总离子流图（TIC图），以及多肽Duck_2和Sheep_5的三 个子离子选择离子流图。结果表明，混合肉样样本中检测出羊肉成分及鸭肉成分。
[0055] 表2样品检测的离子对信息
[0058]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 基于液相色谱串联质谱技术测定多种动物源性肉类的方法，其特征在于，包括样品 前处理，各种标准肉样特征多肤的筛选W及高效液相色谱-质谱联用检测待测肉样中的特 征多肤的步骤。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品前处理包括W下步骤： 1) 提取样品总蛋白：将待测肉样剪碎或分割成小块，向2g样品中加入5mL提取液，冰水 浴均质Imin，再用5mL提取液洗刀头合并，12000;r/min离屯、20min，取上清液； 2) 还原及烷基化:取10化L上清液，加入50mmol/L二硫苏糖醇溶液10化，56°C振荡反应 化，放置室溫，加入lOOmmol/L舰乙酷胺溶液20化，暗处反应30min，再加入50mmol/L二硫苏 糖醇溶液15化，暗处反应15min; 3) 酶切：向上述反应体系中加入25mmol/L Tris-肥1，抑8.0缓冲溶液75化L，然后加入 20iig膜蛋白酶，调节抑为8.0，37°C反应过夜；向上述酶解液中加入0.4%TFA终止反应，并加 入ImL水，所得溶液用于过柱除盐； 4) 过柱除盐：，将步骤3)所得溶液用Cis固相萃取柱除盐，收集洗脱液过0.22WI1滤膜，准 备上机； 其中，步骤1)中所述提取液为0.05mol/L TriS-HCl巧mol/L尿素巧mol/L硫脈，pH 8.0。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4)中依次用乙腊、50%乙腊/水、0.1% TFA活化Ci8固相萃取柱，将步骤3)所得溶液上样，再依次用0.1 % TFA，0.5 %乙酸清洗，最后 用ImL 60%乙腊+0.5%乙酸洗脱。4. 根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，利用Easy nLC 1000液相色谱系 统和Q Exactive HF质谱仪检测并筛选各种标准肉样中的特征多肤，具体步骤如下： 色谱条件:Ci8色谱柱内径75皿，流动相:A相为0.1%FA;B相为0.1%ACN;色谱梯度为： Omin，3 % B相；2min，8 % B相；48min，22 % B相；53min，40 % B相；55min，80 % B相；59min，80 % B 相;61min，0 % B相;65min，0 % B相，进样量为10化，每个样品至少采集S次数据； 质谱条件：喷雾电压2100V，毛细管溫度275°C ,Full Scan分辨率60000,扫描质量范围 为350~1600，AGC值为化6，口时间为50ms，二级扫描，topN为30，分辨率为15000，AGC值为 lE5aT时间为60ms，NCE为27; 质谱数据分析：用Maxquant对各种标准肉样进行非标记定量分析，检索加 iprot数据 库，最多漏切位点设为2,可变修饰为Oxidation,Acetylation,固定修饰为 (^irbamidomethyl;选择异亮氨酸等于亮氨酸设置，peptide for quanti1:ation选择all，其 他参数为默认值；利用非标记定量的结果，选取每个物种中独有的多肤信息，去掉含有 MissCleavage的多肤，获得相对特异性多肤，即各种标准肉样的特征多肤。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，高效液相色谱-质谱联用检测待测肉样中 的特征多肤，并与标准肉样的特征多肤进行比较，从而判定对应的肉样组分，具体步骤如 下： 液质联用=重串联四极杆质谱仪进行检测： 色谱条件:色谱柱Hypersil GOLD Cis，规格2. ImmX 100mm，1.9皿;流速0.2mL/min;柱溫 40°C，进样量50化;流动相:A相0.1 %FA/出0，B相0.1 %FA/ACN，色谱梯度为:0~0.2min，3% ~10%B;0.2~16min，10% ~40%B;16~17min，40% ~80%B;17.5~18.5min，80% ~3% B; 质谱条件:喷雾电压3500V;銷气38A;rb;辅气ISArb;离子传输管溫度275°C ;离子源雾化 溫度380°C ;传输线溫度275°C ;离子源溫度380°C ;采集周期为0.3s;碰撞气为1. SmTorr;Ql 和Q3分辨率均为0.7; 通过对每个物种的特征多肤进行母离子扫描W及SRM扫描，根据保留时间，多个定性离 子匹配W及丰度信息，最终判定对应的肉样组分。6. 根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述待测肉样来自猪肉、鸡肉、牛 肉、鸭肉、羊肉、驴肉、兔肉、马肉。7. 基于权利要求1-6任一项所述方法获得的不同动物源性肉类的特征多肤，其特征在 于，羊肉、鸭肉、牛肉、猪肉、鸡肉的多肤信息分别如下：577.182 659.797 6.75 正模式 23 duck_3 579,175 484.571 8.65 正摸式 23 579.175 718.823 8.71 正模式 巧 579.175 831.981 8.71 正模式 23 duck_4 672.752 488.559 7.33 正摸式 26 672.752 601.718 7.33 正模式 26 672.752 817.910 7.巧 正模式 26 duek_5 714.813 417.441 8.27 正摸式 28 714.813 530.600 卷五 1 正模式 28 714.813 659.714 8.27 正模式 28 duck_6 715,851 418.466 7.24 正模式 28 715.851 517.598 7.24 正摸式 28 715.851 675.753 7.21 正模式 28 化浊_7 808.W7 435.541 10.74 正模式 31 808.937 635.777 10.74 正模式 31 808.937 692.829 10.74 .