高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条的制作方法
【专利摘要】一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于：所述的微孔试剂(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的硫酸雌酮结合物，所述的微孔试剂(8)内设有硫酸雌酮单克隆抗体层(8-1)。本实用新型准确性高、操作简单、早期发现猪受孕情况，适合于大规模推广应用。
【专利说明】高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物检测领域，具体为一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条。
【背景技术】
[0002]随着集约化养猪业的发展，母猪早期妊娠诊断对提高母猪繁殖率和养猪场经济效益的作用越来越明显。对母猪妊娠做出及时而准确的判断，可以减少空怀，并对空怀的母猪进行补配，从而减少因无效饲养增加的饲料成本。传统的母猪早期妊娠诊断方法主要有兽医诊断观察法、尿液激素检测法、激素反应观察法和超声诊断等方法。其中兽医诊断观察法主要依赖于兽医和有经验的生产人员观察配种或者人工授精后母猪的发情情况，确定其是否受孕，对人员要求较高，一般基层工作人员难以掌握，并且返情母猪可能不一定是妊娠，会受到诸多因素诸如激素分泌紊乱、子宫疾病等因素影响；尿液激素检测法主要是靠放射免疫或者酶联免疫法测定样品中的硫酸雌酮含量，其准确性高，但操作繁琐，还需要配置相应检测仪器，成本较高，一般养殖场难以承担，另外也无法做到现场检测，现场判定；超声检测法依赖于超声波检测设备，其检测结果准确，不仅可以判断怀孕，还能检测出确定胎儿的数目，晚期测定时还可以判定胎儿性别，但其成本多大数万元，一次性投入成本较高，小型生产企业或者个体养殖户多数不愿采购。结合我国当前养猪业的实际情况，为了解决母猪早期妊娠诊断的问题，有必要开发出一种低成本、检测准确、且能现场检测的快速检测装置，满足基层单位的检测需求。
[0003]硫酸雌酮(Estixme sulfate)是一种留体激素类雌激素，具有环戊烷并多氢菲母核。孕马，怀孕母猪等体内均有此类激素。怀孕母猪妊娠第12天开始产生雌激素，主要是雌酮，并在胎儿体内转换为结合状态的硫酸雌酮，继而进入母体血液循环。根据国外研究结果，早在妊娠第16天时母猪血浆中的硫酸雌酮含量开始升高，并在25?30天达到峰值(3ng/ml),而后又在35天时降低到lng/ml以下，并维持此水平到妊娠第60天是继续升高；相比之下，未妊娠母猪血浆中的硫酸雌酮则一直维持在较低水平，因此，母猪血浆或者尿液等中的硫酸雌酮含量可以作为早孕诊断的标识，并且硫酸雌酮含量越高，母猪怀仔数会越高。
【发明内容】
[0004]本申请的目的在于提供一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，以解决养猪生产中母猪孕情现场检测的问题。
[0005]为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0006]一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜
(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的硫酸雌酮结合物，所述的微孔试剂⑶内设有硫酸雌酮单克隆抗体层(8-1)。[0007]进一步，8个微孔试剂⑶通过胶体相互粘贴组成一排。
[0008]进一步，所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)。
[0009]进一步，所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)。
[0010]进一步，所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm。
[0011]进一步，所述的微孔试剂⑶和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8°C温度下。
[0012]本实用新型专利可以通过检测猪受精之后23天排出的尿液而判断猪受孕情况的要求，具有准确性高、操作简单、早期发现猪受孕情况、提高母猪生育效率、提高经济收入等特点，适合于大规模推广应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1本实用新型的试纸条(9)结构平面俯视图
[0014]图2本实用新型的试纸条(9)结构剖面示意图
[0015]图3本实用新型的微孔试剂⑶示意图
[0016]图4是微孔试剂⑶成排的示意图
[0017]图5本实用新型的检测结果判定示意图
[0018]背板I ;样品垫2 ;纤维素膜3 ;吸水垫4 ;带标记的保护膜贴纸5-1 ;T线6 ;C线7 ;保护膜贴纸5-2 ;硫酸雌酮单克隆抗体层8-1 ;塑料微孔8-2 ;塑料盖8-3 ;加样刻度线8_4 ；微孔试剂8 ;试纸条9
【具体实施方式】
[0019]为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0020]高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条的组装
[0021]1.粘贴:将样品垫⑵、纤维素膜(3)、吸水垫⑷、带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)参照图2的顺序逐一贴在支持背板(I)上。样品垫(2)与纤维素膜(3)相接，纤维素膜(3)与吸水垫(4)相接，同时在样品垫(2)和吸水垫(4)上分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)，其中样品垫(2)的带标记的保护膜贴纸(5-1)印有“MAX”标记，方便检测使用。纤维素膜(3)上分别标记了控制线C线(7)和检测线T线
