H = 7. 4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一个荧光比色皿中，取HC10的溶液，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样 边在荧光分光光度仪上检测（激发：373nm，狭缝：5nm/5nm)，随着HC10的加入，465nm处荧 光强度逐渐增强。荧光发射图见图1。
[0024] 实施例2
[0025] 配制pH = 7. 4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10, 200mM H202, A, N0, 02 ?，H0 ?，C102，I04，0N00，R00 ?，CN，HS，HS03 and Cys 的水溶液；在14个荧光比色皿中，各加入2mL的DMSO/HEPES (v/v，3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI的DMSO溶液，再分别加入1摩尔当量的HC10,以及100摩尔当量的各种分析物：H20 2, ％，N0, 02 ?，H0 ?，C102，I04，0N00，R00 ?，CN，HS，HS03 and Cys 在荧光分光光度仪上检测 (激发：373nm，狭缝：5nm/5nm)，绘制不同分析物对应的465nm处荧光强度的柱状图，（见图 2)。HC10使得FHMMI的荧光强度由63. 3变到3751，其它的分析物基本没有引起FHMMI荧 光强度的变化。
[0026] 经实验证明，其它分析物不干扰体系对HC10的测定。
[0027] 实施例3
[0028] 配制pH = 7. 4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一个荧光比色皿中，分别在加入0、10、20、30、40、50 y L的HC10溶液时，在荧光分 光光度仪上测定465nm(激发：373nm，狭缝：5nm/5nm)对应的荧光强度F为63. 32、588. 1、 1219、1837、2585、3156,以HC10浓度为横坐标，以相对荧光强度F - F。为纵坐标绘制图，F。 =63. 32,得到HC10浓度的工作曲线；线性回归方程为：F - FQ= 63. 06c，c的单位为yM ;
[0029] 实施例4
[0030] 配制pH = 7. 4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一个荧光比色皿中，取HC10的溶液31 yL，用微量进样器加到此比色皿中，同时在 荧光光谱仪上测定465nm的对应的荧光强度F为2056 (激发：373nm，狭缝：5nm/5nm)，相对 荧光强度F - FQ= 1992. 94,通过实施例4的线性回归方程，求得c = 31.60X 10 6m〇l/L， 偏差为1.9%。见图4。
[0031] 实施例5
[0032] 取 Vanilline (0? 304g, 2mmol)和 hexamethylenetetramine (1. 2equiv.)溶于 TFA， 将体系加热至l〇〇°C回流4h后向体系中加入lOmL 3M的HC1溶液，继续于100°C回流lh。冷 却至室温后用CH2Cl2(3X20mL)萃取，有机相经干燥、蒸干后得到4-hydroxy-5_methoxyiso phthalaldehyde 用于下一步反应。取 4-hydroxy-5_methoxyisophthalaldehyde (0? 18g, lm mol)、trimethylamine(lequiv.)和 1, 4-dimethylpyridin-1-ium iodide(0. 235g, lmmol) 溶于20mL乙醇后于90°C回流14h后冷却至室温，将溶剂减压蒸干。所的固体经柱色谱分离 (展开剂：乙醇/甲醇，100%~50%)得到产品？腿11。
[0033] 4匪R (DMS0-d6, 300MHz) : 3. 64 (s，3H)，4. 09 (s，3H)，6. 80 (s，1H)，7. 47 (s，1H) ,7. 60(d, 1H, J = 15. 6), 7. 87(d, 1H, J = 6. 3), 7. 99 (d, 1H, J = 15. 9), 8. 47 (d, 1H, J = 6. 3)，9. 35 (s, 1H)(图 5a) JC 匪R (DMS0-d6, 75MHz) : 45. 4, 54. 4, 115. 0, 117. 5, 120. 7, 1 42. 1，143. 2, 153.0, 154. 8, 171. 6, 186. 5(图 5b). Crystal data for C16H16N03I:crystal size:0. 14X0. 11 X0. 08mm3, space group Pnma. a = 6.385(13)A, b= 16.788(4)A,c = 7.974(16)A,V = 854. 1 (16) J3, Z = 2, T = 173K, 0nax= 27. 48° , 9558reflections measured, 3768unique (Rint= 0. 0317) Final residual for 25lparameters and 3768reflections with I>2 〇 (I) :&= 0? 0353, wR2= 0? 0915and G0F = 1. 084(图 5c) 〇
【主权项】
1. 一种荧光检测次氯酸的试剂：特征在于它是一种吡啶盐衍生物，名称为： (E)-4-(5-formyl-2-hydroxy-3-methoxystyryl)-1-methylpyridin-l-iumiodide， 缩写为2. -种检测次氯酸的方法：其特征在于，步骤为： (1)、配制pH=7. 4、浓度为IOmM的HEPES缓冲溶液，配制2mM FHMMI的DMSO溶液，配 制2mMHClO的水溶液； (2)、按体积比40:1，将体积比3:1、pH 7. 4的DMS0/HEPES溶液和FHMMI的DMSO溶液 加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，激发：373nm，狭缝：5nm/5nm，随着待 测样HClO的加入，465nm的荧光强度逐渐增强； (3)、取2mL的体积比3:1、pH 7. 4的DMS0/HEPES溶液、50 y LFHMMI的DMSO溶液加 到另一个荧光比色皿中，分别加入体积为〇、10、20、30、40、50 y L的HClO溶液时，在荧光分 光光度仪上测定465nm，激发：373nm，狭缝：5nm/5nm，对应的荧光强度F为63. 32、588. 1、 1219、1837、2585、3156,以HClO浓度为横坐标，以相对荧光强度F-F。为纵坐标绘制图，F。 =63. 32,得到HClO浓度的工作曲线；线性回归方程为：F-F。=63. 06c，c的单位为yM ; (4)、取2mL的DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI的DMSO溶液加入荧光 比色皿中，用微量进样器吸取VyL待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光 分光光度仪上检测（激发：373nm，狭缝：5nm/5nm)，将测得的荧光强度代入步骤（3)的线性 回归方程，得到浓度c，待测样品次氯酸的浓度Cwiw =2000XcX10 6/V，单位M。
【专利摘要】本发明提供了一种荧光检测次氯酸的试剂和方法。本发明提供的检测次氯酸的试剂，是一种吡啶盐类衍生物FHMMI((E)-4-(5-formyl-2-hydroxy-3-methoxystyryl)-1-methylpyridin-1-ium？iodide)。本发明提供的检测HClO的方法，是基于吡啶盐类衍生物FHMMI，在DMSO/HEPES(v/v,3:1,pH7.4)溶液中定量地检测次氯酸的含量。该检测方法，对次氯酸显示了高的灵敏性和选择性，检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。
【IPC分类】G01N21/64
【公开号】CN105203514
【申请号】CN201510611238
【发明人】阴彩霞, 岳永康, 霍方俊
【申请人】山西大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月23日