度为0. 1%的抑为7. 4的0. 01mo1/L的PBS溶液进行浸泡，浸泡后将溶 液渐干，在37 °C条件下烘干12h备用。
[0011] 作为实施例的优选方式，还包括步骤一之前对试验所用容器的清洗；首先将试验 所用容器在重铭酸钟洗液中浸泡24h，取出后用自来水进行若干次清洗，再用超纯水清洗3 次；将清洗干净的容器于二氯甲硅烷含量为5%的氯仿中浸泡1min后进行娃化处理；将经 过娃化处理过的容器放置于室温条件下干燥，待干燥完成后用超纯水清洗干净并于烘箱中 37 °C进行干燥处理，备用。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有下列优点： 1、 本发明的检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条，具有特异性强，灵敏度高，检测 时间短等优点，可W同时检测出12种横胺类药物； 2、 本发明的检测试纸条不需要任何特殊仪器、设备，可现场操作，检测成本低； 3、 本发明的检测试纸条操作简便，不需要专业人员操作； 4、 本发明对样品垫与金标垫进行了前处理，使得样品垫与金标垫具有优异的吸水能力 及释放能力，进而大大提高了检测能力； 5、 本发明对试验所用容器都进行清洗，最终增强了金标抗体的稳定性； 6、 本发明可W同时检测液体样品和组织样品，无需分开检测，而传统的试纸条对于该 两种样品是分开检测的； 7、 本发明的胶体金标记抗体时最佳蛋白标记量的确定采用了氯化钢破坏法与性能实 验相结合的方法，在提高检测的灵敏度的同时，节省了抗体使用量。 说明书附图
[0013] 图1为本发明胶体金免疫层析试纸条的结构示意图； 图2为本发明实施例4性能评价SMD标准品测试结果图；其中，SMD浓度依化g/mL、Ing/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL; 图3为本发明实施例4性能评价八种横胺药物灵敏度测试结果图； 图4为本发明实施例4性能评价试纸条的特异性检测结果图； 图5为本发明实施例4性能评价试纸条稳定性测试结果图； 图6为本发明实施例5样本测试的牛奶样品检测结果图； 图7为本发明实施例5样本测试的猪肉样品检测结果图； 图8为本发明实施例5样本测试的鱼肉提取液检测结果图。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1
[0015] 如图1所示，本发明揭示了一种用于检测水产品中四环素类药物的胶体金免疫层 析试纸条，包括样品垫1、结合垫2、硝酸纤维素包被膜3、吸水垫4及PVC底板5,所述样品垫 1、所述结合垫2、所述硝酸纤维素包被膜3及所述吸水垫4依次搭接在所述PVC底板5上： 所述结合垫2包被设有横胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物；所述硝酸纤维素包被膜3 上设有检测线31和质控线32,所述检测线31包被有横胺类药物抗原，所述质控线32包被 有羊抗鼠IgG。
[0016] 实施例2
[0017] 一种检测横胺类药物的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括W下步骤： 步骤一、胶体金的制备：取1个250mL烧杯，加入100mL0.01%氯金酸溶液，于恒温磁 力揽拌器上使用温度档350 °C对其进行加热，转速为3(K)r/min，加热至沸腾状态后，沸腾 时的实际温度为100 °C，向烧杯中快速加入500化1%巧樣酸=钢溶液，烧杯中的溶液变 为红色后再加热10min,直至溶液透亮，冷却至室温，4°C密封保存，即制得胶体金； 步骤二、金标抗体的制备及纯化；取调好抑为7. 4的所述胶体金1mL于1. 5mL离屯、 管中，向离屯、管中加入31?