专利名称：一种富集纯化苦参中苦参碱的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种苦参碱的纯化方法，特别是涉及一种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法。
背景技术：
苦参为多年生落叶亚灌木植物苦参的根，含多种生物碱及多种黄酮类化合物，生物碱中以苦参碱(Matrine)、氧化苦参碱(Oxymatrine)为主，尚有异苦参碱(Isomatrine)、槐果喊(Sophocarpine)、异槐果喊(Isosopho-carpine)、槐胺喊(Sophoramine)、氧化槐果碱(Noxysophocarpine),微量的d_槐醇碱(d-Sophoranole)、1-臭豆碱(1-Anagyrine) >1-甲基金雀花碱(Ι-Methylcytisine)、赝靛叶碱(Bapt1-foline)、1-槐根喊(1-Sophocarpine)等，黄酮类化合物中有苦醇C (kushenol C)、苦醇G (KushenolG)、异苦参酮(Isokurarinone)、苦参醇(Kurannol)、新苦参醇(Neokurannol)、降苦参醇(Norkurannol)、芒柄花黄素(Formononetin)、苦参卩定醇(Kuraridinol)、苦参素(Kurarinone)、次苦参素(Kur andin)等,对心脏有明显的抑制作用，可抗心率失常，并降低血压，具有抗病原微生物，平喘祛痰，升白细胞等作用。苦参碱是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注经科学研究及临床应用证明，苦参碱具有抗肿瘤、升白细胞、平喘祛痰、镇痛、抗过敏及免疫抑制作用。近年来，人们发现天然植物苦参中含有大量的苦参碱，从中提取苦参碱并且取得了可喜进展，由于其原料苦参为中药，原料来源较广。名称为“从苦参中提取苦参碱的方法”的专利申请中便公开了将苦参经溶剂萃取法优化提取苦参碱工艺流程。上述专利文献中的苦参碱提取工艺主要是经过溶剂萃取，吸附树脂柱进行纯化等工艺步骤提取而成，其分离效果远远不如高速逆流色谱分离法的分离效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法。其步骤如下(I)将干苦参粉碎，用浓度为70%的丙酮溶液进行超声波提取，提取温度为50 60°C，提取频率80 100Hz，提取时间I 2小时，提取3次；(2)将(I)处理的苦参提取液过滤，合并三次提取液，蒸去丙酮后，得初提物；(3)苦参碱的初步纯化将初提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含苦参碱的组分，蒸干溶剂；(4)苦参的精制再将(3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度98%以上的苦参碱纯品高速逆流色谱法对苦参进行初步纯化，可选用的溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相，下相为流动相，流动相的流速为2.0ml/min。一号溶剂体系由三个组分构成，Al组分可选用乙酸乙酯、乙酸内酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪脂类组分可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇；C1组分为水；优选乙酸乙酯-叔丁醇-水体系，Al、B1、Cl体积比为O. 5-2 2-10 2-10。二号溶剂体系由四个组分构成，A2组分可选用乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等酯肪脂类；B2、C2组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮；D2组分为水；优选乙酸乙酯叔丁醇-丙酮-水体系32、82、02、02体积比为0.5-5 10-100 O. 5-5 10-100。 号溶剂体系由两个组分构成，A3组分可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇；B3组分为水；优选叔丁醇-水体系，A3、B3体积比为1-100 : 1-100。高速逆流色谱分离法对苦参碱精制溶剂体系主要有二个。均以上相为固定相，下相为流动相，流动相的流速为2.0ml/min。四号溶剂体系由二个组分构成，A4组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B4组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮；C4组分为水，优选二氯甲烷-乙醇-水体系；A4、B4、C4体积比为2-10 2-15 1-10。五号溶剂体系由四个组分构成，A5组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B5、C5组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮；D5组分为水；优选氯仿-异丙醇-甲醇-水体系，A5、B5、C5、D5体积比为1-10 O. 5-5 1-10 0.5-10。六号溶剂体系由五个组分构成，A6、C6组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B6、D6组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮；E6组分为水；优选二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水体系，六6、86、06、0636体积比为0.5-2 O. 5-2 1-10 2-10 1-1O0所述步骤(I)中，苦参粉碎后过60 80目筛。所述步骤(I)中，加入乙醇的体积为粉碎体积的6 8倍。实验适用于室温为15_30°C下进行。用本法制备 的苦参碱纯度可达到98%以上。本法适用于以各种含苦参碱的天然植物，天然植物的提取物为原料制备高纯度的苦参碱。适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备苦参碱，利用超声波提取苦参碱具有提取完全，操作简单，节省时间；在利用高速逆流色谱法制备苦参碱可连续、高效、快速的液液分配色谱分离，具有分离量人、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点
具体实施例方式实施案例1:一种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法，其步骤如下(I)将IOOg干苦参粉碎后过60目筛，用浓度为70%的丙酮溶液进行超声波提取，料液比为粉碎体积的6倍，提取温度为50°C，提取频率80Hz，提取时间I小时，提取3次；(2)将(I)处理的苦参提取液过滤，合并三次提取液，蒸去丙酮后，得初提物；(3)苦参碱的初步纯化将初提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含苦参碱的组分，蒸溶剂；(4)苦参的精制再将(3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度在98. 2%的苦参碱纯品；
