等杂质较多，需要较为复杂的净化步骤。 此外，二种方法都要使用较多量的毒性较大的有机溶剂，这些缺点都不符合对苦参碱的常规残留检测要求，本发明提供了一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，具有良好的检测效果。发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用乙酸水溶液提取，强阳离子交换固相萃取柱净化后用气相色谱-氮化学发光检测器，直接测定烟叶中苦参碱农药残留量的方法，以克服现有的方法前处理复杂和要使用毒性较大的有机溶剂的缺点，本方法还具有快速、准确且干扰较少的优点。
本发明的技术方案本发明的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，包括以下步骤(1)称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；(2)滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化；(3)用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量的方法。
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的乙酸水溶液的pH为 3. 0 4· 0。
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的水相滤膜的孔径为0.45 μ m0
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化为先用HCl调节滤液的pH至1. 5^2. 5，依次用甲醇、水预淋洗活化Bond Elut-SCX柱，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，弃去淋出液并将Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于试管中，氮气吹干，用甲醇溶解分析物，过0.45 μ m微孔有机滤膜， 将其转移至微量玻璃平底内插管，待进样。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的氨水甲醇混合溶液其组成体积比为氨水甲醇=5:95。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述气相色谱的检测器为氮化学发光检测器。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述气相色谱的分析条件为 气相色谱为=Agilent 7890A气相色谱，氮化学发光检测器为Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱石英毛细管柱DB-17 ；He为载气，流量为1 mL/min ；进样口温度250 C ； 基座温度250 C ；进样模式不分流进样量2 ？ L ；程序升温初温110 C，保持1 min， 以8 C/min升至230 C,保持5 min,以10 C/min升至260 C,保持4 min ；检测器氢气流量4. 0 mL/min ；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ？ C，采集数据频率为20Hz。
本发明达到的有益效果 (1)环保及前处理简单相对于现有技术中使用较多量的毒性较大的有机溶剂，且前处理复杂，本发明采用用乙酸水溶液提取，滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化，具有环保及前处理简单的优点。
(2)检测限低，线性关系好将不同浓度的苦参碱农药标准工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)计算检测限(LOD)，检测限为 0. 03 mg/kg ；将浓度梯度为 0. 15 ug/mL，0. 3 ug/mL，0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归，苦参碱的的回归方程为 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明线性关系较好。
(3)回收率高，精密度好苦参碱在新鲜烟叶中的回收率在89. 5%-91. 6%之间，变异系数(CV)为2. 73%_3. 62%，说明该方法回收率高，精密度好。
具体实施方式
实施例1(1)准确称取研磨的鲜烟叶2g于50 mL塑料离心管中，加入15 mL pH=3. 5的乙酸水溶液，将样品涡旋30 s后振荡提取30 min, 4000 rpm离心后取上层清液，再用8 mL乙酸水溶液洗涤2次，合并滤液过0. 45 μ m水相滤膜，待净化；(2)先用0.5 mol/L的HCl调节滤液至pH=2，依次用甲醇、水各5 mL预淋洗活化Bond Elut-SCX，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用5 mLO. 5 mol/L的HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用0.5 mol/L的HC1、甲醇各5 mL淋洗萃取柱，弃去淋出液并将小柱抽干，用 10 mL氨水甲醇(5:95，V/V)溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于20 mL玻璃试管中，45 ？ C 下氮气吹干，用0. 5 mL甲醇溶解分析物，过0. 45 μ m微孔有机滤膜，将其转移至250 μ L微量玻璃平底内插管，待进样；(3)GC-NCD由Agilent 7890A气相色谱和Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱石英毛细管柱DB-17(30 mXO. 25 mmXO. 25 ？ m) ；He为载气，流量为1 mL/min ；进样口温度250 C;基座温度250 C;进样模式不分流进样量2 ？ L ；程序升温初温 110 C，保持 1 min，以 8 C/min 升至 230 C，保持 5 min,以 10 C/min 升至 260 C，保持4 min ；检测器氢气流量4. 0 mL/min ；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ？ C，采集数据频率为20Hz。
实施例2苦参碱标准物质用甲醇配制浓度为2 mg/mL的储存标准溶液。工作标准溶液用甲醇把储存标准溶液稀释为相应的浓度，即配制成不同浓度的苦参碱标准溶液，标准序列为0. 15 ug/mL,0. 3 ug/mL,0. 9 ug/mL,1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL。
将不同浓度的苦参碱农药标准工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)计算检测限(LOD)，检测限为0. 03 mg/kg将浓度梯度为 0. 15 ug/mL, 0. 3 ug/mL, 0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归，苦参碱的的回归方程为 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明线性关系较好。
实施例3在新鲜烟叶中加入三个浓度梯度的苦参碱标准溶液，放入0 ？ C左右冰箱中静置过夜， 然后进行前处理，再用GC-NCD检测分析。并按照添加量和测定值计算其添加回收率。结果见表1，从表1可以看出，按照0. 05 mg/kg, 0. 2 mg/kg, 0. 4 mg/kg进行添加时，苦参碱在新鲜烟叶中的回收率在89. 5%-91. 6%之间，变异系数(CV)为2. 73%_3. 62%，说明该方法回收率高，精密度较好。表1苦参碱在烟萆中的添加回收率
权利要求
1.一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于包括以下步骤(1)称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；(2)滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化；(3)用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量。
2.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述的乙酸水溶液的PH为3. 0 4.0。
3.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述的水相滤膜的孔径为0.45 μπι。
4.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述的滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化为先用HCl调节滤液的ρΗ至1. 5^2. 5，依次用甲醇、 水预淋洗活化Bond Elut-SCX柱，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，弃去淋出液并将Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于试管中，氮气吹干，用甲醇溶解分析物，过0. 45 μ m微孔有机滤膜，将其转移至微量玻璃平底内插管，待进样。
5.根据权利要求4所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述的氨水甲醇混合溶液其组成体积比为氨水甲醇=5:95。
6.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述气相色谱的检测器为氮化学发光检测器。
7.根据权利要求1或6所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于所述气相色谱的分析条件为气相色谱为=Agilent 7890A气相色谱，氮化学发光检测器为 Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱石英毛细管柱DB-17;He为载气，流量为1 mL/min;进样口温度250 C;基座温度250 C;进样模式不分流进样量2 ？ L ；程序升温初温110 C，保持1 min，以8 C/min升至230 C，保持5 min,以10 C/min升至 260 C，保持4 min;检测器氢气流量4.0 mL/min ；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ？ C，采集数据频率为20Hz。
全文摘要
本发明公开了一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，包括以下步骤称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化，用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量的方法，本发明的方法具有前处理简单和避免使用了毒性较大的有机溶剂，本方法还具有快速、准确且干扰较少的优点。
文档编号G01N30/88GK102520107SQ20121000619
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月9日 优先权日2012年1月9日
发明者向章敏, 周淑平, 张婕, 耿召良, 蔡凯, 陈兴江 申请人:贵州省烟草科学研究所