在 70%W下。原因可能是Wl.OmL甲醇溶解后，样液中甲醇含量过大，影响了净化柱的吸附，致 使部分目标物损失，而W1.OmL纯水溶解后，氮吹管内物质未被完全溶解，致使回收率偏低。
[0018] 固相萃取柱可选择市面的萃取柱，例如ClearnertPEP固相萃取小柱、OasisHLB 固相萃取柱等。根据本发明的实施例，在获得各类乳制品的第二提取物后，所述利用固相萃 取柱净化所述第二提取物，W获得净化物，包括:将所述第二提取物过化B固相萃取柱，接着 用水淋洗，抽干，加入6毫升甲醇洗脱，收集洗脱液，于40°C± 2氮气吹干，用山L的15 %乙 腊溶解氮气吹干后的残余物，满旋混匀，滤膜过滤，W获得所述净化物。在过柱之前，预先依 次用3mL甲醇和3mL超纯水活化该化B固相萃取小柱，根据本发明的一个实施例，利用的是 WatersOasis化B固相萃取小柱，过柱的流速可W按照该柱的推荐条件，例如1滴/3~4s， W使第二提取物中目标物结合到柱上。根据本发明的一个实施例，所使用的滤膜为0.22μπι。 上述具体的试剂的选择、使用量W及操作条件，包括萃取柱的选择和过柱的条件，是发明人 多次试验、组合优化的，利于操作简便、高效的净化各类乳制品中的包含氯霉素类残留的第 二提取物，获得可W进入液相色谱-串联质谱仪分析的净化物。
[0019] 根据本发明的实施例，所述利用液相-串联质谱仪分析所述净化物，其中的液相色 谱选择的色谱柱为WatersACQUITYUPLC肥ΗC18柱巧0mmX2.1mm，1.7皿)或性能相当者， 流动相为乙腊和水，采用梯度流动相，流动相梯度为15%乙腊-85%乙腊-15%乙腊。运里， 相较于国标法中的使用稳定的流动相，该色谱条件能够使各残留物的出峰时间适宜，利于 各氯霉素类高效检出。
[0020] 根据本发明的实施例，在对乳制品中的氯霉素类残留进行定量检测时，该方法还 包括制备标准曲线，根据所述利用液相-串联质谱仪分析所述净化物的色谱峰结果W及所 述标准曲线，定量所述氯霉素类残留。
【附图说明】
[0021] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方式的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0022] 图1是本发明的一个实施例中的氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考标准品色谱图 (0.5ppb)。
[0023] 图2是本发明的一个实施例中的氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考定性离子、定量离子 检出限色谱图。
【具体实施方式】
[0024] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0025] 需要说明的是，术语"第一"、"第二"仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相 对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者具有顺序关系。由此，限定有"第一"、 "第二"的特征可W明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描 述中，除非另有说明，"多个"的含义是两个或两个W上。
[0026] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可W通过市购获得的常规产品。
[0027] 实施例
[002引一、一般方法：
[0029] 1样品处理
[0030] 1.1生乳、发酵乳、灭菌乳、调制乳、己氏灭菌乳、含乳饮料等液体乳制品类
[0031 ] 称取样品5.0g左右（准确至O.Olg)，加入15mL乙酸乙醋，满旋Imin，然后超声 20min，在lOOOOr/min下离屯、lOmin，取7.5mL上清液置于试管中，在40°C±2°C下用氮气吹 干。用0.5mL甲醇溶解，用5mL超纯水稀释后满旋混匀，再加入5mL正己烧，满旋混匀，在 300化/min下离屯、2min，弃去上层正己烧，下层溶液过化B固相萃取小柱(预先用3mL甲醇， 3mL超纯水活化），等快干时用5mL水除杂，然后用真空累抽干(或用洗耳球吹干），加入6mL甲 醇洗脱，然后用氮气40°C±2下吹干，用ImL的15%乙腊水溶解，满旋，经0.22μπι微孔滤膜过 滤后用于LC-MS/MS分析。