(6)。C线(7)标记的是羊抗鼠的二抗，T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的硫酸雌酮结合物。
[0022]2.切条:将粘贴好的试纸条(9)大板用切条机进行切割，每个试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm，切割好的试纸条(9)储藏在室温下备用。
[0023]3.微孔试剂⑶的组装:采用自动化加样装置定量的将纳米金颗粒标记的高灵敏度硫酸雌酮单克隆抗体加到塑料微孔(8-2)中形成硫酸雌酮单克隆抗体层(8-1)，置于冻干机冷冻干燥。冷冻干燥的微孔试剂(8)用塑料盖(8-3)盖好，储藏于4-8°C备用，在塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)，一般为了方便使用8个微孔试剂(8)组成一排，供检测使用。
[0024]4.试纸条(9)和微孔试剂(8)的组装:将制备好的试纸条(9)和微孔试剂(8)按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，密封好后存放于4-8°C备用。
[0025]高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条的使用
[0026]1.样品的准备:
[0027]将待检测猪的尿液取样后放常温备用，样品应无沉淀和杂质。现场采集的样本最佳。
[0028]2.试纸条(9)的准备:
[0029]根据样品数量将需要使用的高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条从冷藏环境中突出后，静置30分钟使之恢复到室温，然后从密封包装中取出相应数量的试纸条(9)和微孔试剂(8)。所有实验操作应在水平的实验台或者相应环境上操作，环境温度无特殊限制。
[0030]3.检测操作:
[0031](I)加样:将准备好的样品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取100μ 1，加入到已经去掉盖的微孔试剂⑶中。注意:一个微孔试剂⑶对应一个试纸条(9)，只能检测一个样品，不能重复使用。
[0032](2)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打微孔试剂(8)中的液体使之充分混匀，混匀后的微孔应呈现粉红色或者浅粉色等。
[0033](3)插条:取出试纸条(9)并将带标记的保护膜贴纸(5-1)的一端插入微孔试剂
(8)中。请不要用手指或者其他物体触碰试纸条(9)的中段，即含有检测线T线(6)和控制线C线(7)的纤维素膜(3)段。
[0034](4)计时:插条后开始计时3分钟,观察C线(7)是否出现,如果3min内C线(7)已经出现，即可判读结果；如果C线(7)没有出现，请延长2分钟使液体爬升至C线(7)出现后判读结果。
[0035]4.结果判定:图5
[0036]阴性:如图5第I个所示，C线(7)显色，而T线(6)也显色，且T线(6)颜色较C线(7)深；
[0037]阳性:C线(7)显色，T线(6)颜色与C线(7)颜色相比较:
[0038](I)如果T线(6)颜色较C线(7)浅或T线(6)颜色和C线(7)较近:如图5第2个所示，则表明样品中硫酸雌酮的浓度处于40 μ g/L和lOOyg/L之间。该结果说明该母猪已经成功受孕。
[0039](2)如果T线(6)不显色，如图5第3个所示，则表明样品中硫酸雌酮的浓度大于100 μ g/L。该结果说明检测的母猪已经成功受孕，并且怀仔数较高。
[0040]无效:如图5中的第4和5个所示，C线(7)不显示。
[0041]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，本实用新型涉及的材料均为已知材料，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的硫酸雌酮结合物，所述的微孔试剂⑶内设有硫酸雌酮单克隆抗体层(8-1)。
2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，其特征在于:8个微孔试剂(8)通过胶体相互粘贴组成一排。
3.根据权利要求2所述的一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)。
4.根据权利要求3所述的一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，其特征在于:所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)。
5.根据权利要求4所述的一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，其特征在于:所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78?0.82cm。
6.根据权利要求5所述的一种高灵敏度硫酸雌酮检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8°C温度下。
【文档编号】G01N33/64GK203376329SQ201320541335
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月2日 优先权日:2013年9月2日
【发明者】杨春江, 张晓燕, 李妍, 袁永欣, 马孝斌 申请人:北京纳百景弈生物科技有限公司