达沙替尼药物浓度检测试剂盒的制作方法

本实用新型涉及体外诊断(invitrodiagnostic,ivd)领域，具体涉及一种对干血斑样本中达沙替尼药物浓度进行检测的试剂盒。

背景技术：

达沙替尼是第2代口服广谱酪氨酸激酶抑制剂，主要用于甲磺酸伊马替尼耐药或不能耐受的慢性髓性白血病所有病期及ph+急性淋巴细胞白血病患者。达沙替尼主要经过肝脏代谢。体外重组酶和人肝微粒体孵育实验表明达沙替尼主要由cyp3a4酶代谢，可能会与cyp3a4酶抑制剂或诱导剂发生药物相互作用。

达沙替尼的治疗药物监测主要目的是为了减少不良反应而防止治疗方案的终止。此外，达沙替尼的药动学特征存在较大的个体间和个体内的差异和潜在药物相互作用，可导致达沙替尼暴露量的变化，进而影响药物的疗效。再者，达沙替尼低于有效治疗浓度可能导致tt315i基因突变而产生耐药性。因此，监测达沙替尼的血药浓度具有重要的临床意义。

达沙替尼血药浓度监测目前全部在医学实验室开展，项目模式为实验室自建方法(laboratorydevelopedtests,ldt)，需要自行配制校准品、质控品、提取溶液。ldt模式的检测项目大多缺乏质量控制，分析批、试剂批的不稳定性将造成重现性的巨大风险，实验数据的准确度、精密度、可靠性难以保证。ldt模式项目的开展费时费力，便利性差，试剂配制、方法建立、仪器参数等需要专业、责任心强的员工来保证。

综上所述，本领域迫切需要一种使用方便、便于携带、灵敏度高、准确度高、采样量少、保存稳定的达沙替尼检测试剂盒。

技术实现要素：

本实用新型所要解决的技术问题在于，提供一种达沙替尼药物浓度检测试剂盒，能够用于达沙替尼药物浓度的检测，具有无需额外配制校准品、使用方便、便于携带、灵敏度高、准确度高、采样量少、保存稳定等优点至少之一，尤其是对干血斑样本中达沙替尼药物浓度进行检测。

为了解决上述技术问题，本实用新型提供的技术方案为：

一种达沙替尼药物浓度检测试剂盒，包括：盒体、内标提取液容器和校准品卡，所述内标提取液容器、校准品卡放置于所述盒体内；

所述校准品卡为固定有一组达沙替尼血斑样本作为干血斑校准点的血斑采集卡，所述干血斑校准点的数量为至少6个；

所述内标提取液容器内装有内标提取液。所述内标采用同位素取代的达沙替尼。其中，同位素取代可以是氘代(d4、d5、d6、d7、d8取代等)，也可以是c13取代、n15取代等同位素取代形式。

在一种优选的实施方式中，所述试剂盒还包括可开启/关闭的盒盖，所述盒盖与盒体是相连接的或相互独立的。所述盒盖与盒体配合关闭时，使所述试剂盒保持密封状态。

在一种优选的实施方式中，所述盒体内设置有内衬，所述内衬将盒体内部分隔形成多个容置空间；所述多个容置空间包括：

校准品卡容置空间，用于放置和固定校准品卡；

内标提取液容器容置空间，用于放置和固定内标提取液容器。

在一种优选的实施方式中，所述内衬上具有凹陷，所述凹陷呈圆筒形，且外形与内标提取液容器的外形相匹配；所述内标提取液容器是放置和固定于所述凹陷。

在一种优选的实施方式中，所述内衬上具有沟槽，所述沟槽呈长条形；所述校准品卡插入至所述沟槽中，起到放置和固定于校准品卡的作用。

在一种优选的实施方式中，所述内衬为纸板、海绵块、泡沫块或塑料块。

在一种优选的实施方式中，所述内衬为可拆卸地固定在所述盒体的内部。

在一种优选的实施方式中，所述内标提取液容器为玻璃瓶、塑料瓶、或样品管。在一种优选的实施方式中，所述内标提取液容器的体积为1～100ml；更优选为，10～50ml。

在一种优选的实施方式中，所述干血斑校准点为圆形斑点。优选的，所述圆形斑点的直径为5～10mm。所述至少6个干血斑校准点具有不同浓度达沙替尼，所述干血斑校准点按照血斑中达沙替尼的浓度大小依次排列的。

在一种优选的实施方式中，所述内标提取液用于对血斑样本进行提取，将所得提取物用于进样检测分析。

在一种优选的实施方式中，所述干血斑校准点的数量为至少7个。

在一种优选的实施方式中，所述干血斑校准点的数量为7个。

在一种优选的实施方式中，所述试剂盒还包括质控品卡，所述质控品卡为固定有至少一组达沙替尼血斑样本作为干血斑质控点的血斑采集卡，每一组干血斑质控点的数量为至少3个。所述干血斑质控点含有达沙替尼。根据达沙替尼的浓度不同，每一组干血斑质控点具有低浓度质控点、中浓度质控点和高浓度质控点三个干血斑质控点。

