37°C烘干，将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到乳腺癌量子点免疫层析试纸条。在样品垫上滴加62.5ng/mL的标准CEA抗原和CA15-3抗原。
[0057]实验结果显示试纸条C线、T1线以及T 2线均亮，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T1线荧光强度为10425，T2线荧光强度为8649，C线荧光强度34159，T1/C值为0.305，T2/C 值为 0.232。
[0058]实施案例6:
[0059]I)将量子点QDs625nni和QDs 56Qnn1、EDC (1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，量子点和EDC质量分数配比为1:4000，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0060]2)将糖类抗原15-3标记抗体(CAlSIAb1)和免疫量子点QDs625nni混合(QDs 625ηηι和
量分数配比为1:30)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-糖类抗原15-3标记抗体(QDs-CAlSjAb1)的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA0
[0061 ] 3)将癌胚抗原标记抗体(CEAAb1)和免疫量子点QDs560nni混合(QDs 56Qnni和CEAAb:质量分数配比为1:30)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-癌胚抗原CEA标记抗体(QDs-CEAAb1)的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA。
[0062]4)试纸条制备:用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针再次处理结合垫并37°C烘干，将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到乳腺癌量子点免疫层析试纸条。在样品垫上滴加1000ng/mL的标准CEA抗原和Ong/mLCA15-3抗原(即胎牛血清)。
[0063]如图3所示，试纸条C线、1~2线均亮而T i线不亮；如图5 FBS+CEA所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T1线荧光强度为6434，T2线荧光强度为17721，C线荧光强度 29952，T1/C 值为 0.215，T2/C 值为 0.592。
[0064]实施案例7:
[0065]I)将量子点QDs625nni和QDs 56Qnn1、EDC (1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，量子点和H)C质量分数配比为1:10000，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0066]2)将糖类抗原15-3标记抗体(CAlSIAb1)和免疫量子点QDs625nni混合(QDs 625ηηι和
量分数配比为1:30)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-糖类抗原15-3标记抗体(QDs-CAlSjAb1)的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA0
[0067]3)将癌胚抗原标记抗体(CEAAb1)和免疫量子点QDs560nni混合(QDs 56Qnni和CEAAb眉量分数配比为1:30)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-癌胚抗原CEA标记抗体（QDs-CEAAbD的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA。
[0068]4)试纸条制备：用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针再次处理结合垫并37°C烘干，将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到乳腺癌量子点免疫层析试纸条。在样品垫上滴加Ong/mL的标准CEA抗原（即胎牛血清）和 1000ng/mLCA15-3 抗原。
[0069]如图3所示，试纸条C线、线均亮而！^线不亮；如图5FBS+CA153所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条线荧光强度为20121，T2线荧光强度为6025，C线荧光强度 30147，T1/C 值为 0. 667，T2/C 值为 0. 200。
[0070]实施案例8 ：
[0071]1)将量子点QDs625nni和QDs 560nn, EDC(1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐）加入反应器，量子点和H)C质量分数配比为1:10000，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0072]2)将糖类抗原15-3标记抗体（CA15-3Abi)和免疫量子点QDs625nni混合（QDs 625nni和量分数配比为1:50)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-糖类抗原15-3标记抗体（QDs-CAlSIAbi)的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA。
[0073]3)将癌胚抗原标记抗体（CEAAbD和免疫量子点QDs56Qnni混合（QDs 56Qnni和CEAAb量分数配比为1:50)，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点_癌胚抗原CEA标记抗体（QDs-CEAAbD的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA。
[0074]4)试纸条制备：用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针再次处理结合垫并37°C烘干，将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到乳腺癌量子点免疫层析试纸条。在样品垫上滴加Ong/mL的标准CEA和CA15-3抗原（即胎牛血清）。
[0075]如图3所示，试纸条C线亮而线以及T 2线均不亮；如图5FBS+FBS所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条线荧光强度为6459，T2线荧光强度为6222，C线荧光强度 30021，T1/C 值为 0. 215，T2/C 值为 0. 207。
【主权项】
1.一种新型的乳腺癌量子点免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于步骤如下: 1)将量子点QDs625nni和QDs560nn, EDCd-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点； 2)将糖类抗原15-3标记抗体(CA15-3Abi)和免疫量子点QDS625nni混合，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2?3h，离心得到量子点-糖类抗原15-3标记抗体(QDs-CAlS-SAb1)的荧光探针，加入牛血清白蛋白BSA。 3)将癌胚抗原标记抗体(CEAAb1)和免疫量子点QDs56tinm混合，反应体系为PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2?3h，离心得到量子点-癌胚抗原CEA标记抗体(QDs-CEAAb1)的焚光探针，加入牛血清白蛋白BSA。 4)试纸条制备:用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针再次处理结合垫并37°C烘干，将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到乳腺癌量子点免疫层析试纸条。2.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于量子点:EDC质量分数配比为1:4000 ?10000。3.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于量子点和标记抗体质量分数比=1:20 ?50。4.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于选用PBS缓冲液用以保持癌胚抗原抗体和糖类抗原15-3抗体的活性。5.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于选用牛血清白蛋白封闭荧光探针上未反应的羧基。6.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于同时选用不同发射波长的量子点QDs625nni和QDs 56。Jt测不同的肿瘤标志物CA15-3和CEA。7.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于根据试纸条夹心结构捕获的量子点荧光强度和抗原浓度之间的关系，同时实现对两种肿瘤标志物的定性定量检测。8.根据权利要求1中所述的制备方法，其特征在于CEA和CA15-3标准抗原浓度为O?1000ng/mL。
【专利摘要】本发明涉及了一种新型的乳腺癌量子点免疫层析试纸条的制备方法。两种量子点荧光探针和其相对应的肿瘤标志物抗原Ag以及包埋在试纸条的另一种肿瘤标志物单抗Ab2，形成一种类似夹心的结构QDs-Ab1-Ag-Ab2，通过这种方法量子点试纸条可以同时检测两种及两种以上的肿瘤标志物，建立了一种新型的乳腺癌量子点免疫层析试纸条的制备方法。本发明的特点在于：可同时检测两种肿瘤标志物，大大简化了检测步骤，降低了检测成本，并且提高了肿瘤检测的准确性；选用CA15-3这种乳腺癌最重要的特异性标志物和CEA这种能反应乳腺癌存在的广谱标志物，对乳腺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计都有重要意义。
【IPC分类】G01N33/533, G01N33/558, G01N33/574
【公开号】CN105044339
【申请号】CN201510359569
【发明人】常津, 武玉东, 宫晓群, 张健, 姚颖异
【申请人】天津大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月25日