也/ml的横胺类药物单克隆抗体，用祸旋仪祸旋10min后静置20 min;向离屯、管中加入100化10%BSA溶液，用祸旋仪祸旋lOmin，静置10min,制得金标抗 体，即横胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物； 同时，将制得的金标抗体溶液于4°C2500r/min，离屯、10min,去除下层沉淀，将上清 液转到另一离屯、管中，于4°C9000r/min，离屯、30min,去除上清液，将沉淀用胶体金稀释 溶液稀释至原体积的1/20,于4 °C保存备用； 步骤S、试纸条的组装；（1)将硝酸纤维素包被膜，即NC膜，和吸水垫分别贴于PVC底 板上，吸水垫压住NC膜上方1-2mm; (2)将粘贴好NC膜和吸水垫的PVC底板在切条机上切 割成4mm宽的试纸条；（3)将样品垫和结合垫切成4mm宽的条，同时将结合垫浸泡金标抗 体溶液中，并于37°C烘干，制得金标垫；（4)烘干后的金标垫剪成1cm长的小块并贴于PVC 底板上，金标垫压住NC膜下方1-2mm，同时用样品垫压住金标垫下方1-2mm，根据试纸条 长度修剪样品垫；（5)在结合垫和吸收垫之间的NC膜上依次包被横胺类药物抗原和羊抗鼠 IgG，分别作为检测线和控制线，采用BioDot划膜仪进行包被划线，具体参数为平台移动速 度40mm/s，单位喷量；检测线为0. 8yL/cm，质控线为1. 0yL/cm，使得横胺类药物抗原包被 浓度为0. 05mg/mL;羊抗鼠IgG包被浓度为0. 8mg/mL。
[0018] 作为实施例的优选方式，在所述步骤=(3)中，还包括对样品垫和金标垫进行前处 理的步骤，即将样品垫与金标结合垫用切条机分别切成4mm宽的长条，用含有5%的庶糖、 5%BSA和终体积浓度为0. 1%的抑为7. 4的0. 01mo1/L的PBS溶液进行浸泡，浸泡后将溶 液渐干，在37°C条件下烘干12h备用。
[0019] 作为实施例的优选方式，还包括步骤一之前对试验所用容器的清洗；首先将试验 所用容器在重铭酸钟洗液中浸泡24h，取出后用自来水进行若干次清洗，再用超纯水清洗3 次；将清洗干净的容器于二氯甲硅烷含量为5%的氯仿中浸泡1min后进行娃化处理；将经 过娃化处理过的容器放置于室温条件下干燥，待干燥完成后用超纯水清洗干净并于烘箱中 37°C进行干燥处理，备用。
[0020] 实施例3胶体金标记抗体时最佳蛋白标记量的确定
[0021] 氯化钢破坏法：将3mg/mL的横胺类药物单克隆抗体稀释至浓度为0. 5mg/mL后使 用，稀释液为0. 〇2mol/L抑7. 4的PB缓冲液。按照表1所示，取5个1. 5血离屯、管，分别标 为1~5号，向各个离屯、管中加入ImL胶体金溶液，加入适量碳酸钟，调节溶液至最佳抑，混 匀，依次向各管中加入横胺类药物单克隆抗体0嗦、1嗦、2嗦、3嗦、4嗦，充分振摇混匀，静置 2〇min，再分别向离屯、管中加入10%化C1各0. 1血，充分混匀，静置30min，观察各离屯、管中 反应前后溶液颜色的变化。未加抗体蛋白或抗体蛋白加入量不足时，溶液会出现不同程度 的聚沉现象，颜色由红变紫或变藍，加入的抗体蛋白足够稳定整个体系时，溶液保持红色不 变。因此，溶液保持红色不变的那个管中的蛋白加入量，就是胶体金标记蛋白最低稳定量， 最佳蛋白柄记量即为120%最低蛋白稳定量。
[0022] 表1最低标记蛋白量的确定
性能实验：取3个离屯、管，编号为1~3号，各加1血胶体金溶液，调节溶液至最佳pH，根 据氯化钢破坏法的实验结果，实验中对1~3号管分别标记3yg、4yg、5yg的抗体蛋白，加 入100UL10%BSA封闭保护金标液，金标液经纯化、稀释，禪合到金标垫上，与NC膜组装成 试纸条，分别测试100yg/L的阳性标准品和阴性PBS溶液，对比抗体加入量的不同对试纸 条显色的影响，准确判断最佳标记量。
[0023] 探索胶体金标记抗体蛋白的最佳标记量，各离屯、管中的溶液发生反应后颜色出现 了变化，其中，1、2、3号管抗体蛋白的加入量不能够稳定胶体金体系，加入氯化钢后，产生的 盐离子效应，破坏了胶体金的平衡，使溶液出现了由红色变藍色或紫色的不同程度的聚沉 现象，4号管溶液有轻微变色，说明加入氯化钢