化）纤维素或三（4-甲基苯基氨基 甲酰化）纤维素手性固定相均由广州研创生物技术发展有限公司生产，也可以使用其它公 司生产的产品。
[0027] 二氢杨梅素手性色谱分离分析的条件 1、手性固定相的筛选 仪器与条件： 高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪 色谱柱(规格为150X4. 6mm):柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的涂 覆三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三（（S) -(α)-苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、 三（3,5_二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三（4-甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相 等，依次标记为Enantiopak?AD、Enantiopak?AS、Enantiopak? 0D和Enantiopak? 0J〇
[0028] 流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇=80 :0· 1 :20 (v/v/v) 流速：1· 〇mL·min1 柱温：25°C进样体积：1〇yL 样品浓度：〇· 5mg·mL1 检测波长：290nm 二氢杨梅素在不同手性固定相的手性分离结果如表1所示。对比拆分结果可知，二氢 杨梅素对映体在涂覆三（3, 5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相（Enantiopak? AD)上的分离度最大，容量因子最小，说明在上述流动相-条件下，二氢杨梅素样品的 洗脱较快，拆分效果最佳；在涂覆三（3,5_二甲基苯氨基甲酰化）纤维素手性固定相 (Enantiopak? 0D)上，二氢杨梅素对映体也实现基线分离，但样品在色谱柱上的保留强，洗 脱速度慢。
[0029] 表1在不同手性固定相上二氢杨梅素对映体的分离结果
2、 醇类的选择 仪器与条件： 高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪 色谱柱：Enantiopak?AD色谱柱（150X4. 6mm) 流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇、正己烷：三氟乙酸：异丙醇、正己烷：三氟乙酸：（乙 醇 + 异丙醇）=80 :〇· 1 :20 (v/v/v) 流速：1· 〇mL·min1 柱温：25°C 进样体积：1〇yL 样品浓度：〇· 5mg·mL1 检测波长：290nm 分离结果见表2所示。显然，随着醇的极性减小，二氢杨梅素样品在色谱柱的保留增 强，选择因子和分离度反而降低，故优选乙醇为改性剂。
[0030] 表2醇种类对二氢杨梅素对映体分离的影响
3、 流动相比例的选择 仪器与条件： 高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪 色谱柱：Enantiopak?AD色谱柱（150X4· 6mm) 流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇=60 :0· 1 :40、70 :0· 1 :30、75 :0· 1 :25、80 :0· 1 :20(v/ v/v) 流速：1. 〇mL·min1 柱温：25°C 进样体积：i〇yL 样品浓度：〇· 5mg·mL1 检测波长：290nm 如表3所示，随着流动相中乙醇的含量减少，二氢杨梅素在色谱柱的保留增强，洗脱变 慢，二氢杨梅素的分离度逐渐增大。当流动相中正己烷与乙醇比例为80 :20时，二氢杨梅素 的分离度达到最大。
[0031] 表3流动相比例对二氢杨梅素分离的影响
4、 三氟乙酸含量的确定 仪器与条件： 高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪 色谱柱：Enantiopak?AD色谱柱（150X4. 6mm) 流动相：正己烷：乙醇为80 :20,三氟乙酸的添加量占流动相体积的0%、0. 1%、0. 3%、 0. 5%〇
[0032]流速：1· 0mL·min1 柱温：25°C 进样体积：1〇yL样品浓度：〇·5mg·mL1 检测波长：290nm 如表4所示，增加流动相中三氟乙酸的含量从0到0. 1%，二氢杨梅素的洗脱加快，分离 度显著增大到1.95 ;然而，进一步增大三氟乙酸的含量，二氢杨梅素的分离效果反而变差。
[0033] 表4三氟乙酸含量对二氢杨梅素对映体分离的影响
5、 二氢杨梅素的分离实例 实施例1在Enantiopak?AD色谱柱上手性分离二氢杨梅素对映体 先将二氢杨梅素样品（纯度>98%)用流动相溶解配制成浓度为0. 50mg·ιΛ1的溶液； 在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Enantiopak?AD色谱柱（150X4. 6mm)、正己 烷：三氟乙酸：乙醇=80 :0. 1 :20 (v/v/v)为流动相、流速为1. 0mL·min\柱温为25°C和 检测波长为290nm的条件下对上述样品溶液进行色谱分离。
[0034] 如图1所示，二氢杨梅素样品分别在11. 26min和14. 25min出现2个色谱峰，分 离度为1. 95。
[0035] 实施例2在Enantiopak?AD色谱柱上手性分离二氢杨梅素样品 先将二氢杨梅素样品（纯度>98%)用流动相溶解配制成浓度为10mg·ιΛ1的溶液；在 安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Enantiopak?AD色谱柱（150X4. 6mm)、正己烧： 三氟乙酸：乙醇=80 :0. 1 :20 (v/v/v)为流动相、流速为1. 0mL·π?η\柱温为25°C对二氢 杨梅素样品进行色谱分离，采用CHIRALYSER-MP旋光检测器监测样品的分离。
[0036] 如图2所示，样品在11. 14min和12. 25min出现2个色谱峰，出峰时间与实施例 1相近。先洗脱的异构体旋光度为负值，后洗脱的异构体旋光度为正值。采用旋光检测器对 样品的检测说明二氢杨梅素样品在本发明所述的色谱条件下实现了手性分离。
【主权项】
1. 一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，包括如下步骤： 将二氢杨梅素样品溶于流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分 析； 所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液； 所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三（3, 5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三 ((S)- (a)-苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、三（3, 5-二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三 (4-甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相中的一种。2. 根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为60~80 :40~20。3. 根据权利要求2所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为80 :20。4. 根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述低级醇为乙醇或异丙醇。5. 根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述流动相中含有不大于〇. 5% (体积百分数）的三氟乙酸。6. 根据权利要求5所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述流动相中含有〇. 1% (体积百分数）的三氟乙酸。7. 根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述样品的浓度为不大于1. 〇 mg ? mL 1C38. 根据权利要求7所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述样品的浓度为〇. 5 mg ? mL 1C39. 根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于， 所述色谱条件中流动相的流速为I. 0 mL ? min \进样体积为10 y L，紫外检测波长为290 nm，色谱柱温度为25°C。
【专利摘要】本发明提供了一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，包括如下步骤：二氢杨梅素样品溶解在流动相中，在多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分析；所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三（（S）-（ɑ）-苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三（4-甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相中的一种。在本发明提供的手性分离分析方法中，二氢杨梅素对映体的分离度最大为1.95，选择因子最大为1.36。
【IPC分类】G01N30/34
【公开号】CN105241982
【申请号】CN201510635704
【发明人】章伟光, 李丽群, 范军
【申请人】广东研捷医药科技有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月30日