铵。
[0012]实施例4光电化学雌二醇传感器的制备方法
(1)将宽为Icm、长为4 cm的ITO导电玻璃作为工作电极，在电极表面滴涂8 yL的FeCo-NOT12溶胶，室温下晾干；
(2)将步骤(I)中得到的电极用缓冲溶液PBS清洗，继续在电极表面滴涂8uL 10 pg/mL的雌二醇抗体溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(3)将步骤(2)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂8uL浓度为100 pg/mL的牛血清白蛋白溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(4)将步骤(3)中得到的电极用I3BS清洗，继续在电极表面滴涂2uL的戊二醛溶液，40C冰箱中保存晾干；
(5)将步骤(4)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂6uL浓度为20 yg/mL的碱性磷酸酶溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(6)将步骤(5)中得到的电极用PBS清洗，在40C冰箱中保存晾干后，即制得光电化学雌二醇传感器；
所述的FeCo-NOT12溶胶为将50 mg的FeCo-NOT12粉末溶于10 mL超纯水中，并超声30 min后制得的水溶胶；
所述的PBS为10mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，所述的磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4 ；
所述的戊二醛溶液为体积比为2.5%的戊二醛水溶液。
[0013]实施例5光电化学雌二醇传感器的制备方法
(1)将宽为Icm、长为4 cm的ITO导电玻璃作为工作电极，在电极表面滴涂10 yL的FeCo-NOT12溶胶，室温下晾干；
(2)将步骤(I)中得到的电极用缓冲溶液PBS清洗，继续在电极表面滴涂10uL 10 Hg/mL的雌二醇抗体溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(3)将步骤(2)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂10uL浓度为100 pg/mL的牛血清白蛋白溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(4)将步骤(3)中得到的电极用I3BS清洗，继续在电极表面滴涂3uL的戊二醛溶液，40C冰箱中保存晾干；
(5)将步骤(4)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂8uL浓度为SOlIgAiUa碱性磷酸酶溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(6)将步骤(5)中得到的电极用PBS清洗，在4 0C冰箱中保存晾干后，即制得光电化学雌二醇传感器；
所述的FeCo-NOT12溶胶为将50 mg的FeCo-NOT12粉末溶于10 mL超纯水中，并超声30 min后制得的水溶胶；
所述的PBS为10 mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，所述的磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4；
所述的戊二醛溶液为体积比为2.5%的戊二醛水溶液。
[0014]实施例6光电化学雌二醇传感器的制备方法
(1)将宽为Icm、长为4 cm的ITO导电玻璃作为工作电极，在电极表面滴涂12 yL的FeCo-NOT12溶胶，室温下晾干；
(2)将步骤(I)中得到的电极用缓冲溶液PBS清洗，继续在电极表面滴涂12uL 10 Hg/mL的雌二醇抗体溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(3)将步骤(2)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂12uL浓度为100 pg/mL的牛血清白蛋白溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(4)将步骤(3)中得到的电极用I3BS清洗，继续在电极表面滴涂4uL的戊二醛溶液，40C冰箱中保存晾干；
(5)将步骤(4)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂10uL浓度为SOyg/mL的碱性磷酸酶溶液，4 0C冰箱中保存晾干；
(6)将步骤(5)中得到的电极用PBS清洗，在40C冰箱中保存晾干后，即制得光电化学雌二醇传感器；
所述的FeCo-NOT12溶胶为将50 mg的FeCo-NOT12粉末溶于10 mL超纯水中，并超声30 min后制得的水溶胶；
所述的PBS为10 mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，所述的磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4；
所述的戊二醛溶液为体积比为2.5%的戊二醛水溶液。
[0015]实施例7实施例1?6制备的光电化学雌二醇传感器，应用于雌二醇的检测，步骤如下:
(1)标准溶液配制:配制一组包括空白标样在内的不同浓度的雌二醇标准溶液；
(2)工作电极修饰:将如权利要求1所述的制备方法所制备的光电化学雌二醇传感器为工作电极，将步骤(I)中配制的不同浓度的雌二醇标准溶液分别滴涂到工作电极表面，4 0C冰箱中保存；