[0032] 1.2乳粉类
[003引称取样品1.Og左右（准确至0.01g)，加入5mL纯水溶解，加入15mL乙酸乙醋，满旋Imin，然后超声20min,在lOOOOr/min下离屯、lOmin，取7.5mL上清液置于试管中，在40°C± 2 °C下用氮气吹干。用0.5mL甲醇溶解，用5mL超纯水稀释后满旋混匀，再加入5mL正己烧，满旋 混匀，在3000;r/min下离屯、2min，弃去上层正己烧，下层溶液过化B固相萃取小柱(预先用3mL 甲醇，3mL超纯水活化），等快干时用5mL水除杂，然后用真空累抽干(或用洗耳球吹干），加入 6mL甲醇洗脱，然后用氮气40°C± 2°C下吹干，用ImL的15 %乙腊水溶解，满旋，经0.22μπι微孔 滤膜过滤后用于LC-MS/MS分析。
[0034] 1.3稀奶油、奶油、无水奶油和奶酪类乳制品
[00巧]称取样品2.Og左右(准确至0.Olg)，加入5血超纯水和5mL正己烧满旋溶解，把上清 液去掉，加入15mL乙酸乙醋，满旋Imin，然后超声20min,在lOOOOr/min下离屯、lOmin,取 7.5mL上清液置于试管中，在40 ± 2°C下用氮气吹干。用0.5m巧醇溶解，用5mL超纯水稀释后 满旋混匀，再加入5血正己烧，满旋混匀，在3000;r/min下离屯、2min，弃去上层正己烧，下层溶 液过化B固相萃取小柱(预先用3mL甲醇，3mL超纯水活化），等快干时用5mL水除杂，然后用真 空累抽干（或用洗耳球吹干），加入6mL甲醇洗脱，然后用氮气40°C±2°C下吹干，用ImL的 15 %乙腊水溶解，满旋，经0.22皿微孔滤膜过滤后用于LC-MS/MS分析。
[0036] 2推荐性色谱条件
[0037] 2.1液相条件
[003引 色谱柱:WatersAC卵口YUPLC邸ΗC18柱(50mmX2.1mm，1.7皿)或性能相当者。
[0039] 柱溫:30°C。
[0040] 流速:〇.4mL/min。
[0041 ] 进样体积:5化。
[0042] 表1显示流动相梯度洗脱比例。
[0043] 表1梯度洗脱比例
[0044]
[0045] ~2.2质谱参考条件
[0046] 电离方式:ES(-)。
[0047] 电离电压:3.00KV。
[004引锥孔电压:30V。
[0049] 源溫度：120°C。
[0050] 去溶剂气溫度:450°C。
[0051 ] 去溶剂气流量:600L/虹。
[0052] 采集方式:多反应监测(MRM)。
[0053] 表2显示氯霉素、甲讽霉素和氯甲讽霉素定性、定量离子对和碰撞电压。
[0054] 表 2
[0055]
[0056] 3标准曲线的绘制
[0057] 将氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考标准溶液稀释成不同浓度的标准系列，分别进样， W浓度为横坐标，峰面积/峰高值为纵坐标，绘制标准工作曲线，通过回归计算求得回归方 程和相关系数，实验验证在0-1化g/mL浓度范围内浓度与峰面积/峰高间呈正相关，符合比 尔定律，相关性好，可用于外标法进行定量测定。标准系列浓度测定结果及线性回归方程及 相关系数如表3所示。
[0058] 表3氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考的线性范围、回归方程和相关系数
[0059]
[0060] 4分析结果的计算
[0061] 液相-质谱联用法通过标准曲线或单点法计算样品中氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考 的含量。对于高含量的样品，可通过稀释等方法将氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考的浓度控制 在适当的范围，保证测定液中氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考的浓度在线性范围内。
[0062] 试样中氯霉素、甲讽霉素、氣苯尼考的含量分别为X，W质量分