采用乙酸乙酯-叔丁醇-水和氯仿-异丙醇-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高丁 98%的苦参碱；使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱的容积为2-10ml，8823A-UV紫外检测器Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分苦参碱的制备分两步进行(I)将体积比为1: 3 5的乙酸乙酯-叔丁醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相用I I的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物IOOmg进行分离，收集含苦参碱的组分，蒸干⑵将体积比为5 0.5 5 4的氯仿-异丙醇-甲醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用I I的上相和下相混合液2ml溶解(I)所得样品进行分离，收集含苦参碱的组分峰，冷冻干燥。得白色苦参碱固体，经HPLC分析，其纯度达到98. 2%。实施案例2 :—种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法，其步骤如下(1)将100g干苦参粉碎后过70目筛，用浓度为70%的丙酮溶液进行超声波提取，料液比为粉碎体积的7倍，提取温度为55°C，提取频率90Hz，提取时间1. 5小时，提取3次；(2)将(1)处理的苦参提取液过滤，合并三次提取液，蒸去丙酮后，得初提物；(3)苦参碱的初步纯化将初提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含苦参碱的组分，蒸溶剂；(4)苦参的精制再将(3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度在98. 33%的苦参碱纯品；采用乙酸乙酯-叔丁醇-丙酮-水和二氯甲烷-乙醇-水两溶剂体系制备纯度高于98%的苦参碱使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱的容积为210ml,8823A-UV紫外检测器Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. 0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分。苦参碱的制备分两步进行(1)将体积比为5 50 1 60的乙酸乙酯-叔丁醇丙酮-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1:1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物200mg进行分离，收集含苦参碱的组分，蒸干。(2)将体积比为8 15 8的二氯甲烷-乙醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1 1的上相和下相混合液2ml溶解(1)所得样品进行分离，收集含苦参碱的组分峰，冷冻干燥。得白色苦参碱固体，经HPLC分析，其纯度达到98. 33%上。实施案例3 :—种利用超声波提取-高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法，其步骤如下(I)将IOOg干苦参粉碎后过80目筛，用浓度为70%的丙酮溶液进行超声波提取，料液比为粉碎体积的8倍，提取温度为60°C，提取频率100Hz，提取时间2小时，提取3次；(2)将(I)处理的苦参提取液过滤，合并三次提取液，蒸去丙酮后，得初提物；(3)苦参碱的初步纯化将初提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含苦参碱的组分，蒸干溶剂；(4)苦参的精制再将(3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度为98. 12%的苦参碱纯品；采用叔丁醇-水和二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于98%的苦参碱使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱的容积为210ml，8823A UV紫外检测器Yokogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分。苦参碱的制备分两步进行(I)将体积比为13 55的叔丁醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1:1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物150mg进行分离，收集苦参碱的组分，蒸干。(2)将体积比为1:1:5:8: 6的二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1:1的上相和下相混合液2ml溶解(I)所得样品进行分离，收集含苦参碱的组分峰，冷冻干燥。得白色苦参碱固体，经HPLC分析`，其纯度达到98. 12%。
权利要求
1.一种利用超声波提取一高速逆流色谱法富集纯化苦参中苦参碱的方法，其步骤如下 (1)将干苦参粉碎，用浓度为70%的丙酮溶液进行超声波提取，提取温度为50 60°C，提取频率80 100Hz，提取时间I 2小时，提取3次； (2)将(I)处理的苦参提取液过滤，合并三次提取液，蒸去丙酮后，得初提物； (3)苦参碱的初步纯化将初提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含苦参碱的组分，蒸干溶剂； (4)苦参的精制再将(3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度98%以上的苦参碱纯品； 所述步骤(3)和(4)中，高速逆流色谱分离法对苦参碱初步分离和精制过程中，均以上相为固定相，下相为流动相，流动相的流速为2. Oml/min。
2.根据权利要求1所述的一种利用超声波提取-高速逆流色谱法富集纯化苦参中苦参碱的方法，其特征是所述步骤(I)中，苦参粉碎后过60 80目筛。
3.根据权利要求2所述的一种利用超声波提取-高速逆流色谱法富集纯化苦参中苦参碱的方法，其特征是所述步骤(I)中，料液比为粉碎体积的6 8倍。
4.根据权利要求3所述的一种利用超声波提取-高速逆流色谱法富集纯化苦参中苦参碱的方法，其特征是用高速逆流色谱分离法对苦参碱进行初步纯化，可选的溶剂体系由二个体系构成，一号溶剂体系优先乙酸乙酯-叔丁醇-水体系，体积比为0.5-2 2-10 2-10。二号溶剂体系优选乙酸乙酯-叔丁醇内酮水体系，体积比为0.5-5 10-100 0. 5-5 10-100。二号溶剂体系优选叔丁醇-水体系，体积比为I 100 1-100。
5.根据权利要求4所述的一种利用超声波提取-高速逆流色谱法富集纯化苦参中苦参碱的方法，其特征是用高速逆流色谱分离法对苦参碱精制溶剂体系由三个组分构成，四号溶剂体系优选二氯甲烷-乙醇-水体系，体积比为2-10 2-15 1-10。五号溶剂体系优选氯仿-异丙醇-甲醇-水体系，体积比为4-10 0. 55 1-10 0. 5-10。六号溶剂体系优选~■氣甲烧-异丙醇_氣仿-甲醇-水体系，体积比为05-2 : 0.5-2 : 1~10 : 2~10 : 1-10。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种苦参碱的纯化方法，特别是涉及一种利用超声波提取一高速逆流色谱分离法富集纯化苦参中苦参碱的制备方法。本发明优点是1、采用超声波提取苦参碱具有提取完全，操作简单，节省时间的优点；2、利用高速逆流色谱分离法从天然植物苦参浸提液经过两次纯化得到98％纯度的苦参碱。本法适用于以各种含苦参碱的天然植物，天然植物的提取物为原料制备高纯度的苦参碱。适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备苦参碱，用高速逆流色谱法制备苦参碱可连续、高效、快速的液液分配色谱分离，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
文档编号C07D471/22GK103044424SQ20121059562
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者姚德坤, 万莉, 张亚红, 姚德利 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司