[0031] 所述Anti-Sm IgG磁分离试剂配制步骤：
[0032] 取10011^磁微粒，磁分离去上清，取用0.025111〇1/1的？!1值为4.5-6的2-吗啉乙磺酸 缓冲液1 OmL重悬，室温下混勾2~3h，加入0.5 -1. OmL新配制的浓度为1 Omg/mL的碳二亚胺和 N-羟基硫代琥珀酰亚胺的2-吗啉乙磺酸缓冲液，室温振荡混悬30-60min，使磁珠充分活化， 磁分离，去上清，用0. 〇25mol/L的pH值为4.5-6的2-吗啉乙磺酸缓冲液10mL重悬，加入4-8mg 的链霉亲和素，室温混悬16_20h，再进行磁分离，去上清，用百分比浓度0.5%的牛血清白蛋 白，百分比浓度0.5%脱脂奶粉和百分比浓度0.05%吐温-20的2-吗啉乙磺酸缓冲液10mL重 悬，室温条件下混勾2~3h，再磁分离，去上清，用磁微粒缓冲液稀释重悬到0.5mg/mL，在2~ 8°C下平衡16~24h，室温条件下混匀2~3h后，使用超声振荡仪将混悬液中聚集成团的磁珠 分散成单颗粒状态，得到所述Anti-Sm IgG磁分离试剂。
[0033]进一步的，本发明还提供所述清洗的制备步骤：
[0034] 加800mL纯化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl于1L容器中，搅拌至完全溶解，再加入 5g的吐温-20和5g的TritonlOO，搅拌，直至完全混匀，将pH值调为7.5-8.0，定容1L，使用0.2 μπι滤器过滤，将获得的所述清洗液保存在2-8°C待用，使用前将所述清洗液按照每7.5mL加 纯化水至100mL比例稀释并混匀后再使用。
[0035]本发明还提供了一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒的检测 方法，所述试剂盒的检测方法包括以下步骤：
[0036]步骤1.将Anti-Sm IgG校准品放到全自动化学发光免疫分析仪试剂舱中，得到由 全自动化学发光免疫分析仪输出的拟合曲线；
[0037]步骤2.将Anti-Sm IgG质控品放到上述分析仪测试位置，得到由全自动化学发光 免疫分析仪输出的所述质控品的测试发光值和通过步骤1得到的拟合曲线拟合得到Anti-Sm IgG质控品的浓度值；
[0038]步骤3.将待测样品放到上述分析仪测试位置，由所述分析仪自动按1:20将样品稀 释，得到由全自动化学发光免疫分析仪输出的待测样品的浓度值。
[0039] 进一步，本发明提供了所述的一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的 试剂盒的检测方法，所述步骤1、步骤2和步骤3均包括全自动化学发光免疫分析仪的全自动 检测步骤：
[0040] 步骤1)加20yL校准品或质控品或1:20稀释后的待测标本至检测管中；
[0041 ] 步骤2)加50yL的Anti-Sm IgG试剂1号至步骤1)所述检测管中，混匀后，37±0.5°C 温育l〇min;
[0042] 步骤3)加50yL的Anti-Sm IgG磁分离试剂至步骤2)所述检测管中，混勾后，37土 0.5°C温育5min，进行磁分离，去上清；
[0043]步骤4)加300yL的清洗液至检测管中，混匀，进行磁分离去上清；
[0044] 步骤5)重复步骤4)两遍；
[0045] 步骤6)加 150yLAnti-Sm IgG试剂2号至检测管中，混匀后，37±0.5°C温育10min， 进行磁分离去上清；
[0046]步骤7)加 300yL的清洗液至检测管中，混匀，进行磁分离去上清；
[0047] 步骤8)重复步骤7)两遍；
[0048]步骤9)加200yL的化学发光底物至检测管中，混匀，检测发光强度。
[0049]与现有技术相比，优越效果在于：
[0050] 1、所述试剂盒中的Anti-Sm IgG试剂1号、Anti-Sm IgG试剂2号、Anti-Sm IgG磁分 离试剂是该反应体系下的更优配方，给该试剂盒的使用效期及检测性能提供了有力保障； [0051] 2、所述试剂盒中的Anti-Sm IgG磁分离试剂参与反应时间仅为5分钟，可大限度地 避免非特异性吸附；
[0052] 3、所述试剂盒中的Anti-Sm IgG磁分离试剂为高分散性的超顺磁性微粒，保证磁
[0053]微粒在保存和使用过程中完全不会发生聚集；
[0054] 4、所述试剂盒中的Anti-Sm IgG试剂2号中的碱性磷酸酶可催化发光底物发光，且 5秒钟即达发光反应平台期，并保持平稳的光信号，保证高检测精度和效率。
[0055] 5、所述试剂盒中的Anti-Sm IgG试剂2号是碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体， 羊抗人多克隆抗体的使用，降低了试剂盒的成本；
[0056] 6、本试剂盒成功避免与人血清白蛋白的无交叉反应；
[0057] 7、所述试剂盒中的待测标本需要量为1:20倍稀释后的20yL标本，降低了试剂盒的 成本；
