r>[0019] 3、流动相选择：曾采用C18柱，乙腈-甲醇-0. 1%磷酸溶液（1.5 : 4 : 94.5)为 流动相，结果色谱峰分离不好，且基线不稳。后改用氨基柱，采用乙腈-无水乙醇-2%磷酸 溶液（80 : 10 : 10)为流动相，经调整流动相的比例，确定流动相，色谱峰分离良好，基线 平稳。
[0020] 4、色谱条件： 色谱柱：AgilentZORBAX NH2 5Mm 4.6X150mm; 流动相：乙腈-无水乙醇-2%磷酸溶液（84 : 7 : 9); 流速：1. 〇ml/min ; 检测波长：210nm ; 柱温：30°C ; 理论塔板数：按苦参碱峰计算应不低于2000。
[0021] 5、对照品溶液的制备：取苦参碱对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇（1:25)溶液 制成每1ml含苦参碱30. 48 μ g的溶液，即得。
[0022] 6、供试品溶液的制备： 6. 1提取溶剂考察： 取颗粒，研细，取l.Og，共取5份，分别精密称定，精密加甲醇、50%甲醇、70%甲醇、80% 甲醇、90%甲醇各50ml，称重，超声处理30分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，各精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣加0. 5ml水润湿后，再用 甲醇定量转移至中性氧化铝柱（100-120目，3g，内径为Icm)上，用甲醇洗脱至IOml的量瓶 中，测定苦参碱的含量，结果见表1 :
【主权项】
1. 一种中药组合物中苦参碱的含量测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料 药组成：人参42-160、黄精50-200、苍术30-100、苦参20-60、麦冬50-200、地黄50-120、 何首乌35-100、山茱萸50-200、茯苓35-100、佩兰30-60、黄连20-60、知母30-100、淫羊藿 30-60、丹参35-120、葛根50-200、荔枝核75-150、地骨皮30-100组成；所述中药组合物的 制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂，其特征在于测定方法由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取制剂，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称重，用甲醇补 足重量，滤过，量取续滤液，蒸干，残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲 醇洗脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； c、 测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，测 定，计算，测得苦参碱含量。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于测定方法由以下步骤组成： a、 取相当于该中药组合物生药量0. 8-33. 6g的制剂，加入50-80%甲醇50ml，称定重量， 超声处理10-40分钟，放冷，再称重，用50-80%甲醇补足重量，滤过，量取续滤液25ml，蒸干， 残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； c、 测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，测 定，计算，测得苦参碱含量。
3. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述步骤c中高效液相色谱柱填充 剂为氨基键合硅胶；检测波长为210nm ;流动相为体积比为84:7:9的乙腈-无水乙醇-2% 磷酸溶液，流速为l.〇ml/min。
4. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于颗粒剂中苦参碱的含量测定由以下步 骤组成： a、 供试品溶液的制备：取该中药组合物颗粒，研细，称取0. 3-11. 8g，加入50-80%甲醇 50ml，称定重量，超声处理20分钟，超声温度30°C，放冷，再称重，用50-80%甲醇补足重量， 滤过，量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲醇洗 脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； C、测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，高 效液相色谱柱填充剂为氨基键合硅胶；检测波长为210nm ;流动相为体积比为84:7:9的乙 腈-无水乙醇-2%磷酸溶液，流速为l.Oml/min，测定，计算，测得苦参碱含量。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物的活性成分制 备过程如下： a、 按照原料药重量比例称取中药材，净选、碎断； b、 佩兰、苍术加5-9倍量水提取挥发油，提取3-6小时，挥发油另器收集，水溶液过滤后 备用； C、山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶剂，浸渍12-48小时后，进行渗漉，收集渗漉液， 回收乙醇,并浓缩成60°C测定相对密度为1. 30-1. 35的稠膏，烘干，备用； d、 人参、麦冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3 小时，提取液过滤，回收乙醇，浓缩成稠膏，烘干，备用； e、 黄精、苦参、地黄、何首乌、茯苓、黄连、丹参、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮 1-2次，每次1-3小时，提取液过滤，与步骤b中佩兰、苍术提油后的水溶液合并，浓缩成清 膏，加乙醇调节醇浓度为50-80%，冷藏放置，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，烘干，备用； 步骤c所得山茱萸干膏、步骤d所得醇提干膏、步骤e所得水提醇沉干膏与步骤b所得 挥发油共同构成该中药组合物的活性成分。
6. 根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物颗粒剂的制备 由以下步骤构成： a、 按照原料药重量比例称取中药材，净选、碎断； b、 佩兰、苍术合并，加5-9倍量水，水蒸汽法提取挥发油，提取3-6小时，挥发油另器收 集，水溶液过滤后备用； c、 山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶剂，浸渍12-48小时后，进行渗漉，收集渗漉液， 回收乙醇,并浓缩成60°C测定相对密度为1. 30-1. 35的稠膏，烘干，备用； d、 人参、麦冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3 小时，提取液过滤，回收乙醇，浓缩成稠膏，烘干，备用； e、 黄精、苦参、地黄、何首乌、茯苓、黄连、丹参、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮 1-2次，每次1-3小时，提取液过滤，与步骤b中佩兰、苍术提油后的水溶液合并，浓缩成清 膏，加乙醇调节醇浓度为50-80%，冷藏放置，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，烘干，备用； f、 将步骤c所得山茱萸干膏、步骤d所得醇提干膏、步骤e所得水提醇沉干膏混合均 匀，粉碎，加入辅料制粒； g、 步骤b所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤f所得的颗粒，混匀，密闭，分装，即得。
7. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述中药组合物由下列重量份数的原 料药组成：人参102、黄精136、苍术68、苦参56、茯苓83、麦冬136、何首乌83、地黄102、山 茱萸136、黄连56、佩兰56、荔枝核136、淫羊藿56、知母68、丹参89、葛根136、地骨皮83。
8. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述中药组合物由下列重量份数的原 料药组成：人参42、黄精200、苍术30、苦参60、茯苓35、麦冬200、何首乌35、地黄120、山茱 萸50、黄连60、佩兰30、荔枝核150、淫羊藿30、知母100、丹参35、葛根200、地骨皮30。
9. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述中药组合物由下列重量份数的原 料药组成：人参160、黄精50、苍术100、苦参20、茯苓100、麦冬50、何首乌100、地黄50、山 茱萸200、黄连20、佩兰60、荔枝核75、淫羊藿60、知母30、丹参120、葛根50、地骨皮100。
10. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述苍术为麸炒苍术，何首乌为制何 首乌，淫羊藿为炙淫羊藿。
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物中苦参碱的含量测定方法，该中药组合物由人参、黄精、苍术、苦参、麦冬、地黄、何首乌等药组成，具体方法由以下步骤组成：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及测定，该测定方法有助于药物的质量控制，提高药物的安全性和可靠性。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104634884
【申请号】CN201310555315
【发明人】李晓燕, 柏艳柳, 刘丽杰, 周梦夏, 安军永, 王超, 秦拢, 王猛
【申请人】河北以岭医药研究院有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月11日