一种电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法与流程

文档序号:11860513阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,包括步骤如下:

(1)玻碳电极预处理,其中,所述玻碳电极用0.03μm粒径的氧化铝浆在麂皮上呈8字形抛光;

(2)待预处理后的玻碳电极干燥后,取5μL壳聚糖/硫堇共聚物溶液滴加于干燥后的玻碳电极表面的中心,自然干燥后用超纯水反复清洗形成的聚合物膜至洗出水在600nm下无吸光值;

(3)取5μL纳米金/辣根过氧化物酶溶液滴加于用超纯水反复清洗的玻碳电极表面的中心,37℃干燥箱干燥20-30min,待干燥后用超纯水清洗2-3次;其中,纳米金溶胶的制备方法如下:

取4mL 1%柠檬酸钠溶液加入到100mL 0.01%氯金酸溶液中混匀,置于微波炉中中火保持5-10min,反应至溶液成透亮的酒红色即得纳米金溶胶,上述百分数均指的是质量百分数;

(4)再将所述玻碳电极置于纯化的单克隆抗体溶液中4℃自组装24h;

(5)最后将所述玻碳电极置于质量百分比为1%的牛血清白蛋白溶液中37℃温育1h,以封闭非特异性位点,以含体积百分比0.05%Tween-20的PBS溶液清洗未结合的BSA;自然晾干即得电化学纳米免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述玻碳电极预处理还包括下述过程:

将抛光后的玻碳电极用水清洗后在超声水浴中清洗数十秒,至表面光滑洁净,并在1×10-3mol/L K3Fe(CN)6溶液中用循环伏安法活化电极,重复扫描直至出现稳定的循环伏安曲线,最后置于氮气中备用;其中,

所述循环伏安法的扫描范围为0.6~-0.1V,扫描速度为50mV/s,峰电位差为64mV。

3.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述壳聚糖/硫堇共聚物通过下述方法得到:

首先取0.6mL质量百分比为10%的戊二醛溶液滴加到5mL质量百分比2%的壳聚糖溶液中混匀,然后加入0.4mL浓度为0.01mol/L硫堇溶液再次混匀,最后再滴加4mL体积百分比2%的乙酸溶液至总体积为10mL,摇匀后静置5min至溶液中无气泡,即得所述壳聚糖/硫堇共聚物。

4.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,所述纳米金溶胶利用分光光度计对其进行扫描,光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰,且光吸收峰的波长λmax在518nm;用透射电镜对所制纳米金溶胶颗粒的大小、形状及分散情况进行进一步精确的表征,结果显示颗粒呈球形,分散均匀,粒径为18-20nm。

5.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述纳米金/辣根过氧化物酶溶液采用下述方法制备:

用浓度为0.1mol/L K2CO3调节所述纳米金溶胶的pH值至7.0后,取1mL所述纳米金溶胶与1mL 2.0g/L HRP溶液搅拌混匀,即得所述纳米金/辣根过氧化物酶溶液。

6.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,在步骤(4)中,所述单克隆抗体为Balb/c小鼠腹水纯化,且浓度不低于0.5mg/mL。

7.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法,其特征在于,在步骤(5)中,所述牛血清白蛋白溶液采用下述方法制备:称取1g牛血清白蛋白粉末加到双蒸水中,混合均匀。

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