(3)工作曲线绘制:将饱和甘汞电极作为参比电极，铂丝电极作为辅助电极，与步骤(2)所修饰好的工作电极组成三电极系统，连接到光电化学检测设备上;在电解槽中先后加入15mL pH=9.6的Tris-HCl缓冲溶液和5 mL 10 mmol/L的L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐AAP溶液;采用i_t测试手段，根据所得的光电流值与雌二醇标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线;雌二醇的线性检测范围为:0.001?100 1^/1111^，检出限为:0.3 pg/mL；
(4)实际样品检测:用待测样品代替步骤(I)中的雌二醇标准溶液，按照步骤(2)和(3)中的方法进行检测，根据响应信号的强度值和工作曲线，得到待测样品中雌二醇的含量。
【主权项】
1.一种基于磁性纳米光敏材料的光电化学雌二醇传感器的制备方法，所述的磁性纳米光敏材料为铁和钴双金属原位复合的氮掺杂二氧化钛纳米片FeC0-NOT12，所述的光电化学雌二醇传感器由工作电极、FeCo-N@Ti02、雌二醇抗体、牛血清白蛋白、戊二醛、碱性磷酸酶组成； 其特征在于，所述的制备方法包括以下制备步骤: a.FeCo-NOT12的制备； b.光电化学雌二醇传感器的制备； 其中，步骤a制备FeCo-NOT12的具体步骤为: 首先，取0.8 mmol铁盐、0.8?1.2 mmol钴盐和I mmol钱盐加入到5 mL钛酸四丁酯中，搅拌过程中，缓慢加入0.5-0.8 mL氢氟酸，160-200 °C下在反应釜中反应18?24小时，冷却至室温后，用超纯水和无水乙醇离心洗涤三次后，50°C下真空干燥;然后，将研磨的粉末放入马弗炉中，升温速度为卜3 °C/min，480?560°C下在氮气保护下，煅烧10?60 min;最后，将煅烧后的粉末冷却至室温，即制得FeCo-NOT12 ； 所述的铁盐选自下列之一:硫酸铁、氯化铁、硝酸铁； 所述的钴盐选自下列之一:硫酸钴、氯化钴、硝酸钴； 所述的铵盐选自下列之一:硫酸铵、氯化铵、硝酸铵、碳酸铵； 步骤b制备光电化学雌二醇传感器的具体步骤为: (1)以ITO导电玻璃为工作电极，在电极表面滴涂8?12uL的FeC0-NOT12溶胶，室温下晾干； (2)将步骤(I)中得到的电极用缓冲溶液PBS清洗，继续在电极表面滴涂8?12pL 10 μg/mL的雌二醇抗体溶液，4 0C冰箱中保存晾干； (3)将步骤(2)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂8?12pL浓度为100 pg/mL的牛血清白蛋白溶液，4 0C冰箱中保存晾干； (4)将步骤(3)中得到的电极用I3BS清洗，继续在电极表面滴涂2?4pL的戊二醛溶液，40C冰箱中保存晾干； (5)将步骤(4)中得到的电极用PBS清洗，继续在电极表面滴涂6?10pL浓度为SOyg/mL的碱性磷酸酶溶液，4 0C冰箱中保存晾干； (6)将步骤(5)中得到的电极用PBS清洗，在40C冰箱中保存晾干后，即制得光电化学雌二醇传感器； 所述的FeCo-NOT12溶胶为将50 mg的FeCo-NOT12粉末溶于10 mL超纯水中，并超声30min后制得的水溶胶； 所述的PBS为10mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，所述的磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4 ； 所述的戊二醛溶液为体积比为2.5%的戊二醛水溶液。2.如权利要求1所述的制备方法所制备的光电化学雌二醇传感器的应用，其特征在于，包括如下应用步骤: a.标准溶液配制:配制一组包括空白标样在内的不同浓度的雌二醇标准溶液； b.工作电极修饰:将如权利要求1所述的制备方法所制备的光电化学雌二醇传感器为工作电极，将步骤a中配制的不同浓度的雌二醇标准溶液分别滴涂到工作电极表面，4 0C冰箱中保存； C.工作曲线绘制:将饱和甘汞电极作为参比电极，铂丝电极作为辅助电极，与步骤b所修饰好的工作电极组成三电极系统，连接到光电化学检测设备上；在电解槽中先后加入15mL pH=9.6的Tris-HCl缓冲溶液和5 mL 10 mmol/L的L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐AAP溶液;采用i_t测试手段，根据所得的光电流值与雌二醇标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线； d.雌二醇的检测:用待测样品代替步骤a中的雌二醇标准溶液，按照步骤b和c中的方法进行检测，根据响应信号的强度值和工作曲线，得到待测样品中雌二醇的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种光电化学雌二醇传感器的制备方法。属于新型纳米功能材料与生物传感器技术领域。本发明首先制备了一种新型二维片状的磁性纳米光敏材料FeCo-NTiO2，利用该材料的良好的生物相容性、大的比表面积和铁磁性，负载上雌二醇抗体，然后通过戊二醛的交联作用固定碱性磷酸酶，在进行检测时，由于碱性磷酸酶可以催化L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐AAP原位产生L-抗坏血酸AA，并进而为光电检测提供电子供体，再利用抗体与抗原的特异性定量结合对电子传输能力的影响，使得光电流强度相应降低，最终制得了成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测雌二醇的无标记的光电化学生物传感器。
【IPC分类】G01N27/30
【公开号】CN105572197
【申请号】CN201610101724
【发明人】张勇, 孙旭, 魏琴, 李燕, 马洪敏
【申请人】济南大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年2月25日