正摸式 31 duck_8 822.905 490.529 13.43 化-模义 31 822.905 58^).661 13,43 正校式 31 822.905 704.748 13.43 正摸式 31 ducl、__9 949,643 496.535 14.52 止假乂 35 9'49.643 624.665 14.55 正摸式 3:5 949.643 S20.912 14.52 正模式 35 dueklO 1039.681 475.561 14.64 正模式 35 1039.681 546.634 14.64. 开―模式 35 1039.681 (，巧.797 14.的 正模式， 35 beefj 475.758 537.632 8.53 正模式 19 475.758 608.710 8.53 正模式 19 475.758 709.815 8.53 正摸式 19 beef 2 582.670 494.W2 8.83 正模式 23 582.670 595.667 8.83 正模式 23 582.670 708.825 8.83 正模式 23 beef_3 663.788 407.巧8 11.28 正模式 26 663.788 506.659 1 1.28 .开投式 2(、 663.788 563.71 1 11.28 正模式 26 beef_4 681.780 446.5)9 14.57 止愤式 26 681.780 561.607 14.57 :开-校式 26 681.780 674.W5 14.57 正摸式 M beef_5 744,365 446.519 8.64 止横式 29 744.365 :)47.624 8.64 t 慎式 29 744.365 604.675 8.64 正摸式 29 bcef_6 784.859 425.460 13.24 止模式 30 784.859 554.575 13.24 正摸式 30 784.859 717.749 13.24 正摸式 30 bccf_7 8:31.始4 522.594 12.64 止模式 32 831.924 621.726 12.64 正模式 33 831.924 7%.814 12.64 止模式 32 bee^8 902.006 487.528 11.3 正模式 34 902.006 558.606 11.3 正樸式 34 902.006 687.721 11.3 正模式 34 bccl__9 1023.100 449.480 11.46 正模式 始 1023.100 520.558 11.4技 正模式 教 1023.100 649.673 11.46 正模式 35 pig_l 470.746 496.585 3.72 止模式 19 470.746 611.673 3.72 正模式 19 470.746 6W.750 3.72 化模式 10 pig_2 536.775 488.516 7.13 正模式 22 536.775 587.6478 7. J 3 正模式 22 536.775 644,锁 9 7.13 正模式 22 pig_3 547.322 487.615 8.46 正模式 22 547.322 624.754 8.46 正模式 22 547.322 737.913 8.46 正模式 22 pig 4 658.211 416.496 6.44 正模式 26 658.211 545.61] 6.4! 正模式 26 658.211 602.662 6.44 正模式 26 pig_5 676.807 407.528 11.32 正模式 26 676.807 520.686 11.32 正模式 26 676.807 5 巧.738 1132 正模式 26 pig_6 717.855 559.721 15.07 正模式 28 717.855 672.879 15.07 正模式 28 717.855 786.037 15.07 正模式 2S pig_7 879.980 484.614 8.94 正模式 33 879.W0 583.746 8.94 正模式 33 879.980 680.861 8,94 正模式 33 pig_S 941.598 475.561 18.39 止模式 35 941.598 574.692 18.-巧 正模式 ：)5 941.598 702.82： 18.36 正模式 巧 chicken! 609.674 418.426 9.93 正模式 24 609.674 531.584 9.93 正模式 24 609.674 630.716 9.93 正模式 24 化icken_2 718.373 448.452 8.00 正模式 28 718.373 549.556 8.00 正模式 28 718.373 680.754 8.03 正模式 28 chicken 3 783.396 'W8.558 5.60 正模式 30 783.396 629.755 5.60 正模式 30 783.396 728.886 5.60 正模式 30 chieken_4 794.930 407.528 10.49 iEtM.it 30 794,%0 520.686 10.49 正模式 30 794/)30 607.764 10.49 止模式 30
【专利摘要】本发明提供一种基于液相色谱串联质谱技术测定多种动物源性肉类的方法，包括样品前处理，各种标准肉样特征多肽的筛选以及高效液相色谱-质谱联用检测待测肉样中的特征多肽等步骤。采用本发明提供的方法可实现对多种动物源性肉类成分的鉴别，该技术充分发挥液质质谱强大的扫描功能，通过监测选择离子监测模式实时采集信号，利用二级子离子强度触发，采集对应母离子二级碎裂全扫描谱图，获得更确切的定性信息的功能，避免复杂基质的干扰，降低假阳性概率，此外该方法前处理简单，便于批量样品的操作。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105588909
【申请号】CN201510937689
【发明人】李莹莹, 张颖颖, 赵文涛, 马燕红, 王守伟, 郭文萍, 任南, 李志刚, 李慧晨, 段姗姗
【申请人】中国肉类食品综合研究中心
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2015年12月15日