[0058] 8、所述检测方法在传统的膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上，将灵敏度和线 性范围在提高3-5个数量级、实现真正意义的定量检测，具有灵敏度高、特异性强、准确性好 等特点；
[0059] 9、所述检测方法配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动使用，操作简便，结 果判断客观等优点，对于临床诊断具有重要价值，应用前景广阔。
【附图说明】
[0060] 图1为本发明所述抗Sm抗体IgG的试剂盒的空白限评价测试中A，B点连点拟合曲线 示意图；
[0061] 图2为本发明所述的抗Sm抗体IgG的试剂盒线性范围评价的曲线图；
[0062] 图3为本发明所述的试剂盒的磁微粒化学发光定量测定血清检测结果与商品化的 抗Sm抗体IgG检测试剂盒酶联免疫吸附法检测结果的相关性评价；
[0063]图3中的横坐标X为对比方法的试剂盒样品测值，浓度单位为RU/mL，纵坐标y为所 述试剂盒样品测值，浓度单位为RU/mL。
【具体实施方式】 [0064] 实施例1
[0065] -种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒，该试剂盒包括:Anti- Sm IgG校准品、Anti-Sm IgG试剂1号、Anti-Sm IgG试剂2号、Anti-Sm IgG磁分离试剂、 Anti-Sm IgG质控品和清洗液。
[0066]本发明所述试剂盒的分析性能评价：
[0067] 1)准确度评价
[0068]将浓度约为200RU/mL，允许其浓度偏差为±20 %的抗Sm抗体IgG样品A加入到血清 样品B液中，所加入A的体积不超过总体积A+B的10%，根据公式（1)计算回收率R，本方法的 回收率在85-115%范围内，数据参见表1。
[0069]
[0070] R:回收率；
[0071] V:样品A液的体积；
[0072] Vo:样品B液的体积；
[0073] C:样品B液加入A液后的检测浓度；
[0074] Co:测量B液的浓度；
[0075] Cs:样品A液的浓度。
[0076] 表1-准确度评价一添加回收实验数据
[0077]
[0078] 2)空白限评价
[0079] 用零浓度校准品作为样品进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的RLU，RLU 为相对发光值，计算其平均值Μ和标准差SD，得出M+2SD所对应的RLU值，根据零浓度校准品 与相邻校准品之间的浓度-RLU值的结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应 的RLU值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为空白限。本方法的空白限不大于1 RU/mL。 具体数据参见表2，A、B点连点拟合曲线如图1所示。
[0080] 表2空白限评价
[0081]
[0082] 3)线性范围评价
[0083]将接近线性范围上限为200RU/mL的高值样品按一定比例稀释为至少5种浓度，其 中低值浓度的样品须接近线性范围的下限。按试剂盒说明书进行操作，对每一浓度的样品 均重复检测2次，计算其平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并 计算线性相关系数r，本方法的测量范围为2~200RU/mL，相关系数r应2 0.9900。数据参见 表3。曲线见图2。
[0084] 表3线性范围评价 [0085]
[0086」4)里复性评价
[0087] 取本实施例中的试剂盒重复检测浓度为20±4RU/mL和100±20RU/mL的样品各10 次，计算10次测量结果的平均值Μ和标准差SD，根据公式CV = SD/M X 100 %得出变异系数CV， 本方法变异系数(CV)不大于8%。数据参见表4。
[0088] CV = SD/MX100%......(2)
[0089] 式中：CV-变异系数;SD -10次测量结果的标准差;Μ -10次测量结果的平均值。
[0090] 表4重复性评价
[0091]
[0092]~5)批间差评价 '
' '
[0093] 将实施例的试剂盒取三批，每批试剂盒均测定浓度在20 ± 4RU/mL和100 ± 20RU/mL 范围内的样品，每批重复测定10次，计算30次测定结果的平均值(Μ)和标准差(SD)，根据公 式(3)计算变异系数(CV)，本方法变异系数(CV)不大于15%。数据参见表5。
[0094] CV = SD/MX100%......(3)
[0095] 公式中：CV-变异系数;SD-30次测定结果的标准差;Μ-30次测定结果的平均值。 [0096] 表5批间差评价
[0097] Luuyoj 0/十守开T土评切'
[0099] 取1份Anti-Sm IgG浓度含量为ORU/mL的样品，加入人血清白蛋白，使样品中人血 清白蛋白浓度为5000ng/mL，使用该试剂盒对该样品进行检测，测定样品