1.一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法,其特征在于:试剂包括VEGF-C系列标准品溶液,VEGF-C系列质控品溶液,酶标VEGF-C抗体溶液,酶标抗体稀释液,样本稀释液,链酶亲和素-HRP,化学发光液A液,化学发光液B液,浓缩洗涤液,包被溶液,封闭溶液;所述VEGF-C系列标准品溶液:将VEGF-C纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为0、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL的VEGF-C标准溶液;
所述VEGF-C系列质控品溶液:将VEGF-C纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为:400±80ng/mL、200±40ng/mL;
所述酶标VEGF-C抗体溶液:用VEGF-C抗体与生物素偶联制备,将所得VEGF-C抗体用酶标抗体稀释液稀释成1:4000的工作浓度;
所述酶标抗体稀释液:为含有BSA,蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液,pH=7.4,磷酸盐缓冲液是每升含有20g BSA,50g蔗糖,16g NaCl,0.4g KCl,0.4g KH2PO4,5.8g Na2HPO4的水溶液;
所述样本稀释液:为0.05mol/L磷酸盐缓冲液,pH=7.4,磷酸盐缓冲液是每升含有16g NaCl,0.4g KCl,0.4g KH2PO4,5.8g Na2HPO4的水溶液;
所述化学发光液:化学发光液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001M,pH=8.8的三羟甲基氨基甲烷溶液,化学发光液B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g,无水Na2HPO42.82g,0.75%的过氧化氢脲0.64mL的水溶液;
所述浓缩洗涤液:按体积分数0.05%将吐温-20添加至pH=7.4,0.1mol/L磷酸盐缓冲液中;
所述包被溶液:1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中,调节pH=9.5;
所述封闭溶液:10g BSA溶于1L洗涤溶液中,再加入重量比为5‰的NaN3。
2.根据权利要求1所述的一种一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法,其特征在于:试剂具体操作方法是:
(1).化学发光板使用前每孔加200μl清洗液,等待30秒后甩尽清洗液,重复2次;
(2).VEGF-C系列标准品溶液,VEGF-C系列质控品溶液,酶标VEGF-C抗体溶液各20μl分别加入化学发光板微孔中,再加入样本稀释液80μl,震荡混匀后,用封板膜封板,37℃水浴20分钟;
(3).甩去化学发光板孔内液体,每孔加200μl清洗液,等待30秒后甩尽清洗液,重复此操作5次;
(4).加入生物素标记抗体,每孔100μl,用封板膜封板,37℃水浴30分钟;
(5).甩去孔内液体,每孔加200μl清洗液,等待30秒后甩尽清洗液,重复此操作5次;
(6).每孔加入100μl的链酶亲和素-HRP,用封板膜封板,37℃水浴30分钟;
(7).甩去孔内液体,每孔加200μl清洗液,等待30秒后甩尽清洗液,重复此操作5次;
(8).每孔分别加入50μl化学发光液A液和50μl化学发光液B液,立刻置于化学发光仪器中读数。
3.根据权利要求2所述的一种一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法,其特征在于:VEGF-C抗体置于设定的包被溶液中,以设定的浓度,在37℃恒温箱中反应包被。
4.根据权利要求3所述的一种一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法,其特征在于:化学发光板的微孔包被好后用封闭溶液封闭。