在一种优选的实施方式中，所述干血斑质控点为圆形斑点。优选的，所述圆形斑点的直径为5～10mm。

在一种优选的实施方式中，所述质控品卡中，每一组干血斑质控点包括一个空白对照干血斑质控点。所述空白对照干血斑质控点为空白全血，其中不含有达沙替尼。

在一种优选的实施方式中，所述干血斑校准点的血斑来源为兔血。在一种优选的实施方式中，所述干血斑质控点的血斑来源为兔血。在一种优选的实施方式中，所述空白对照干血斑质控点的血斑来源为兔血。

在一种优选的实施方式中，所述是试剂盒还包括说明书。所述说明书记载有所述试剂盒的组成信息和使用方法。

本实用新型的试剂盒提供了一种全新的达沙替尼药物浓度检测产品，该试剂盒的整体布局合理，使用操作方便，便于携带，校准品(和质控品)无需额外配制，检测耗时短，有助于提高分析检测的效率。

本实用新型的试剂盒，采用干血斑技术对达沙替尼药物浓度进行检测，解决了现有技术中的血药浓度监测多以全血、血浆、血清为样本来源，采血量较大、样本不稳定需冷链运输、取样量需要足够精确、致病性及职业暴露的可能性较高等诸多缺陷。常规液态生物样本全血、血清、血浆一次测定需要数毫升采血量，且血清、血浆需要再离心制备，本实用新型提供一种试剂盒，以干血斑(dbs)为样本载体，所需样本量远低于液态基质，有效的解决了此问题。

本实用新型的试剂盒，将校准品(和质控品)样本保存在血斑卡中，其性质特点为“干”，区别于液态基质易受ph、光照、温度的影响，本实用新型具有优异的稳定性，保证了检测结果的准确度。

本实用新型的试剂盒，借助血斑卡优异的卡纸均匀性，样本扩散均匀一致，采用打孔器能精确打取相同面积的血斑样本，取样精确，消除了液态基质取样不精准导致的检测结果偏差。

附图说明

图1为本实用新型的试剂盒一具体实施方式的立体结构示意图。

图2为本实用新型的试剂盒一具体实施方式的校准品卡的排布图。

图3为本实用新型的试剂盒一具体实施方式的质控品卡的排布图。

图4为本实用新型的试剂盒一具体实施方式的内衬的结构示意图。

附图中符号标记说明：

1为盒体；2为内标提取液容器；3为校准品卡；31为干血斑校准点；4为质控品卡；41为干血斑质控点；lqc为低浓度质控点；mqc为中浓度质控点；hqc为高浓度质控点；blank为空白对照干血斑质控点；5为盒盖；6为内衬；61为凹陷；62为沟槽。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示，为本实用新型的试剂盒一具体实施方式的立体结构示意图。该达沙替尼药物浓度检测试剂盒，包括：盒体1、内标提取液容器2和校准品卡3。其中，内标提取液容器2、校准品卡3是放置于盒体1内。

图1中所示的试剂盒，还包括盒盖5，盒盖5与盒体1配合可以实现关闭或开启试剂盒的功能。图1中，盒盖5与盒体1是相连接的；在其他的实施方式中，盒盖5与盒体1也可以是相互独立的。盒盖5与盒体1配合关闭时，能使试剂盒保持密封状态。

图1中所示的试剂盒，还包括内衬6。内衬6将盒体1内部分隔形成多个容置空间。容置空间至少包括：用于放置和固定校准品卡3的校准品卡容置空间，和用于放置和固定内标提取液容器2的内标提取液容器容置空间。

如图4所示，是对应于图1中的内衬的结构示意图。内衬6上具有凹陷61，凹陷61呈圆筒形，其外形与内标提取液容器2的外形相匹配。内标提取液容器2是放置和固定于凹陷61。凹陷61即为内标提取液容器容置空间。内衬6上具有沟槽62，沟槽62呈长条形，所述沟槽的尺寸与所述校准品卡的尺寸匹配，可供校准品卡3插入至该沟槽62中，起到放置和固定于校准品卡3的作用。沟槽62即为校准品卡容置空间。

在本实用新型中，内衬6可以选用试剂盒领域各种常规的材质。比如纸板、海绵块、泡沫块或塑料块。内衬6是以可拆卸地方式固定于盒体1的内部。

在本实用新型中，内标提取液容器2以选用试剂盒领域常规的各种溶液容器。比如玻璃瓶、塑料瓶、样品管等。内标提取液容器2可以为透明材质或棕色材质。优选的，内标提取液容器2为棕色玻璃瓶。

