的合理选择，不但不会对凝血试剂的稳定性带来不利影响，反而可 显著提升其稳定性，尤其是以凝血酶为成分的TT测定试剂。另外，申请人还发现，凝血试剂 中，在添加了抗坏血酸类抗氧化剂、氨基酸类抗氧化剂等一般稳定剂的基础上，再添加本发 明的迷迭香酸时，效果明显优于一般稳定剂或迷迭香酸单独做稳定剂时的效果。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明做更进一步的详细说明：
[0032] 实施例1
[0033]迷迭香酸对TT测定试剂抗氧化性的影响
[0034] 室温条件下含有迷迭香酸的凝血酶时间测定试剂的抗氧化性试验
[0035] 配制Tris浓度50mM(pH7. 4)的缓冲液，向该缓冲液中，加入终浓度分别为2%的 BSA、0. 05%的叠氮酸钠、3. 5%的蛋氨酸、1. 5%的PEG、3%的甘露醇、2. 5%的麦芽糖、10mM 的氯化钙，其中除氯化钙外，其余均为质量体积分数。将上述混合液用0. 22微米滤膜过滤， 在滤液中加入人凝血酶冻干制剂，使终滤液中人凝血酶的浓度为25U/ml，得到TT测定试 剂。经CA1500凝血分析仪测定，该试剂的TT值为15. 8s。
[0036]对比试剂：研究表明，在含有凝血酶的凝血制剂中，高浓度的迷迭香酸的加入，不 但没有起到抗氧化作用，反而促进了蛋白质降解，随着浓度的降低，它们对凝血酶的降解作 用减弱或消失。基于试验研究，本发明迷迭香酸的加入浓度为0.01_2mM。具体实施中，在前 述TT试剂中加入1. 5mM的迷迭香酸，用CA1500血凝仪测定的即时结果为15. 7s。
[0037] 将制备的两种TT试剂，在37°C条件下保存，每天定时取样一次，检测两种试剂的 TT值。结果表明，在共计5天的测量期内，TT值有随时间逐渐变大的趋势。结果如表1所 不。
[0038] 表1室温条件下TT试剂的稳定性检测结果单位：秒
[0039]
[0041] 上述结果表明，在5天之内，仅仅采用蛋氨酸作为抗氧化剂的TT试剂的稳定性较 差。在ΤΤ试剂中加入迷迭香酸，可明显提升ΤΤ试剂的抗氧化性，进而提升试剂的稳定性能。[0042]实施例2
[0043] 含有迷迭香酸的凝血酶时间测定试剂的长期抗氧化性试验
[0044] 将前述不含迷迭香酸的ΤΤ试剂与含迷迭香酸的ΤΤ试剂，分装，在4°C条件下保存， 每个月取出一瓶，连取9个月，检测两种试剂的TT值。
[0045] 回归方程：
[0046] 3.5%蛋氨酸：7 = 0.0352叉+15.766;又=條.3&;(^ = 4.2%
[0047] 3.5%蛋氨酸与1.5禮的迷迭香酸：7 = 0.0187叉+15.726;又=16.12;(^ = 3.5%
[0048] 这说明在上述时间段内，由于迷迭香酸的加入，显著提升了TT试剂的抗氧化性 能。
[0049] 本发明重点提到的迷迭香酸，具有潜在的生物活性，包括它的抗氧化性能。在含有 凝血酶的制剂中加入迷迭香酸，可以对凝血酶的活性有一定的抑制，但在适量浓度存在的 前提下不会影响凝血机制。FanHY[14]等人通过动静脉分流模型的研究结果也证明了这一 点。因此，合适的酚酸类型及浓度，会提高凝血酶的抗氧化性能，进而提升试剂的长期稳定 性。
[0050] 另外，FIB与AT-ΠΙ试剂的主要成份为凝血酶，本发明中的迷迭香酸添加剂，同样 适应于这两种试剂的抗氧化性能。
[0051] 本发明申请的引证文件如下：
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【主权项】
1. 一种含迷迭香酸的凝血酶时间测定试剂，其特征在于，由含有25U/ml人凝血酶、2% 牛血清白蛋白、1. 5mM迷迭香酸、0.05%的叠氮酸钠、3. 5%蛋氨酸、1. 5%PEG、3%甘露醇、 2. 5%麦芽糖和10mM氯化钙的Tris-HCl缓冲液组成，其中的百分比均为质量体积比，pH为 7. 4。2. 根据权利要求1所述的含迷迭香酸的凝血酶时间测定试剂的制备方法，其特征在 于，步骤如下：配制Tris浓度50mM、pH7. 4的缓冲液，向该缓冲液中，加入终浓度分别为2% 的BSA、1. 5mM迷迭香酸、0. 05 %的叠氮酸钠、3. 5 %的蛋氨酸、1. 5 %的PEG、3 %的甘露醇、 2. 5 %的麦芽糖、10mM的氯化钙，其中除氯化钙外，其余均为质量体积分数；将上述混合液 用0. 22微米滤膜过滤，在滤液中加入人凝血酶冻干制剂，使终滤液中人凝血酶的浓度为 25U/ml，得到TT测定试剂。
【专利摘要】本发明涉及一种含迷迭香酸的凝血酶时间测定试剂，由含有25U/ml人凝血酶、2％牛血清白蛋白、1.5mM迷迭香酸、0.05％的叠氮酸钠、3.5％蛋氨酸、1.5％PEG、3％甘露醇、2.5％麦芽糖和10mM氯化钙的Tris-HCl缓冲液组成，其中的百分比均为质量体积比，pH为7.4。上述试剂的制备方法如下：配制Tris浓度50mM、pH7.4的缓冲液，向该缓冲液中，加入终浓度分别为2％的BSA、1.5mM迷迭香酸、0.05％的叠氮酸钠、3.5％的蛋氨酸、1.5％的PEG、3％的甘露醇、2.5％的麦芽糖、10mM的氯化钙，其中除氯化钙外，其余均为质量体积分数；将上述混合液用0.22微米滤膜过滤，在滤液中加入人凝血酶冻干制剂，使终滤液中人凝血酶的浓度为25U/ml，得到TT试剂。本发明采用迷迭香酸做稳定剂，可显著提高凝血酶时间测定试剂的抗氧化性能及稳定性能。
【IPC分类】G01N33/86
【公开号】CN105424946
【申请号】CN201511000031
【发明人】胡小伟, 黄翔宇, 王 华, 高军
【申请人】青岛古高生物科技有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年7月16日
【公告号】CN104991079A, CN104991079B