子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2，与其他流感病毒无明显作用。
[0019]图5显示了定量检测甲型流感病毒H3N2的紫外光谱变化图。A:在不同量的甲型流感病毒H3N2作用下，得到的紫外光谱图(甲型流感病毒H3N2的浓度:(a) 0、(b) 10、(c)20、(d) 40、(e) 60、(f) 80、(g) 100、(h) 200、⑴ 400 HAU) ;B:紫外吸收对比强度与甲型流感病毒H3N2浓度的拟合曲线；插图:紫外吸收对比强度与甲型流感病毒H3N2浓度之间的线性关系；从图中可以看出甲型流感病毒H3N2在10 HAU到80 HAU呈良好的线性关系。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体的实施例和附图对本发明进一步说明，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干变型和改进，这些也应视为属于本发明的保护范围。
[0021]本实验中用到的试剂和仪器:
甲型流感病毒(H3N2 IAV, HlNl IAV, H2N2 IAV),乙型流感病毒(Yamagata，Victoria),甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体(mAb)，牛血清蛋白(BSA)，氯金酸(HAuCl4.3H20)，柠檬酸钠(Na3C6H5O7.2H20)，磷钨酸钠(PTA)，紫外分光光度计(ShimadzuUV - 2450，Kyoto, Japan)，透射电镜(JEM - 2010，Hitachi，Japan)，混合涡旋仪(IKAGerman)，离心机(Eppendorf German)，数码相机(Canon IXUS 115，Japan)。
[0022]实施例1:
基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的分析方法，检测步骤是:
探针合成步骤:取一 EP管，加入I mL，2 nmol/L金纳米粒子溶液，用0.1 mo I/L 1(20)3调节溶液的PH值为8.2，加入0.1 mg/mL的单克隆抗体30 μ L，在摇床上120转/分钟，37°C下温育2小时。然后加入20 μ L 1% (m/v)BSA，37°C下温育30分钟。最后将探针溶液在13200 rpm，4°C下离心20分钟，离心三次后复溶在200 yL PBS缓冲溶液中，4°C保存。此溶液作为探针溶液。
[0023]取一EP 管，加入 I mL, 2 nmol/L 金纳米粒子溶液，加入 20 μ L l%(m/v)BSA，37°C下温育30分钟。然后将探针溶液在13200 rpm，4°C下离心20分钟，离心三次后复溶在200μ L PBS缓冲溶液中，4°C保存。此溶液作为对比探针溶液。
[0024]原理验证步骤:50 μ L，10 nmol/L探针溶液加入到400 HAU 200 μ L甲型流感病毒Η3Ν2溶液中，充分混匀后，在37 °C恒温水浴锅中反应2小时后，取5 μ L病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上，室温下放置3分钟后，用滤纸吸去铜网上剩余溶液，然后将铜网浸于1%的磷钨酸钠溶液中3分钟后，取出，室温下自然晾干，透射电镜检测。实验结果见图3Α:金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒Η3Ν2的囊膜表面。同时将病毒溶液去扫描紫外-可见光谱，对比病毒加入前后的溶液颜色变化。实验结果见图3Β:control线为探针溶液的紫外吸收谱，H3N2线为病毒加入后溶液的紫外吸收谱，H3N2线相比control线的SPR吸收峰从525纳米红移到650纳米左右，同时对应溶液由酒红色变为蓝色。结果显示金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2的囊膜表面，从而引起金纳米粒子的SPR峰发生红移，对应溶液颜色由酒红色变为蓝色。
[0025]特异性检测步骤:在含有400 HAU 200 μ L甲型流感病毒Η3Ν2溶液的两个EP管中，分别加入50 yL,10 nmol/L探针溶液和对比探针溶液。充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应30分钟，然后将两EP管中溶液去扫描紫外-可见光谱，同时对比溶液颜色。实验结果见图4A:将含有探针溶液的紫外吸收数据与对比探针溶液比较，探针溶液的紫外吸收峰发生明显红移，且溶液颜色明显变紫，对比探针溶液无明显变化。将50 uL,10 nmol/L探针溶液分别加入到400 HAU 200 μ L的不同流感病毒溶液(H2:H3N2 IAV, Hl:H1N1IAV,H3:H2N2 IAV，Yamagata，Victoria)中，充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应30分钟，然后将产物溶液去扫描紫外-可见光谱，同时对比溶液颜色。实验结果见图4B:金纳米粒子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2，与其他流感病毒无明显作用。结果显示探针溶液对甲型流感病毒H3N2的检测效果很好。
[0026]定量检测甲型流感病毒H3N2步骤:将50 μ L，10 nmol/L探针溶液和不同量的甲型流感病毒H3N2 (0、10、20、40、60、80、100、200、400 HAU)充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应30分钟，反应结束后，将产物溶液去扫描紫外-可见光谱。分析得到紫外吸收图谱，绘出甲型流感病毒H3N2线性图。实验结果见图5:甲型流感病毒H3N2在10 HAU到80 HAU呈良好的线性关系，检测限是7.8 HAU。注:反应总体积为250 yL。
[0027]实施例2:
基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的分析方法，检测步骤是:
探针合成步骤:取一 EP管，加入500 μ L，2 nmol/L金纳米粒子溶液，加入10 μ L，0.1mol/L K2CO3，充分摇匀后，加入15 yL,0.1 mg/mL的单克隆抗体，在摇床上300转/分钟，37°C下温育2小时。然后加入10 uL l%(m/v) BSA，37°C下温育I小时。最后将探针溶液在12200 rpm，4°C下离心30分钟，离心三次后复溶在200 yL PBS缓冲溶液中，4°C保存。此溶液作为探针溶液。
[0028]取一 EP管，加入500 μ L，2 nmol/L金纳米粒子溶液，加入10 μ L l%(m/v) BSA,37°C下温育I小时。然后将探针溶液在12200 rpm，4°C下离心30分钟，离心三次后复溶在200 UL PBS缓冲溶液中，4°C保存。此溶液作为对比探针溶液。
[0029]原理验证步骤:50 μ L，10 nmol/L探针溶液加入到400 HAU 200 μ L甲型流感病毒Η3Ν2溶液中，充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应I小时后，取5 μ L病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上，室温下放置3分钟后，用滤纸吸去铜网上剩余溶液，然后将铜网浸于2%的磷钨酸钠溶液中I分钟后，取出，室温下自然晾干，透射电镜检测。实验结果:金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒Η3Ν2的囊膜表面。同时将病毒溶液去扫描紫外-可见光谱，对比病毒加入前后的溶液颜色变化。实验结果:探针溶液的SPR吸收峰从525纳米红移到650纳米左右，同时对应溶液由酒红色变为蓝色。
[0030]特异性检测步骤:在含有512 HAU 200 μ L甲型流感病毒Η3Ν2溶液的两个EP管中，分别加入100 yL, 5 nmol/L探针溶液和对比探针溶液。充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应I小时，然后将两EP管中溶液去扫描紫外-可见光谱，同时对比溶液颜色。实验结果见图4A:将含有探针溶液的紫外吸收数据与对比探针溶液比较，探针溶液的紫外吸收峰发生明显红移，且溶液颜色明显变紫，对比探针溶液无明显变化。将100 uL, 5 nmol/L探针溶液分别加入到512 HAU 200 μ L的不同流感病毒溶液(H2:H3N2 IAV,Hl:H1N1 IAV，H3:H2N2 IAV, Yamagata, Victoria)中，充分混匀后，在37°C恒温水浴锅中反应I小时，然后将产物溶液去扫描紫外-可见