图2所示，为一具体实施方式的校准品卡3的排布图。本实用新型中，校准品卡3为点制有一组达沙替尼血斑样本形成的干血斑校准点31的血斑采集卡，其中，干血斑校准点31的数量为至少6个。图2中显示的干血斑校准点31的数量为7个。本实用新型中的干血斑校准点31，是将含有达沙替尼的全血样本点制于血斑采集卡上而形成血斑。其中，各个干血斑校准点31应当具有不同浓度达沙替尼，且干血斑校准点31按照血斑中达沙替尼的浓度大小依次排列的。作为一种优选的实施方式，各个干血斑校准点31中的达沙替尼应当按照一定的浓度梯度排列。在一种具体的实施方式中，干血斑校准点31中达沙替尼的浓度梯度的范围为2～200ng/ml线性范围。比如，图2中的7个干血斑校准点31的达沙替尼的浓度梯度可以设计为：2，20，40，80，120，160，200ng/ml。

在一种优选的实施方式中，本实用新型的试剂盒还可以配有质控品卡4，质控品卡4为设有至少一组具有达沙替尼的干血斑质控点41的血斑采集卡，每一组干血斑质控点41的数量为至少3个。图3中显示有两组干血斑质控点41，每组干血斑质控点41有四个点。使用质控品卡4的好处在于，在大批量样本的分析检测或长时间分析检测中，每间隔一定数量的样本可以插入质控品进行检测，以验证检测结果的可靠性，还能够验证仪器状态是否良好、样本前处理操作的重复性。本实用新型中的干血斑质控点41，是将含有达沙替尼的全血样本点制于血斑采集卡上而形成血斑。每一组干血斑质控点41中应当具有低浓度质控点lqc、中浓度质控点mqc和高浓度质控点hqc三个干血斑质控点。干血斑质控点41的低、中、高三个浓度落入干血斑校准点31的浓度梯度的范围内。通常，低浓度质控点lqc的达沙替尼浓度为浓度梯度最小值的3倍以内，中浓度质控点mqc的达沙替尼浓度为浓度梯度范围的中间点附近，高浓度质控点hqc的达沙替尼浓度为浓度梯最大值的75％-80％。根据具体的试验方案需求，也可以设计其他特殊浓度要求的干血斑质控点41。如图3所示，每组干血斑质控点41除了具有低浓度质控点lqc、中浓度质控点mqc和高浓度质控点hqc之外，还具有一个空白对照干血斑质控点blank。该空白对照干血斑质控点blank为空白全血，其中不含有达沙替尼。如图3所示，干血斑质控点41为两组。在其他的实施方式中，可以设置三组、四组或更多组的干血斑质控点41。如图4所示，内衬6上具有两个沟槽62，质控品卡4插入至其中一个沟槽62中，起到放置和固定质控品卡4的作用。

在本实用新型的一种具体实施方式中，干血斑校准点、干血斑质控点和/或空白对照干血斑质控点的血斑来源为兔血。兔血是由商业化兔血供应，其兔血hct检验合格范围为30％-45％。

本实用新型中使用的血斑采集卡，可以选用gewhatman903卡、dmpk-a卡，但不限于上述品牌及型号。

本实用新型中，内标提取液容器2内装有以d8-达沙替尼作为内标物的提取液。提取液用于对血斑样本进行提取，将所得提取物用于进样检测分析。提取液采用甲醇、乙腈、甲醇与水的混合物、乙腈与水的混合物、或甲醇、乙腈与水的混合物。当以甲醇与水的的混合物为提取液时，优选的，甲醇/水的比例大于1.5；当以乙腈与水的的混合物为提取液时，优选的，乙腈/水的比例应大于1.5；当以甲醇、乙腈、水的混合物为提取液时，优选的，甲醇+乙腈/水的比例大于1.5。

在本实用新型的一种具体实施方式中，该试剂盒还包括说明书。说明书记载有试剂盒的组成信息和使用方法。

本实用新型的使用方法为：采用干血斑打孔器打取校准品卡3上的一组干血斑校准点31(图2为7个点)的直径≥3mm的干血斑至96孔板中，采用干血斑打孔器打取待检测样本的干血斑至96孔板中，加入内标提取液容器2中的提取液，提取液含0.5ng/ml达沙替尼同位素内标。振荡，离心，吸取上清液至新的96孔板中，再离心，取上清液进lc-ms/ms进行分析检测。通过干血斑校准点31(7个)检测的达沙替尼和达沙替尼同位素内标的峰面积比值(y)，绘制校准曲线，并拟合校准曲线方程；再将检测样品的达沙替尼的峰面积与达沙替尼同位素内标的峰面积比值，带入校准曲线方程，即可定量计算样本中达沙替尼的浓度。该试剂盒用于检测时操作方便，检测耗时短，检测的准确率高。根据实验的需求，可选择性使用该试剂盒配置的质控品卡4对检测结果进行质量控制，并附有空白对照干血斑质控点blank用于达沙替尼的专属性、特异性评价、高浓度样本残留的监测。

综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。